1.研究背景阪崎克羅諾桿菌(Cronobactersakazakii,CS)是一種引起嬰幼兒壞死性小腸結(jié)腸炎(Necrotizingenterocolitis,NEC)的革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌。腸道菌群失調(diào)、腸黏膜屏障的破壞和細(xì)胞死亡增加與CS致NEC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。益生菌具有抑制致病菌生長(zhǎng)、維持腸道菌群平衡、促進(jìn)腸黏膜和免疫細(xì)胞發(fā)育等功能,已成為NEC防治的研究熱點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)。前期從健康嬰兒糞便中分離篩選到一株無(wú)毒脆弱擬桿菌(Bacteroidesfragilis)(ZY-312),具有治療腸道炎癥、腹瀉等功能。本研究將開(kāi)展ZY-312能否防治CS致NEC的發(fā)生,并初探其防治機(jī)制。2.研究方法(1)建立基于人結(jié)腸腺癌Caco-2的體外腸屏障模型,明確ZY-312能否抑制CS對(duì)腸屏障的損傷及其保護(hù)作用機(jī)制。(2)建立基于“CS定植腸黏膜-破壞腸屏障-引發(fā)NEC”發(fā)病過(guò)程的新生大鼠模型,利用ZY-312干預(yù),評(píng)價(jià)ZY-312防治CS致新生大鼠NEC感染的效果。(3)探討ZY-312防治CS致NEC感染的作用機(jī)制:1)明確ZY-312對(duì)新生大鼠腸屏障的保護(hù)作用;2)檢測(cè)ZY-312對(duì)CS致新生大鼠腸組織炎癥小體NLRP3及細(xì)胞焦亡的調(diào)控;3)明確ZY-312是否抑制CS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。3.研究結(jié)果(1)體外研究結(jié)果顯示ZY-312能抑制CS降解Caco-2分泌的黏蛋白,抑制CS的黏附和侵襲,減輕CS對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的破壞。(2)體內(nèi)研究結(jié)果顯示ZY-312能有效預(yù)防新生大鼠CS感染致NEC,降低死亡率。(3)ZY-312防治CS致NEC的機(jī)制包括:1)ZY-312可增強(qiáng)小鼠腸屏障功能,包括:①增加腸道表層黏蛋白、細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá)和降低腸道的通透性來(lái)增強(qiáng)新生大鼠腸機(jī)械屏障功能;②增加腸道表層的免疫球蛋白A、減少促炎因子的釋放,增強(qiáng)新生大鼠腸免疫屏障功能;③通過(guò)改善腸道菌群的豐度,增加擬桿菌的數(shù)目,減少致NEC變形菌門(mén)的數(shù)量,實(shí)現(xiàn)微生物屏障功能的修復(fù)。2)ZY-312可抑制CS激活的炎癥小體NLRP3相關(guān)蛋白的表達(dá),減少促炎因子IL-1β的釋放,緩解炎癥。3)ZY-312可抑制CS誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞發(fā)生焦亡和凋亡,減少細(xì)胞程序性死亡,防治NEC的發(fā)生。4.結(jié)論新生兒早期腸屏障功能的不完善和致病菌導(dǎo)致的細(xì)胞死亡增加是NEC發(fā)生的主要原因。本研究引入二代益生菌脆弱擬桿菌ZY-312開(kāi)展防治CS引起的NEC,結(jié)果表明ZY-312能通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群、修復(fù)腸屏障、抑制炎癥小體NLRP3的活化,減少細(xì)胞程序性死亡(焦亡和凋亡),調(diào)控NEC。本研究為脆弱擬桿菌ZY-312的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ),并為細(xì)菌性NEC的防治尋找新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R725.7
【部分圖文】：

