目的:病毒性腦炎是一種嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,發(fā)病率高,死亡率高,是危害兒童健康、致殘甚至致死的重要原因之一。引起病毒性腦炎的病原復(fù)雜多樣,約有100余種病毒,其中包括了皰疹病毒、腸道病毒、EB病毒、腺病毒、蟲媒病毒等。而皰疹病毒和腸道病毒分別是散發(fā)性病毒性腦炎和流行性病毒性腦炎主要的病原體。對病毒性腦炎病原學的分析有助于其預(yù)防和治療。本研究對2009年3月到2010年2月從云南某兒童醫(yī)院收集297例確診病毒性腦炎患者的腦脊液標本,進行病原學及其分子流行病學分析,為云南省的病毒性腦炎預(yù)防控制提供一定的實驗數(shù)據(jù)。方法:1.采用實時熒光定量PCR方法對患兒腦脊液樣品進行單純皰疹病毒I/II型、水痘帶狀皰癥病毒、EB病毒,巨細胞病毒,人皰疹病毒6型病毒和腸道病毒核酸檢測。2.利用巢式RT-PCR對腸道病毒檢測為陽性的樣品進行擴增和測序,并經(jīng)BLAST比對確定其腸道病毒的血清型。3.同時用SPSS軟件回顧性的分析了患者的一般情況和臨床特征。4.通過RD細胞進行病毒分離。5.使用MEGA 7、simplot3.5.1、RDP3等軟件對CVB5全基因序列進行分析。結(jié)果:1、檢測到的引起病毒性腦炎的主要病原分別為腸道病毒(EV)25例(25/35,71.4%),水痘帶狀皰癥病毒(VZV)5例(5/35/,14.3%),單純皰疹病毒(HSV)為 3 例(3/35,8.6%,1 型 2 例,2 型 1 例),EB 病毒為 2 例(2/35,2.9%),人皰疹病毒6型(HHV-6)為1例(2/35,2.9%),總的檢測率為11.8%(35/297)。2、引起病毒性腦炎的腸道病毒血清型為柯薩奇病毒B組5型(CVB5,10/25,40.0%),�？刹《�30型(E30,4/25,16.0%),柯薩奇病毒B組1型(CVB1,3/25,12.0%),柯薩奇病毒A組9型(CVA9,2/25,8.0%)和�？刹《�9型(E9,2/25,8.0%)。3、在臨床特征分析中最常見的癥狀是發(fā)熱(92.9%)、頭痛(81.8%)、頸強直(72.4%)和嘔吐(65.7%),統(tǒng)計學顯示,腸道病毒相關(guān)的腦炎和非腸道病毒相關(guān)的腦炎之間臨床特征無對應(yīng)關(guān)系,P值大于0.05,無統(tǒng)計學意義。4、獲得一株陽性分離物(KMA2/YN/CHN/2010)經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)與CVB5同源性高達85%以上,根據(jù)腸道病毒血清型分型標準,屬于CVB5。5、KMA2/YN/CHN/2010毒株全基因組全長為7395bp,其核苷酸及其氨基酸與A210/KM/09最為同源(98.8%和96.1%);而與其他CVB5毒株核苷酸和氨基酸同源性分別為79.6%～93.1%和93.1%～98.1%。系統(tǒng)進化分析顯示KMA2/YN/CHN/2010與中國株親緣關(guān)系較近,與其他國外CVB5分離株關(guān)系較遠,屬于不同的分支。經(jīng)重組分析結(jié)果表明KMA2/YN/CHN/2010可能是一株重組株。結(jié)論:從2009年3月到2010年2月,引起病毒性腦炎的病原分別為HSV,VZV,EB病毒,CMV,HHV-6以及EV,其中最主要的是EV,而在EV中的血清型是CVB5,E30,CVB1,CVA9和E9,并與目前中國流行株的基因型一致;分離株KMA2/YN/CHN/2010可能發(fā)生了重組。為今后病毒性腦炎的預(yù)防及相關(guān)的研究提供了有效的參考依據(jù)和實驗室資料。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R725.1
【部分圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＴ－ＰＣＲ??Ｍ：：?ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，１、２、３、４、５、６、７分別代表檢測的７個病毒性炎樣品??表９．云南省２５例腦脊液標本腸道病毒血清型??Ｔａｂｌｅ?９．?Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ?ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｉｎ?２５?ＣＳＦ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｉｎ?Ｙｕｎｎａｎ，?Ｃｈｉｎａ??血清型?檢測數(shù)?占百分比（％）Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ｂ５?１０?４０??Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ?３０?４?１６??Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ｂ１?３?１２??Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ａ９?２?８??Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ?９?２?８??未檢測出?４?１６

１．２．４．２?Ｅ３０完整ＶＰ１基因的系統(tǒng)進化分析??運用ＭＥＧＡ７軟件，使用鄰接法（ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄ）分別對本次檢測到的??完整ＶＰ１序列的２株Ｅ３０?（８７６ｂｐ）構(gòu)建了系統(tǒng)進化樹如圖３所示，在進化樹中Ｅ３０分??２９??

?中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩士研究生學位論文???為Ａ、Ｂ、Ｃ個進化支，Ｃ進化支又進一步分為Ｃ１和Ｃ２兩個支，中國株都位于Ｃ進化??支上，其中來自于臺灣、浙江的分離株位于Ｃ１上，本次的分離株與來自于山東，廣??東，俄羅斯的分離株位于Ｃ２上，親緣關(guān)系比較近；而與原型株和國外的分離株遺傳??距離相比較遠，親緣關(guān)系也就比較遠。??￣??
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2862832