目的:調(diào)查河北省監(jiān)測點(diǎn)流行前期和流行期健康兒童與手足口病(HFMD)患兒病原攜帶狀況,并對主要病原進(jìn)行特征分析,為做好HFMD的監(jiān)測和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。 方法: 1根據(jù)2009年河北省HFMD發(fā)病情況在省內(nèi)建立6個(gè)市級監(jiān)測點(diǎn),包括石家莊市、保定市、邢臺(tái)市、唐山市、廊坊市、張家口市。 2研究對象為健康兒童和HFMD患兒,各監(jiān)測點(diǎn)在流行前期和流行期進(jìn)行采樣調(diào)查。 3應(yīng)用熒光定量PCR的方法對所采集的標(biāo)本進(jìn)行檢測,結(jié)果為EV陽性的進(jìn)行分型,對部分HFMD患兒的標(biāo)本進(jìn)行病毒分離。 4分別設(shè)計(jì)EV71和CA16的VP1區(qū)測序引物,進(jìn)行序列測定,分別分析兩者的核苷酸和氨基酸同源性,同時(shí)生成系統(tǒng)進(jìn)化樹,對病原基因特征進(jìn)行分析。 5應(yīng)用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 1河北省監(jiān)測點(diǎn)兒童檢測樣本采集情況 本研究共采集健康兒童305人,其中流行前期157人,流行期148人;采集與健康兒童匹配的HFMD患兒共297人,其中流行前期152人,流行期142人。 2健康兒童熒光定量PCR分型檢測結(jié)果 檢測健康兒童305人,其中54人EV陽性,陽性檢出率為17.70%,健康兒童以其他EV為主,在陽性兒童中占83.33%,EV71和CA16在健康兒童中的陽性檢出率較低,在陽性兒童中的構(gòu)成僅為5.56%和11.11%。顯示健康兒童EV感染以其他EV為主,EV71和CA16只占較少比例。健康兒童按采樣時(shí)間分為流行前期和流行期,流行前期檢測157人,17人EV陽性,陽性檢出率為10.83%。流行期檢測148人,37人EV陽性,陽性檢出率為25.00%。健康兒童流行前期和流行期EV感染均以其他EV為主,分別占陽性標(biāo)本的64.71%和91.89%,HFMD主要病原(主要病原指EV71和CA16兩者合計(jì))在兩期所占的比例分別為35.29%和8.11%。流行期健康兒童EV陽性檢出率(25.00%)高于流行前期(10.83%),且流行前期與流行期的病原構(gòu)成有各自的特點(diǎn),但均以其他EV為主。從地區(qū)分布上看,EV陽性率由高到低依次為保定28.21%,張家口26.19%,唐山22.50%,邢臺(tái)21.43%,廊坊14.29%,石家莊8.00%。流行前期陽性率最高的是張家口40.91%,流行期陽性率最高的是保定市61.11%。邢臺(tái)、保定、唐山流行期陽性率均高于流行前期。各地市HFMD病原構(gòu)成不同。張家口市CA16和其他EV數(shù)量相當(dāng),其他各市均以其他EV為主。從人群分布上看,性別和年齡對于健康兒童EV感染和HFMD病原構(gòu)成沒有影響。 3 HFMD患兒熒光定量PCR分型檢測結(jié)果 檢測患兒297人,167人EV陽性,陽性檢出率為56.23%,在患病兒童中,EV71占EV陽性數(shù)的48.50%,其次為CA16和其他EV,EV71+CA16僅有1人。顯示HFMD患兒以EV71為主要病原,CA16和其他EV也有一定比例,并存在EV71和CA16合并感染的情況。HFMD患兒按采樣時(shí)間分為流行前期和流行期,流行前期檢測152人,79份EV陽性,陽性檢出率為51.97%;流行期檢測145份,88人EV陽性,陽性檢出率為60.69%。對兩期的EV陽性檢出率和HFMD病原構(gòu)成進(jìn)行比較,檢出率無顯著性差異,但病原構(gòu)成在兩期上具有顯著性差異。流行前期CA16和EV71所占構(gòu)成均較高,分別為49.37%和39.24%,其他EV僅占11.39%,但是流行期時(shí),EV71所占構(gòu)成最高,上升至56.82%,其次為其他EV,所占構(gòu)成上升至30.68%,CA16所占構(gòu)成下降至11.36%。