第一部分ApoE、CALHM1基因多態(tài)性與顳葉癲癇的關聯研究 研究背景與目的 癲癇是神經系統中僅次于腦血管疾病的第二大病種。全球大約有50000000人患有癲癇,其中發(fā)展中國家的患者占80%。癲癇給患者、家庭以及整個社會都帶來了極大的疾病負擔。內側顳葉癲癇(mesial temporal lobe epilepsy, MTLE)是發(fā)病率最高的成人部分性癲癇,也是臨床上最常見的難治性癲癇綜合征。散發(fā)性MTLE是由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所導致的一類多基因復雜疾病,其中遺傳因素在MTLE的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。遺傳背景的差異在散發(fā)性MTLE人群中主要表現為單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs),大量的研究證據表明基因多態(tài)性在MTLE的易感性方面發(fā)揮了重要的作用。一些研究表明載脂蛋白E (apolipoprotein E, ApoE)基因可能是MTLE的一個易感基因,另有研究發(fā)現ApoEε4等位基因與一些疾病相關的特征比如創(chuàng)傷后癲癇發(fā)作、MTLE早的起病年齡、難治性復雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識障礙有關。而其它的一些研究未能發(fā)現ApoEε4等位基因與MTLE的關聯或者不能復制以前的關聯研究。鑒于上述不一致的研究結果,再加上不同地域和人種的群體在遺傳方面常存在差異,因此我們試圖在中國漢族人群進行ApoE基因多態(tài)性與MTLE以及上述報道的一些MTLE相關臨床變量的關聯研究。另外,最近一研究發(fā)現人鈣穩(wěn)態(tài)調節(jié)蛋白1基因(calcium homeostasis regulator 1, CALHM1)能夠調節(jié)鈣離子穩(wěn)態(tài)、提高腦內β-淀粉樣蛋白(amyloid-p,Aβ)的產生。鈣離子穩(wěn)態(tài)和腦內Aβ的沉積均與MTLE的發(fā)生有密切的關系,據此我們推測CALHM1基因可能是MTLE的易感基因,因而探討了CALHM1基因多態(tài)性與MTLE的關聯。 研究方法 本研究采用病例對照研究設計,在735例癲癇患者(包括560例MTLE患者)、558例健康對照受試者中探討了ApoEε4等位基因和-491A／T多態(tài)性與MTLE及其一些相關臨床變量的相關性；在560例MTLE患者、401例健康對照受試者中探討了CALHM1基因5個多態(tài)性位點與MTLE易感性之間的關聯。采用PCR-PIRA (Primer Introduced Restriction Analysis,引物引入限制性分析)和PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism,限制性片段長度多態(tài)性)法進行基因分型。采用盲法和隨機抽取10%的樣本重測進行質量控制。 結果 1.ApoE基因多態(tài)性與MTLE的相關性 中國漢族人群MTLE患者ApoEε4等位基因與既往較嚴重的頭部創(chuàng)傷有關,既往有顱腦損傷的患者中攜帶ε4等位基因者發(fā)展成MTLE的風險是無ε4等位基因者的1.873倍(OR=1.873,95%CI 1.084-3.237,p=0.023). MTLE組與健康對照組比較,ApoE和-491A／T的等位基因、基因型及單倍型分布無明顯差異。ApoEε4等位基因與難治性MTLE的起病年齡、難治性復雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識障礙無關。 2. CALHM1基因多態(tài)性與MTLE的相關性 CALHM1基因rs1119692位點等位基因與MTLE有明顯關聯(OR=1.35,95%CI1.10-1.65,p=0.003),經多重比較校正后p值仍有統計學差異(校正后p=0.015)。MTLE組rs1119692-A等位基因的頻率(32.4%)明顯大于健康對照組(26.2%)�；蛐头治鲆脖砻鱮s1119692變異與MTLE顯著相關(p=0.004,校正后p=0.02)。CALHM1基因多態(tài)對于MTLE遺傳易感性的影響與ApoEε4等位基因無關。四位點單倍型rs1119692-rs729211-rs2986016-rs2986017與MTLE的關聯最強(x2=19.87,p=0.0005)。其中G-G-G-T單倍型能夠顯著增加MTLE的發(fā)生風險(OR=2.09,95%CI1.27-3.42,p=0.0029),而G-A-G-C單倍型能夠明顯降低MTLE的發(fā)生風險(OR=0.70,95%CI 0.53-0.92,p=0.0106)。另外,二位點、三位點和五位點單倍型分析也表明了它們與MTLE有明顯的關聯。與Alzheimer病不同,本研究未發(fā)現rs2986017(Pro86Leu)與MTLE的關聯。MTLE組與健康對照組比較,其它的三個位點(rs729211、rs2986018、rs2986016)的等位基因與基因型均無統計學差異。 結論 ApoEε4等位基因可能是既往有顱腦創(chuàng)傷史患者發(fā)生MTLE的一個危險因素,而ApoE和-491A／T多態(tài)性與中國漢族人群MTLE的易感性、難治性MTLE的起病年齡、難治性復雜部分性發(fā)作以及MTLE發(fā)作后意識障礙無關。CALHM1基因rs1119692多態(tài)性改變可能與MTLE的發(fā)病有關,且不依賴于ApoEε4等位基因的存在。 