修復(fù)腸上皮屏障，并改變腸道代謝產(chǎn)物，從而改善ＭＩＡ癥狀（圖１－３）。??Ｍａｔｅｒｎａｌ?ｉｍｍｕｎｅ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?Ｓａｃｔｅｒｏ／ｃｔｅｓ?ｆｒａｇｒ／７／ｓ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??—?—－?，謂?一一?Ｚ??ｌｕｍｅｎ?＾?ｄｙｓｔｔｉｏｓｉｓ?ａｌｔｅｒｅｄ??ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ??ｒｙｒ?＂＾ｒ?＾?＾??｜Ｖ．矜凡ＩＶ?ＰＪＶ錢(qián)置上．．錢(qián)Ｊ｜??ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?〇?ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ?ｃｐｉｔｈＲｌｉａｌ?＾ＺＺＩＺ?Ｏ?ｉｍｐｒｏｖｅｄ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ??ｅｐｉｔｈｅＵｕｍ?ｂａｒｒｉｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?—？?ｔ＞ａｒｒｌｅｒ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ??ｋＭ．?■＇，．．＾??？?？?？?Ｏ?ｌｅａｋａｇｅ?ｏｆ?Ｇｌ?？?？?〇?ｒｅｄｕｃｅｄ?ｌｅａｋａｇｅ??＊?？?？?．?？?ｍ？ｔａｔＫｊｌ？ｔｏ＊?？?ｏｆ?Ｇｌ?ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ??４?善??？?ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｔｉ?ｂｅｈａｖｉｏｒ?ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｎ?ｂｒａｉｎ?ａｎｄ?ｂｅｈａｖｉｏｒ??圖１－３脆弱擬桿菌通過(guò)修復(fù)腸黏膜屏障改善ＭＩＡ癥狀??Ｆｉｇ?１－３?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ－Ｇｕｔ－Ｂｒａｉｎ?Ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＩＡ?Ｍｏｄｅｌ??２．４脆弱擬桿菌利用六型分泌系統(tǒng)限制腸內(nèi)病原體的定殖，阻止腸道炎癥的??發(fā)生??腸道菌群是對(duì)抗腸道病原體的主要力量，而ＮＥＣ早產(chǎn)兒的腸道菌群多樣性??不足

炎癥的恢復(fù)。綜合文獻(xiàn)，脆弱擬桿菌莢膜多糖ＰＳＡ可誘導(dǎo)腸道免疫系統(tǒng)的成熟，??通過(guò)免疫反應(yīng)延緩炎癥性疾病的過(guò)程［６（）］，即誘導(dǎo)腸道Ｆ〇Ｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細(xì)胞的分化、??ＩＬ－１０的產(chǎn)生及炎癥介質(zhì)的平衡發(fā)揮預(yù)防和治療炎癥性疾病的作用（圖１－４）。??ａ?Ｇｕｔ?Ｂｃａｅｉｏｔｄｅｓ??ｆｒａｇｉｌａ??Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｌｕｍｅｎ??Ｌａｍｉｎａ?ｐｒｏｐｒｉａ??＼?Ｊ?Ｊ?｜?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??ＰＳＡ?ＦＯＸＰｉ＇Ｔ＾?ｃｅｌｌｓ??；?ＣＤ４．?ＴＭｌ７ｃｅｌｈ??ＭＨＣ?Ｔｃｅｌｌ??—?遽＾，ＦＮＴ????？?Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ??ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ??Ｔ．ｌｃｅｌｂ??圖１－４?ＰＳＡ免疫作用示意圖［６１］??Ｆｉｇ?１－４?Ｉｍｍｕｎｅ?ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｍｉｃｒｏｂｉａｌ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ＰＳＡ??２．６脆弱擬桿菌能改變巨噬細(xì)胞的表型，增加巨噬細(xì)胞對(duì)致病菌的吞噬能力，??并抑制病原菌在體內(nèi)定植??Ｄｅｎｇ?Ｈ等體外將分離的脆弱擬桿菌菌體裂解液與骨髓巨噬細(xì)胞（ＢＭＤＭ）??共孵育后，在ＭＯＩ為５００的情況下，能明顯增加巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球和致病??性大腸桿菌的能力，對(duì)巨噬細(xì)胞表型分析，發(fā)現(xiàn)脆弱擬桿菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)共??刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６，向Ｍｌ型分化［氣此外，ＰａｇｌｉｕｃａＣ等報(bào)道脆弱擬桿菌??可抑制漢賽巴爾通體細(xì)菌引起的損傷，增加機(jī)體的保護(hù)功能，減少病原性細(xì)菌在??８??

Ｆｉｇ?１－５?Ｔｈｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｏｆＺＹ－３１２??３．脆弱擬桿菌抑制壞死性小腸結(jié)腸炎的其他可能機(jī)制??３．１炎癥小體的激活是否參與ＮＥＣ的發(fā)生？??ＮＥＣ是腸道免疫功能失衡而引起的炎癥性疾病，早在１９９７年，Ｖｉｓｃａｒｄｉ［６６］??，ＮＥＣ上ＩＬ－ｌＣａｓａｓｅ－１，??
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本文編號(hào)：2841725