過敏性紫癜(Henoch-Sch(?)nlein purpura,HSP)是一種以小血管為主要病變的III型變態(tài)反應(yīng)性疾病,是免疫復(fù)合物介導(dǎo)的白細(xì)胞碎裂性血管炎。因病理上以Ig A沉積于受累毛細(xì)血管及小血管為特征,2012 International Chapel Hill Consensus Conference(CHCC2012)新的血管炎分類標(biāo)準(zhǔn)將HSP更名為Ig A血管炎,分類上隸屬于小血管炎下的免疫復(fù)合物性血管炎[1]。HSP常累及皮膚、關(guān)節(jié)、消化道、腎臟,其中又以腎臟受累的病情最為嚴(yán)重。HSP是兒童最常見的血管炎,發(fā)病率逐年增加,病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,故對(duì)病因和發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步研究,尤其對(duì)病因的研究可從源頭上減少發(fā)病。HSP的觸發(fā)因素雖然未知,但感染、疫苗接種、自身免疫、食物過敏原或其它因素等均可能是其觸發(fā)因素;其發(fā)病機(jī)制目前認(rèn)為是多因素的,系免疫異常、環(huán)境因素和個(gè)體遺傳綜合作用的結(jié)果。感染和食物因素被認(rèn)為是兒童HSP主要的致病因素。非Ig E介導(dǎo)的食物過敏反應(yīng)機(jī)制尚未完全清楚,Ig G,Ig A,Ig M,T淋巴細(xì)胞及其他的免疫活性細(xì)胞、細(xì)胞因子、補(bǔ)體等均可參與其發(fā)病,涉及II型、III型或IV型變態(tài)(過敏)反應(yīng)。Ig A介導(dǎo)的III型變態(tài)(過敏)反應(yīng)是HSP的免疫病理特征。牛奶、雞蛋是兒童常見食物,其與HSP的相關(guān)性研究多是采用食物特異性Ig E/Ig G檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的食物特異性Ig E/Ig G抗體。因HSP是一種Ig A血管炎,故研究食物特異性Ig A抗體在HSP中的作用有一定的意義。目前國(guó)內(nèi)外缺乏食物特異性Ig A抗體在HSP中作用的研究報(bào)道,亦未見食物蛋白抗原成分在HSP血液及皮膚組織等的研究報(bào)道。本課題組希望通過此次研究,能夠明確牛奶、雞蛋等食物抗原及其特異性Ig A抗體與兒童HSP的相關(guān)性,為食物在HSP中的作用提供一定的理論依據(jù)。第一部分過敏性紫癜患兒血液中食物特異性Ig A抗體的水平及意義目的:通過檢測(cè)HSP患兒和對(duì)照兒童外周血清牛酪蛋白(casein,CA)、牛β-乳球蛋白(bovineβ-lactoglobulin,BLG)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及雞蛋卵清蛋白(ovalbumin,VOA)四種食物蛋白特異性Ig A抗體的水平,并分析其臨床意義,探討上述食物蛋白特異性Ig A抗體在兒童HSP中的作用。方法:收集2016年4月至2017年9月期間在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診療并符合本研究納入標(biāo)準(zhǔn)的兒童的外周血清標(biāo)本。研究對(duì)象:HSP患兒組160例,為急性期HSP患兒,其中有36例在恢復(fù)期配合來(lái)院復(fù)查并同意血液采集;正常對(duì)照組106例,為腹股溝斜疝、包皮過長(zhǎng)及包莖的擇期手術(shù)兒童;疾病對(duì)照組共140例,包括以下5組:38例非全身型幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(juvenile idiopathic arthritis,JIA)患兒,24例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患兒,17例Ig A腎病(Ig A nephropathy,Ig AN)患兒,30例遷延性或慢性腹瀉患兒(稱為腹瀉組),31例腹痛起病的胃炎、十二指腸球炎或/和消化性潰瘍患兒(稱為腹痛組)。同時(shí)收集HSP患兒臨床資料、實(shí)驗(yàn)室檢查資料、腎活檢病人的病理資料及各對(duì)照組兒童的基本資料。首先構(gòu)建檢測(cè)食物蛋白特異性Ig A抗體的ELISA體系,并用以檢測(cè)各組兒童上述食物蛋白特異性Ig A抗體的水平,結(jié)合HSP患兒臨床及病理指標(biāo)分析其臨床意義。結(jié)果:1.成功建立了檢測(cè)食物蛋白特異性Ig A抗體的ELISA體系。本研究每次試驗(yàn)擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的參數(shù)大小差別很小,且回歸方程的R20.996,提示所建立ELISA體系的穩(wěn)定性高及回歸方程的擬合優(yōu)度高;每次試驗(yàn)空白孔和新生兒陰性血清的OD值絕大多數(shù)小于0.1,均未超過0.2,說明試驗(yàn)的有效性和結(jié)果的可用性。2.正常對(duì)照組兒童外周血中存在基礎(chǔ)水平的食物蛋白特異性Ig A抗體。