目的:研究add3基因在BA發(fā)病過程中的表達變化,探究add3基因在BA發(fā)生中的作用機制方法:飼養(yǎng)并繁殖SPF級別Balb/c小鼠,配對并記錄雌鼠出現陰栓時間,實驗組于孕12.5天經尾靜脈注射add3-si RNA。小鼠出生12小時內,取新生鼠肝臟組織檢測基因沉默效果。出生后新生小鼠腹腔注射RRV誘導BA發(fā)生,分別取7、14、21天肝臟組織進行HE、masson染色,western blot檢測α-SMA、穿孔素、TNF-α表達情況與對照組進行比較。細胞實驗進一步探究機制,提取小鼠膽管上皮細胞行add3基因沉默后,使用RRV病毒感染細胞,再與小鼠NK細胞共培養(yǎng),檢測NK細胞活性標志物并與對照組比較。結果:動物實驗,對小鼠進行基因沉默后腹腔注射RRV,發(fā)現add3基因沉默的小鼠與野生型小鼠相比,TNF-α、穿孔素表達水平下降,21天時,小鼠肝臟纖維化程度更重。通過細胞實驗發(fā)現add3基因沉默后被RRV感染的膽管上皮細胞與NK細胞共培養(yǎng),NK細胞分泌的活性物質減少,殺傷能力減弱。結論:小鼠在體實驗,RRV誘導add3基因沉默小鼠肝纖維化程度較非基因沉默小鼠更重。在體和離體實驗中,add3基因沉默后,NK細胞在RRV感染發(fā)生后,分泌的活性物質減少。add3可能參與NK細胞免疫突觸形成的過程,通過與NK細胞的相互作用,導致BA的發(fā)生。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R725.7
【部分圖文】：

a7天小鼠圖片

b14天小鼠圖片

圖 1-1c 21 天小鼠圖片表 1-1 小鼠 BA 發(fā)生率和 21d 生存率組名 小鼠總數 BA 數BA 發(fā)生率%21d 生存率%A 20 0 0 100B 8 0 0.00% 87.5%*C 20 14 70%* 35.0%*D 26 23 88.5%*△15.4%*△
【參考文獻】

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1 汪光蓉;張國元;楊健;唐中;唐恩潔;朱道銀;;小干擾RNA(siRNA)對小鼠乙型肝炎病毒復制和表達影響的實驗研究[J];中國現代醫(yī)學雜志;2008年02期

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1 彭飛;新生小鼠NK細胞對Mφ細胞調控不足致膽道閉鎖的機理研究[D];華中科技大學;2014年

本文編號：2850647