背景：先天性心臟病發(fā)病率占存活嬰兒的6‰-8‰,其中復雜先天性心臟病占0.5‰-2‰。大量復雜先天性心臟病例需生物或人工材料,如同種帶瓣血管,異種帶瓣血管及其他類型的帶瓣血管等,重建成右(左)室流出道得到糾治。同種帶瓣血管因其結構自然,中心血流、抗反流、免疫原性低、不易形成血栓、不易附著細菌等優(yōu)點,在復雜先天性心臟病治療的應用范圍越來越廣。有活性的同種帶瓣血管與無活性的人工帶瓣血管及其他類型的血管相比,因其具有一定程度的細胞生長能力,遠期瓣膜失功幾率低,鈣化狹窄發(fā)生幾率低及血管的使用壽命時間長等特點,因此保存同種帶瓣血管的活性是實驗研究的方向。保存同種帶瓣血管的活性關鍵是在帶瓣血管的獲取、處理、降溫、保存及復溫過程中盡量減少帶瓣血管細胞的壞死和凋亡。作為促進細胞凋亡的Bax基因與抑制細胞凋亡的Bcl-2基因,已經有研究證實Bax基因表達可以促進在缺血再灌注損傷模型中心肌細胞的凋亡；而在誘導大鼠心肌凋亡的研究中Bcl-2基因的表達則減少了心肌細胞的凋亡。以往很多研究是通過檢測葡萄糖代謝率等方法檢測帶瓣血管的活性,這些方法均是從細胞代謝水平來檢測帶瓣血管活性而不是基因與蛋白水平的檢測方法,因此我們探討在基因與蛋白水平檢測帶瓣血管經凍存不同時間后的活性。 目的：研究在大鼠帶瓣血管低溫保存不同時間活性及Bax和Bcl-2基因的表達情況,探討基因檢測是否能成為同種帶瓣血管活性指標。 方法：80只wistar大鼠分為四組：新鮮血管20例(A組),凍存3個月血管20例(B組),凍存6個月血管20例(C組),凍存9個月血管20例(D組)。應用葡萄糖代謝法檢測帶瓣血管的代謝情況,鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(streptavidin peroxidase, SP)免疫組織化學法檢測樣本中的Bax、Bcl-2蛋白的表達情況。 結果： 1、光鏡檢查各組帶瓣血管的三層結構均存在,彈性存在。A組和B組血管的內皮細胞層完整,連接緊密,脫落不明顯,細胞核清楚可見,纖維層排列緊密,C組及D組內皮層出現(xiàn)局部分層,局部的細胞脫失,細胞連接不緊密,纖維層排列緊密。 2、各組間葡萄糖代謝率結果差別無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、大鼠帶瓣血管的Bax蛋白陽性率隨著凍存時間的延長而增加,血管的Bcl-2蛋白陽性率與凍存時間長短無關。 結論： 1、經液氮保存3、6、9個月后的大鼠帶瓣血管與新鮮的大鼠帶瓣血管葡萄糖代謝率結果無顯著性差異(P0.05),提示經凍存后帶瓣血管活性存在。 2、在經凍存后帶瓣血管Bax蛋白表達隨時間的延長而增加統(tǒng)計學有顯著性差異,提示隨著凍存時間的延長,細胞凋亡增加,推測Bax基因可以做為檢測同種帶瓣血管活性的指標之一。 3、在各組中Bcl-2蛋白的陽性表達無顯著性差異,提示Bcl-2基因表達的存在或高表達有可能是細胞能耐受凍存打擊的原因之一。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

(x’=7.033，P=0.008);C組與D組比較，差異無統(tǒng)計學意義(x’=3.135P=O.077);經線性趨勢性檢驗，隨凍存時間的延長，Bax蛋白的陽性表達率逐漸增高(xZ=12.927，P=0.000)。見表3，圖1，附圖5一8。表3各組大鼠帶瓣血管Bax蛋白表達比較組別例數(shù)陽性數(shù)陽性率(%)尸值蘸蘸 蘸黝 黝蘸 蘸… …撇撇 撇繃緣繼粼 粼溪策槳 槳姍姍東麓熬熬 熬 {{{{{lll}}}!!!{{{{{鬃鬃鬢薰馨馨熬翼馨 馨纂 纂黝纂 纂蘸 蘸瓢 瓢罐罐罐暴暴蘸蘸 蘸鬢籍蒸彝 彝翼 翼纂鬢鑫鬢 鬢姍 姍 姍 姍姍薰 薰薰委派袋派忍翠扮扮瀟硯硯吸沖溺淤召終終冬緊定淡淡 淡 淡淡圖1各組中Bax蛋白表達陽性率比較 Fig1ThePOsitiven歡 ecomP幼 sonofBaxProteinexPressionineachgrouP 4.Bcl一2蛋白在各組帶瓣血管表達情況Bd一2蛋白在A組、B組、C組和D組的陽性表達率分別為25%、30%、20%和35%，經統(tǒng)計學處理，4組間陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義
【參考文獻】

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1 李建玲,朱建華,荊照政,陳主初,肖志強;毒蠅堿型乙酰膽堿受體經Ras-ERK-1/2信號通路上調Bcl-2和磷酸化Bad表達[J];生物化學與生物物理學報;2003年01期

2 張利萍;馬會杰;布會敏;王妹玲;李茜;齊釗;張翼;;白藜蘆醇甙減輕缺血/再灌注誘發(fā)的大鼠心肌細胞凋亡(英文)[J];生理學報;2009年04期

3 徐磊,趙晏,張鵬,黃慶恒,任滬平;液氮保存對人同種瓣組織代謝及活性的影響[J];西安醫(yī)科大學學報;2002年01期

4 武忠;史敏科;邵峻;王強;陳�？�;曹彬;王東進;;液氮深低溫保存同種帶瓣管道移植治療復雜先天性心臟病17例[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年18期

5 王榮平,張殿堂,殷桂林;同種帶瓣管道的研究進展[J];醫(yī)學理論與實踐;1999年03期

6 孫彥雋,劉錦紛,張海波,魯亞南,丁文祥;冷凍速率對豬主動脈冷凍保存效果的影響[J];中華胸心血管外科雜志;2003年06期

7 賴應龍;同種瓣的生物活性與耐久性[J];中國胸心血管外科臨床雜志;2002年04期

8 楊學輝,劉彥信,鄭德先;Bcl-2抑制CD3∈分子介導的T淋巴細胞凋亡[J];中國醫(yī)學科學院學報;1999年06期

本文編號：2842801