四種食物蛋白特異性Ig A抗體水平在多組間比較,CA、BLG、VOA特異性Ig A抗體在各組間的比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.001)。其中HSP患兒VOA特異性Ig A抗體水平高于正常對(duì)照組、腹瀉組、腹痛組、JIA組及SLE組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.01)。HSP患兒BLG特異性Ig A抗體水平高于正常對(duì)照組、腹瀉組、腹痛組及JIA組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.001)。HSP患兒CA特異性Ig A抗體水平比正常對(duì)照組的水平高,但低于Ig AN組的抗體水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。本研究同時(shí)表明Ig AN組的CA特異性抗體水平除了與SLE組的水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,高于其它各組的水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。3.36例HSP患兒急性期和恢復(fù)期食物蛋白特異性Ig A抗體的配對(duì)檢測(cè)結(jié)果顯示,恢復(fù)期CA、BLG、BSA、VOA四種蛋白特異性Ig A抗體水平均較急性期相應(yīng)抗體水平下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.001)。4.臨床類型不同的患兒各組間比較,腎型HSP患兒的BLG特異性Ig A抗體水平低于關(guān)節(jié)型HSP患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);混合型和腎型HSP患兒的VOA特異性Ig A抗體水平低于關(guān)節(jié)型HSP患兒,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。5.食物蛋白特異性Ig A抗體與食物特異性Ig G抗體的相關(guān)性分析結(jié)果顯示CA、BSA特異性Ig A抗體與牛奶Ig G抗體水平呈正相關(guān)(P均0.05)。VOA特異性Ig A抗體與蛋清/蛋黃Ig G抗體水平呈正相關(guān)(P0.05)。6.腎型HSP患兒中有17例行腎活檢檢查,BSA特異性Ig A抗體與腎小球Ig A沉積呈負(fù)相關(guān)(P0.05),與腎小球Fib沉積及病理分級(jí)之間無(wú)相關(guān)性。CA、BLG、VOA特異性Ig A抗體與腎小球Ig A沉積、腎小球Fib沉積及病理分級(jí)之間均無(wú)相關(guān)性(P均0.05)。7.HSP患兒血清總Ig A相關(guān)影響因素的多元回歸分析結(jié)果表明,在可能影響其水平的23項(xiàng)因素中,能進(jìn)入回歸模型的因素按作用貢獻(xiàn)大小依次為CA特異性Ig A抗體、VOA特異性Ig A抗體、BSA特異性Ig A抗體、年齡�；貧w模型中回歸平方和為57.605,殘差平方和為55.013,總計(jì)為112.618,可見回歸平方和占總計(jì)平方和的一半以上,表明血清總Ig A一半以上的變異由該四項(xiàng)因素引起,其中BSA特異性Ig A抗體在回歸模型中的作用是負(fù)的,其余三個(gè)作用是正的。8.受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線及曲線下面積(area under the curve,AUC)的分析結(jié)果提示,在區(qū)分HSP與正常對(duì)照組時(shí),以CA特異性Ig A抗體最有價(jià)值,AUC為0.803,敏感性為0.763,特異性為0.707;其次是BLG特異性Ig A抗體,AUC為0.707,與CA特異性Ig A抗體相比,雖敏感性升高,但特異性下降。在區(qū)分HSP組與非風(fēng)濕性疾病對(duì)照組(腹瀉組、腹痛組)中的價(jià)值,以VOA特異性Ig A抗體最有價(jià)值,AUC為0.850,敏感性為0.763,特異性為0.787。其次是BLG特異性Ig A抗體,AUC為0.764,與VOA特異性Ig A抗體相比,雖敏感性升高,但特異性下降。在區(qū)分HSP組與其他風(fēng)濕性疾病對(duì)照組(JIA、SLE)中的價(jià)值,以VOA特異性Ig A抗體最有價(jià)值,AUC為0.807,敏感性為0.775,特異性為0.726。其次是BLG特異性Ig A抗體,AUC為0.719,與VOA特異性Ig A抗體相比,敏感性升高,但特異性下降。在區(qū)分HSP組與所有對(duì)照組中的價(jià)值,以VOA特異性Ig A抗體最有價(jià)值,AUC為0.758,敏感性為0.763,特異性為0.630。其次是BLG特異性Ig A抗體,AUC為0.717,與VOA特異性Ig A抗體相比,敏感性升高,但特異性下降。結(jié)論:1.目前市場(chǎng)上沒有食物特異性Ig A抗體檢測(cè)ELISA試劑盒,本研究組成功構(gòu)建了檢測(cè)牛奶、雞蛋蛋白成分特異性Ig A抗體的ELISA體系。