第二部分中文版兒童癲癇影響量表的信度與效度分析 研究背景和目的 癲癇是兒童時期最常見的慢性神經系統疾病之一,我國兒童癲癇(不含熱性驚厥)每年的發(fā)病率為151／10萬,患病率為3.45%o,因此癲癇是危害兒童身心發(fā)育的重要疾病之一。最近大量的研究提示癲癇治療的終極目標已不再僅僅局限于控制癲癇發(fā)作,還要使癲癇患兒的生活質量得到全面的提高。目前,盡管已有很多用于評定兒童癲癇對癲癇患兒生活質量影響的量表問世,但仍然缺乏能夠用來評價兒童癲癇對其家庭及患兒生活質量影響的癲癇特異性調查問卷。兒童癲癇影響量表(theimpact of pediatric epilepsy scale, IPES)就是針對評價兒童癲癇對其家庭及自身生活質量的影響這一目的而創(chuàng)建的,它是一合適、有效的測評量表。不同的經濟和文化背景可能會對西方國家適用的測評工具直接在其他國家使用時的可信性和有效性產生影響。因此,本研究的目的是將英文版IPES量表恰當地翻譯成中文,并檢驗其信度、效度以及敏感度,從而為我國心理學研究以及常規(guī)臨床護理提供一個良好的測量工具。 方法 根據歐洲癌癥研究及治療機構生活質量小組的量表翻譯過程指南,將英文版IPES量表翻譯成中文。嚴格按照錄入和排除標準納入合適的病人。該量表的聚合效度是通過分析中文版IPES量表中的每個項目與中文版父母評價的兒童癲癇生活質量量表和兒童癲癇影響測評表的亞量表的相關性來評價；采用主成份分析,并作方差最大旋轉(varimax rotation)來檢驗該量表的結構效度。Cronbach's a系數用于評估每個項目與總量表的內部一致性信度；采用組內相關系數(the intraclass correlation coefficient, ICC)模型來評價該量表的重測信度。敏感度的分析是通過比較不同癲癇嚴重程度患兒的項目平均得分的差異是否顯著來評價。 結果 在將英文版IPES量表翻譯為中文的過程中,遇見的主要問題是能否準確理解其含義和文化背景的差異。共有110例患者納入本研究,在研究人員的督促下所有入組患者均完成了重測測驗。完成該量表的平均時間為5分鐘(3-10分鐘),每個項目的平均得分范圍是0.30-2.82分。該量表的所有項目都對該測量工具有顯著貢獻。效度分析表明,IPES量表的每個項目平均得分與中文版父母評價的兒童癲癇生活質量量表和兒童癲癇影響測評表中概念相近的亞量表顯著相關,主成份分析顯示三個因素(外部活動的參與、社會功能、家庭生活)解釋了該量表72%的方差。第一次和第二次測驗的總體內部一致性系數分別為0.916和0.930；該量表的重測信度范圍為0.891-0.992。另外,該量表能夠區(qū)分不同嚴重程度的癲癇患兒,提示其具有較高的敏感度。 結論 中文版IPES量表的翻譯過程經過反復斟酌,心理測量學特征分析結果提示該量表具有較好的效度、極好的內部一致性信度和重測信度以及較高的敏感度,因此它可以作為在中國評價兒童癲癇對其家庭及自身生活質量影響的嚴重程度的一個確切、可接受、簡潔的生活質量測評工具。該量表在未來的心理學研究以及常規(guī)臨床護理中都具有重要的應用價值。
【學位單位】：中國協和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R742.1
【部分圖文】：

北京協和醫(yī)學院博士研究生學位論文19bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一6是部分研究對象Pvull酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 2345678910llj21314151617，8192021222324500bP250bP100bP圖l一6:40，0瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs29s6017的PeR產物Pvull酶切結果:3，17，20為T汀;2，11，21為T/C;其余為e/C:24為 DLZ000Marker4.cALH叼了基因:51119692的基因分型:錯配引物，引入HPall酶切位點。擴增片段長度為112坤。經Hpan酶切可獲得87bp和25bp的片段。經過長時間的電泳后

6.CALH人f1基因rs2986018的基因分型:錯配引物，引入川ul酶切位點。擴增片段長度為 114bp。經Alul酶切可獲得95bP和19帥的片段。經過長時間的電泳后，19bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一9是部分研究對象Alul酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 2345678910111213141516171819202122232000bP114匕p卡95bP-.250bP 100bP圖l一9:40，0瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs29s6ols的PCR產物Alul酶切結果:20為T汀;2，3，11，17，21為C廳:其余為C/C;23為 oL2000Marker7.CALHMI基因rs2986016的基因分型:錯配引物，引入Mtul酶切位點。擴增片段長度為122bP。經Mhil酶切可獲得95bP和27bP的片段。經過長時間的電泳后，27bp的小片段已看不清楚。各種基因型的特征見圖1一2。圖1一10是部分研究對象Mlul酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖。 23456789101j121314151617181920212223122b{95bP250bP100bP圖1一10:4%瓊脂糖凝膠電泳分離顯示rs2986016的PcR產物Mlul酶切結果:18
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本文編號：2839821