葡萄糖6磷酸脫氫酶缺乏癥(Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency)簡稱G6PD缺乏癥,是由于G6PD基因突變,酶活性降低所導(dǎo)致的溶血性疾病,屬X連鎖不完全顯性遺傳。G6PD缺乏癥新生兒高膽紅素血癥發(fā)病率高,黃疸程度重者可導(dǎo)致新生兒膽紅素腦病,造成永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷,甚至引致死亡。因此早期診斷和治療十分重要。G6PD缺乏癥是世界上最常見的單基因遺傳病之一,世界范圍內(nèi)約有4億人受累,我國以廣東及廣西發(fā)生率最高。迄今為止,我國人群中至少有25種G6PD突變型,其中1376GT、1388GA和95AG這三種突變占60-72%以上�；蛲蛔兊难芯繉�(duì)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)前診斷和基因診斷,預(yù)測患兒的臨床表型和治療療效評(píng)估具有非常重要的作用。 目的:通過對(duì)50例廣東籍G6PD缺乏癥患者進(jìn)行基因突變分析,了解兩種常見突變類型G6PD Canton(1376GT)、G6PD Kaiping(1388GA)和兩種少見的突變類型(1311CT、IVS93 TC)的發(fā)生頻率,探討突變位點(diǎn)之間的相互作用及基因突變類型與新生兒高膽紅素血癥臨床特點(diǎn)之間的關(guān)系,了解廣東人群G6PD基因突變特點(diǎn),深入探討該病的發(fā)病機(jī)理,為臨床診治提供科學(xué)依據(jù)。 對(duì)象與方法:選擇2007年入院50例廣東籍G6PD缺乏癥新生兒為實(shí)驗(yàn)組,20例黃疸新生兒為對(duì)照組,提取外周靜脈血基因組DNA。應(yīng)用PCR-DNA直接測序法檢測G6PD Canton(1376GT)和1311CT、IVS93 TC突變類型,應(yīng)用突變特異性擴(kuò)增系統(tǒng)(ARMS)法檢測G6PD Kaiping(1388GA)突變類型,了解4種基因點(diǎn)突變的發(fā)生頻率。分析4種G6PD突變類型各項(xiàng)相關(guān)臨床指標(biāo)與對(duì)照組的差異。結(jié)果:在50例實(shí)驗(yàn)組樣品中,檢測出G6PD突變類型4種:1388GA、1376GT、1311CT和Intron11 93位點(diǎn)TC。檢測出1388GA突變類型30例(60.0%),1376GT突變類型13例(26.0%),1311CT 2例、IVS 93TC 2例。其中G6PD 1388GA/1376GT復(fù)合突變6例, 1311CT/IVS 93TC復(fù)合突變2例(1388GA/1311CT/IVS 93TC復(fù)合突變1例,1376GT/1311CT/IVS 93TC復(fù)合突變1例)。在20例對(duì)照組中檢測出1388GA突變類型1例。3種G6PD基因突變型(1388GA、1376GT、1388GA/1376GT)男/女性別比、血清總膽紅素峰值、MetHb%、G6PD/6PGD與對(duì)照組統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性意義,3種G6PD基因突變型之間男/女性別比、血清總膽紅素峰值、MetHb%、G6PD/6PGD統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性意義。3種G6PD基因突變型與對(duì)照組及3種G6PD基因突變型之間在黃疸出現(xiàn)日齡方面統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性意義。G6PD1376GT組、1388GA/1376GT組與對(duì)照組、1388GA組與1388GA/1376GT組之間黃疸消退日齡統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性意義。G6PD1388GA組與對(duì)照組,1376GT與1388GA組,1376GT與1388GA/1376GT組組間黃疸消退日齡統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性意義。1388GA組與對(duì)照組,1376GT與1388GA組血紅蛋白值統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性意義,1376GT、1388GA/1376GT組與對(duì)照組, 1376GT組, 1388GA組與1388GA/1376GT復(fù)合突變組之間血紅蛋白值統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性意義。3種G6PD基因突變型之間在藍(lán)光照射和使用白蛋白方面差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性意義。 結(jié)論: 1、1388GA與1376GT是廣東人群中最常見的兩種G6PD基因突變類型。其突變類型發(fā)生頻率分別為60.0%和26.0%。 2、G6PD基因存在復(fù)合突變,其中1388GA/1311CT/IVS 93TC與1376G T/1311CT/IVS 93TC國內(nèi)外未見報(bào)道。 3、女性雜合子具有不同的表現(xiàn)度,可能表現(xiàn)為酶活性正常。 4、G6PD缺乏癥是新生兒高膽紅素血癥的高危因素之一,但不是造成新生兒黃疸過早出現(xiàn)的高危因素。復(fù)合突變與單個(gè)點(diǎn)突變在黃疸程度方面差異無顯著性。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R722.1
【部分圖文】：