檢測(cè)結(jié)果提示牛奶、雞蛋部分蛋白成分特異性Ig A抗體水平升高,病情緩解后均下降,提示其特異性Ig A抗體與兒童HSP的發(fā)病相關(guān)。其中以VOA特異性Ig A抗體的相關(guān)性最強(qiáng),其次是BLG特異性Ig A抗體。2.在區(qū)分HSP組與疾病對(duì)照組及所有對(duì)照組中的價(jià)值,均以VOA特異性Ig A抗體最有價(jià)值,其次為BLG特異性Ig A抗體。BSA特異性Ig A抗體與腎型HSP患兒腎小球Ig A沉積負(fù)相關(guān),提示BSA特異性Ig A抗體在腎型HSP中可能起一定的作用。第二部分過敏性紫癜患兒血液、皮膚及腎臟組織中食物蛋白成分的水平及意義目的:通過檢測(cè)HSP患兒和對(duì)照兒童外周血清CA、BLG、BSA和VOA四種食物蛋白抗原的水平,及上述食物蛋白抗原在皮膚和腎臟組織中的沉積,進(jìn)一步探討上述食物蛋白抗原和其特異性Ig A抗體在兒童HSP中的作用。方法:采用購(gòu)買的ELISA試劑盒檢測(cè)各組兒童血清中食物蛋白的水平。該部分研究對(duì)象選取自第一部分,標(biāo)本采集方法和保存同第一部分。急性期HSP患兒和正常對(duì)照組兒童從第一部分中隨機(jī)選取,分別檢測(cè)了97例和68例,36例HSP患兒急性期和恢復(fù)期的標(biāo)本均進(jìn)行檢測(cè)。疾病對(duì)照組未納入腹痛組,余同第一部分,即38例JIA,24例SLE,17例Ig AN,30例腹瀉患兒。采用免疫組織酶標(biāo)化學(xué)方法檢測(cè)皮膚組織標(biāo)本小血管上四種食物蛋白抗原的沉積。皮膚標(biāo)本為2012年1月至2017年5月期間蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院腎臟風(fēng)濕科行皮膚活檢的12例HSP患兒的皮膚蠟塊標(biāo)本,6例多指兒童被切除的手指皮膚蠟塊作為正常皮膚對(duì)照組,同期腎臟風(fēng)濕科行皮膚活檢的其它病人的蠟塊標(biāo)本作為疾病對(duì)照組,包括4例變應(yīng)性血管炎(allergic vasculitis,AV),3例幼年皮肌炎(juvenile dermatomyositis,JDM),1例多關(guān)節(jié)型JIA合并血管炎。采用免疫組織熒光化學(xué)方法檢測(cè)腎臟組織標(biāo)本腎小球上四種食物蛋白抗原的沉積。腎臟組織標(biāo)本為2017年10月至2018年1月期間腎臟風(fēng)濕科行腎活檢的27例HSP患兒的標(biāo)本,同期行腎活檢的其它疾病的標(biāo)本作為疾病對(duì)照組,包括5例Ig AN,5例腎小球性血尿,4例急性腎炎,5例SLE,1例NS。新鮮腎臟組織用恒溫冷凍切片機(jī)制作切片,切片制作后即刻進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:1.外周血清食物蛋白成分BSA和VOA在各組的絕大多數(shù)兒童中可以檢出,BSA在各組檢出率分別為:HSP:98.97%,正常對(duì)照組:91.18%,腹瀉組:93.33%,JIA:94.74%,SLE:100%,Ig AN:94.18%。VOA在各組檢出率分別為:HSP:98.97%,正常對(duì)照組:100%,腹瀉組:100%,JIA組:97.37%,SLE組:100%,Ig AN組:100%。HSP患兒外周血清BSA和VOA水平與其特異性Ig A抗體均呈正相關(guān)性(P均0.05),且36例HSP患兒急性期和恢復(fù)期配對(duì)比較結(jié)果表明恢復(fù)期BSA和VOA的水平較急性期明顯下降(P均0.05)。正常對(duì)照組、腹瀉組、JIA組的BSA抗原與BSA特異性Ig A抗體呈正相關(guān)(P均0.05);SLE組、Ig AN組兒童的BSA抗原與其特異性Ig A抗體均無(wú)相關(guān)性(P均0.05)。各對(duì)照組兒童VOA抗原與其特異性Ig A抗體均無(wú)相關(guān)性(P均0.05)。2.外周血清食物蛋白成分CA、BLG在各組兒童中均有部分患兒因低于試劑盒最低檢測(cè)限而未檢出,CA在各組檢出率分別為:HSP組:62.89%,正常對(duì)照組:35.29%,腹瀉組:23.33%,JIA組:42.11%,SLE組:95.83%,Ig AN組:35.29%;BLG在各組檢出率分別為:HSP組:54.64%,正常對(duì)照組:11.76%,腹瀉組:46.67%,JIA組:55.26%,SLE組:91.67%,Ig AN組:41.18%。HSP組患兒CA、BLG的檢出率均高于正常對(duì)照組兒童的檢測(cè)率,低于SLE組患兒的檢出率,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且CA的檢出率亦高于腹瀉組及Ig AN患兒的檢出率,差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。HSP患兒外周血CA抗原與CA特異性Ig A抗體水平呈正相關(guān)(P0.05);配對(duì)比較結(jié)果表明恢復(fù)期BLG抗原水平較急性期下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各對(duì)照組兒童CA、BLG與其特異性Ig A抗體均無(wú)相關(guān)性(P均0.05)。