背景:法洛四聯(lián)癥是一種典型的先天性心臟畸形,其約占全部先天性心臟畸形的3%-5%,右心室流出道梗阻幾乎可以見于全部的法洛四聯(lián)癥患者。近年來右心室流出道發(fā)育異常和心肌細胞分化異常與法洛四聯(lián)癥的關系被廣泛報道,然而,同時包括大規(guī)模臨床樣本和體外實驗的研究很罕見。HA117是一個新的抗分化長鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA,LncRNA),先前的研究表明HA117在體內和體外都與細胞分化密切相關。方法:為了探究HA117和法洛四聯(lián)癥的潛在關系,我們收集了84例行法洛四聯(lián)癥一期根治術患者的右心室流出道組織樣本,我們檢測了標本HA117表達量水平并且收集了術前基線水平、圍術期數(shù)據(jù)、短期隨訪數(shù)據(jù),用以完成涉及橫斷面和短期預后的研究。我們觀察了HA117和其臨近下游基因DPF3的表達量以及DPF3啟動子區(qū)甲基化水平。在細胞實驗中,我們利用5'-氮雜胞苷和全反式維甲酸誘導了間充質干細胞向心肌細胞分化,并對心肌細胞的標志物、細胞干性標志物和細胞行為學進行了檢測。結果:McGoon比值、Nakata指數(shù)和左室末期舒張容積指數(shù)在HA117高表達組患者中降低,并且和HA117表達量呈負相關。HA117高表達組圍手術期的住院天數(shù)和ICU時間都更長,患者術后6月動脈血氣氧飽和度的提升在HA117高表達組相對較小。HA117高表達組DPF3啟動子區(qū)甲基化水平升高。在細胞實驗中,干擾HA117的表達可以使得心肌細胞標志物cTnT和Cx43表達升高,使得細胞干性標志物下調,同時可以促進細胞侵襲能力和遷移能力,降低增殖能力。結論:HA117是法洛四聯(lián)癥畸形嚴重程度的危險因素,是法洛四聯(lián)癥短期預后的風險因素,下調HA117可以促進干細胞向心肌樣細胞分化,降低干細胞干性,并且影響細胞行為學。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

鏡下觀察。 和 ISH 檢測 HA117 表達情況測右心室流出道組織中 HA117 的表達情況，我們采用了 QRNA 表達量，并通過原位雜交確認（圖 1.1）。 原位雜交可心室流出道組織中 HA117 在胞核表達（圖 1.1-A）。QPCR 得到者 HA117 表達量為 4.812 ± 1.319。為便于分組，取 84 名患者達量均值為 1.0（圖 1.1-B）。根據(jù) HA117 的相對表達將患者分組臨界值。 在所有 84 位患者（55 位男性和 29 位女性）中，相對表達量超過 1.0。

35圖 2.1 HA117 和 DPF3 mRNA 在組織的表達情況igure 2.1 Expression of HA117 and DPF3 in clinical sampl四聯(lián)癥患者右心室流出道組織中是否存在心肌細QPCR 檢測了右心室流出道組織中的不成熟心 的表達量。TOF 組患者 GATA-4 mRNA 的相對表患者的表達水平在均值以上，49 例在均值以下。對量為 1.000±0.330。TOF 組和對照組 GATA-4 mRN

圖 2.3 cTnT 蛋白在組織樣本中的表達Figure 2.3 Expression of cTnT proteins by IHC2.3 蘇木精-伊紅染色檢測組織結構為了觀察TOF組和對照組患者右心室流出道的心肌結構，我們采用HE染色，可見法洛四聯(lián)癥患者心肌組織肥大、核分散，有不成熟細胞核。對照組心肌組織結構齊整、核集中（圖 2.4）。
【參考文獻】

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本文編號：2888959