從地區(qū)分布上看,EV陽性檢測率由高到底依次為石家莊61.36%,邢臺(tái)60.98%,唐山57.50%,張家口53.49%,廊坊53.33%,保定45.00%。流行前期陽性率最高的是廊坊69.57%,流行期陽性率最高的是唐山90.00%,兩期相比,唐山、邢臺(tái)流行期檢出率較前期明顯上升,各地市HFMD病原構(gòu)成情況不同并各具特點(diǎn)。從人群分布上看,性別和年齡對于HFMD患兒EV檢出率和病原構(gòu)成沒有影響。這與健康兒童的結(jié)果一致。 4健康兒童其他EV分型檢測結(jié)果 對健康兒童中其他EV陽性者進(jìn)一步進(jìn)行其他EV分型檢測,以病毒RNA為模板,用相應(yīng)引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,目的片段位置和大小根據(jù)所用引物不同而不同。共檢測16例,其中可以確定型別的有7例,采樣日期均在流行期,2人為CB5陽性,1人為CA6陽性,4人為ECO14陽性。分別來自保定市3人(2人為CB5陽性,1人為CA6陽性),邢臺(tái)市3人(均為ECO14陽性),唐山1人(ECO14陽性)。 5病毒分離結(jié)果 對PCR檢測為EV陽性的患兒標(biāo)本進(jìn)行病毒分離,共分離得到61株。經(jīng)鑒定分別為36株EV71,18株CA16,4株CA10,2株CA4,1株CA9。 6序列分析 比較15株EV71分離株VP1區(qū)特征,結(jié)果顯示,核苷酸同源性為94.7%～100.0%,氨基酸同源性為98.7%～100%;比較發(fā)現(xiàn),與A、B基因型VP1區(qū)同源性低,而與C基因型接近;進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)2010年河北省15株EV71均屬于C4亞型,與全國不同省市和2009年河北省分離的EV71一致,均屬于C4亞型C4a分支。13株CA16分離株間核苷酸同源性為90.8%～98.9%,氨基酸同源性為99.0%～100%;與A基因型G-10國際標(biāo)準(zhǔn)株(U05876)和2008年安徽阜陽株(EU812514)的核苷酸同源性和氨基酸同源性較低,與B基因型代表株中的B1亞型同源性較高,顯示CA16毒株均屬于B1亞型,并分處于兩個(gè)分支。 7分析系統(tǒng)發(fā)生樹,2010年河北省EV71毒株與C4亞型代表株為同一 分支,其中的C4a分支包括了近兩年河北的EV71毒株和我國不同地區(qū)的代表株;河北省2009年和2010年的22株CA16毒株與國內(nèi)外B1亞型代表株在進(jìn)化樹中分別屬于B1a和B1b兩個(gè)進(jìn)化分支,共同進(jìn)化流行。河北省近年來EV71和CA16基因型穩(wěn)定,未發(fā)生變化。 結(jié)論: 1 2010年監(jiān)測點(diǎn)健康兒童EV攜帶率高,流行期陽性率明顯高于流行前期;各期各地病原構(gòu)成不同,但主要以其他EV為主,EV71和CA16只占較小比例,并伴有CB5、CA6、ECO14。 2河北省監(jiān)測點(diǎn)HFMD患兒EV陽性率在流行前期和流行期沒有變化;病原構(gòu)成主要以EV71和CA16為主,其他EV占較小比例,但流行前期和流行期構(gòu)成略有不同,EV71逐漸占據(jù)主要地位。 3無論健康兒童還是HFMD患兒,未發(fā)現(xiàn)性別和年齡對EV檢出率和病原構(gòu)成存在影響。 4河北省2010年EV71毒株處于C4亞型C4a分支;CA16為B1基因亞型,分別處于B1a和B1b兩個(gè)進(jìn)化分支。河北省近年來EV71和CA16基因型穩(wěn)定,未發(fā)生變化。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R725.1
【文章目錄】：
摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 手足口病的流行病學(xué)、病原學(xué)和預(yù)防控制
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷

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本文編號：2854955