12圖 1 1376 和 1388 位點(diǎn)位點(diǎn)在人類 G6PD 基因 DNA 序列中的位置（方框所示）2) 設(shè)計(jì)引物的位置：根據(jù)人類 G6PD DNA 的序列設(shè)計(jì) 1376 位點(diǎn)的引物， 1388 位點(diǎn)引物設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)[7]。3) 設(shè)計(jì)引物的原則：引物長度以 15～30bp 為宜；引物堿基盡可能隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堆積現(xiàn)象，引物 G+C 含量宜在 45～55％左右；引物內(nèi)部避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，尤其在 3′末端不應(yīng)有互補(bǔ)鏈存在；引物的堿基順序不應(yīng)與非擴(kuò)增區(qū)域有同源性；引物 3′末端堿基嚴(yán)格互補(bǔ)，末位堿基盡量不選 A；5′末端堿基沒有嚴(yán)格的限制。4) 應(yīng)用 Oligo6.0 軟件分析設(shè)計(jì)的引物：需要分析的指標(biāo)：二聚體結(jié)構(gòu)、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、

2 ) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行水平式瓊脂糖凝膠電泳①配膠：稱取 0.4G 的瓊脂糖凝膠倒入三角杯中，加入 1×TAE 緩沖液 20ml，配制成濃度為 2%的凝膠，加熱 30 秒。②倒膠：將凝膠冷至 60℃左右時(shí)，在凝膠中加入 EB 至終濃度為 0.5μg/ml，搖勻后緩緩倒入已插好梳子的制膠膜中。凝膠厚度為 3～5mm，避免產(chǎn)生氣泡。③凝膠條件：凝膠在室溫下放置 20 分鐘。④加電泳緩沖液：凝膠完全凝固后，移去梳子，將凝膠放入電泳槽中，加入 1×TAE的電泳緩沖液，液面高出凝膠表面 1mm。⑤加樣：取 5μlPCR 產(chǎn)物加入 10×LOADING BUFFER 混合均勻，加至加樣孔中，以 100bp DNALadder Marker 做對(duì)照，鑒定條帶。⑥電泳：90V 電壓電泳 30－40 分鐘。⑦在紫外燈下觀察 DNA 條帶的遷移位置并拍照。（照片如圖 2）⑧顯示清晰的 1376 位點(diǎn)條帶者，進(jìn)一步行 DNA 條帶直接測序。

部分序列CLUSTALW1376位點(diǎn)比對(duì)圖，方框所示為G→T
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張華;中國人G6PD基因突變情況[J];華夏醫(yī)學(xué);2001年03期

2 蔡月明;G6PD基因突變與新生兒溶血癥[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;2001年05期

3 蔣瑋瑩;人類G6PD分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;1997年01期

4 耿力,馮玉昆,樊明禎;新生兒紅細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥臨床分析[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

5 肖春杰,L　L　Cavalli-Sforza,EMinch,杜若甫;中國人群的等位基因地理分布圖[J];遺傳學(xué)報(bào);2000年01期

6 徐蕓;羅建明;;我國G6PD缺乏癥基因突變的研究現(xiàn)狀[J];中國小兒血液與腫瘤雜志;2009年03期

7 鐘丹妮,劉悠南,劉義,林偉雄;廣西新生兒膽紅素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因Gly71Arg突變的研究[J];中華兒科雜志;2002年10期

8 黃德珉;如何降低早期新生兒高膽紅素血癥的發(fā)病率、病死率和致殘率[J];中華兒科雜志;1996年04期

9 杜傳書;我國葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥研究40年的回顧和展望[J];中華血液學(xué)雜志;2000年04期

10 佟莉貞,區(qū)小冰,賴冬波,何麗雅,詹軍芳,李蘭娜,張力;葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷基因型與臨床關(guān)系的初步探討[J];中華血液學(xué)雜志;2000年04期

本文編號(hào)：2880225