3.皮膚組織食物蛋白抗原檢測(cè)結(jié)果表明HSP患兒的皮膚小血管可檢測(cè)到不同程度四種食物蛋白的沉積,CA和VOA的染色較深,BLG和BSA的染色相對(duì)較淡。HSP患兒CA、BLG和VOA的染色陽(yáng)性血管平均密度之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05),三者均大于BSA的染色陽(yáng)性血管平均密度(P均0.05)。多組間比較顯示,HSP患兒的CA、BLG、VOA的染色陽(yáng)性血管平均密度高于正常兒童、AV及JDM組兒童(P均0.05);BSA的染色陽(yáng)性血管平均密度高于正常兒童、JDM兒童(P均0.05),但與AV組相比,未顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.腎臟組織食物蛋白抗原檢測(cè)結(jié)果表明HSP患兒腎小球BSA、VOA的沉積率分別為88.89%和81.48%,均高于急性腎炎組患兒的沉積率(P均0.05),BSA的沉積率亦高于腎小球性血尿組患兒(P0.05)。HSP患兒腎小球CA和BLG的沉積率分別為44.44%和74.07%,與其他對(duì)照組患兒的沉積率相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。結(jié)論:血液和組織學(xué)檢查結(jié)果表明牛奶、雞蛋部分蛋白成分與HSP的發(fā)病有較好的相關(guān)性。血液中牛奶、雞蛋部分蛋白抗原與其特異性Ig A抗體水平相關(guān),并與病情一致,推測(cè)食物蛋白抗原與其特異性Ig A抗體在小血管壁的沉積參與了HSP的發(fā)病。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R725.5
【部分圖文】：

13圖 1.1 ELISA 檢測(cè)食物蛋白特異性 IgA 抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線（X 軸：濃度，Y 軸：吸光度）2.3 急性期 HSP 與不同對(duì)照組兒童食物蛋白特異性 IgA 抗體的檢測(cè)結(jié)果及比較急性期 HSP 患兒食物蛋白特異性 IgA 抗體與各對(duì)照組食物蛋白特異性 IgA 抗體比較，除 BSA 特異性 IgA 抗體在各組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，CA、BLG、VOA特異性 IgA 抗體在各組間的比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表 1.3）。HSP 組 VOA 特異性 IgA 抗體水平高于正常對(duì)照組、腹瀉組、腹痛組、JIA 組、SLE 組等的水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與 IgAN 組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；本研究同時(shí)表明腹瀉組、腹痛組的 VOA 特異性 IgA 抗體水平低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HSP 組BLG 特異性 IgA 抗體水平比正常對(duì)照組、腹瀉組、腹痛組、JIA 組的水平高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與 SLE 組、IgAN 組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HSP 組患兒 CA 特異性

15圖 1.2 各組兒童食物蛋白特異性 IgA 抗體的檢測(cè)結(jié)果比較NCon：正常對(duì)照組；Dia：腹瀉組；abp：腹痛組；HSP：過敏性紫癜組；JIA：幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎組；SLE：系統(tǒng)性紅斑狼瘡組；IgAN：IgA 腎病組。2.4 急性期和恢復(fù)期均取得血液標(biāo)本的 36 例 HSP 患兒食物蛋白特異性 IgA 抗體的配對(duì)檢測(cè)結(jié)果及比較36 例 HSP 患兒急性期和恢復(fù)期食物蛋白特異性 IgA 抗體的配對(duì)檢測(cè)結(jié)果顯示，恢復(fù)期 CA、BLG、BSA、VOA 四種蛋白特異性 IgA 抗體水平均較急性期相應(yīng)抗體水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表 1.4，圖 1.3。

圖1.3 HSP患兒急性期和恢復(fù)期食物蛋白特異性IgA抗體的配對(duì)檢測(cè)結(jié)果比較2.5 性別不同的急性期 HSP 患兒食物蛋白特異性 IgA 抗體的檢測(cè)結(jié)果及男性 HSP 患兒四種食物蛋白特異性 IgA 抗體的水平和女性患兒相應(yīng)食物性 IgA 抗體的水平相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表 1.5。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2882331