本文關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞聯(lián)合血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)兔尿道缺損的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景先天性尿道下裂、尿道損傷、尿道狹窄等是泌尿外科常見疾病,其有效解決辦法仍然依賴于外科手術(shù)治療,而尿道成形及重建術(shù)是主要的治療方式。尿道成形術(shù)及重建術(shù)種類較多,目前將近有300余種,并且眾多學(xué)者和醫(yī)學(xué)工作者還一直在對其進(jìn)行改良和創(chuàng)新。然而,對于長段尿道缺損、尿道狹窄及復(fù)雜型尿道損傷的患者而言,術(shù)后出現(xiàn)尿瘺、尿道狹窄等并發(fā)癥的情況還仍然較高,成為令泌尿外科醫(yī)師頗為頭疼的問題。相關(guān)研究表明,術(shù)后尿道的血液供應(yīng)情況與上述并發(fā)癥的發(fā)生也存在的一定的聯(lián)系。隨著組織工程技術(shù)和干細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展,理想的尿道修復(fù)支架材料和良好的種子細(xì)胞在基礎(chǔ)研究及臨床上取得了令人滿意的成果。脂肪干細(xì)胞(Adipose derived stem cell,ADSCs)來源較廣泛、取材方便、再生能力較強(qiáng)且具有向骨組織、軟骨組織、心肌組織及上皮組織分化的潛能等優(yōu)點(diǎn),使其在組織工程領(lǐng)域種子細(xì)胞的研究中逐漸成為眾多研究者研究的熱點(diǎn)。同時,血管內(nèi)皮細(xì)胞(Vascular endothelial cell,VEC)是一種多功能的細(xì)胞,位于血管內(nèi)壁,許多機(jī)體的發(fā)病過程均有其參與。大量動物實(shí)驗(yàn)及臨床資料表明,VEC在改善機(jī)體缺血部位和損傷部位的血供方面有著得天獨(dú)厚的優(yōu)勢。近年來,ADSCs和VEC分別單獨(dú)聯(lián)合支架材料用來修復(fù)尿道的研究報(bào)道逐漸增多,且取得了一定的成果。然而“脂肪干細(xì)胞聯(lián)合血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)兔尿道缺損”的文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。研究目的探討應(yīng)用“脂肪干細(xì)胞(ADSCs)和血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)體外共培養(yǎng),聯(lián)合脫細(xì)胞基質(zhì)材料構(gòu)建人工尿道”修復(fù)兔尿道缺損的效果。方法1.種子細(xì)胞的獲取1.1體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增兔脂肪干細(xì)胞,并利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定;1.2血管內(nèi)皮細(xì)胞的提取、培養(yǎng)及鑒定;1.3 ADSCs與VEC進(jìn)行共培養(yǎng)。2.分別將ADSCs、VEC以及二者共培養(yǎng)細(xì)胞分別與脫細(xì)胞基質(zhì)結(jié)合,構(gòu)建組織工程化尿道。3.將60只雄性成年新西蘭兔隨機(jī)數(shù)字法分為5組,分別將其陰莖腹側(cè)尿道制作成缺損長度為2.0cm的動物模型。A組(無細(xì)胞對照組)即:單純應(yīng)用異種脫細(xì)胞基質(zhì)修復(fù)組。B組(假手術(shù)組)即:尿道缺損模型制作成功后,將尿道缺損后的兩個尿道斷端直接行端端吻合;C組(ADSCs組)即:脂肪干細(xì)胞復(fù)合異種脫細(xì)胞基質(zhì)手術(shù)修復(fù)組;D組(VEC組)即:血管內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì)手術(shù)修復(fù)組;E組(ADSCs與VEC共培養(yǎng)組)即:ADSCs與VEC共培養(yǎng)后復(fù)合異種脫細(xì)胞基質(zhì)手術(shù)修復(fù)組。4.術(shù)后于第1W、2W、4W、12W分別取A、B、C、D、E組實(shí)驗(yàn)動物的重建尿道組織,行組織學(xué)及免疫組化觀察分析。5.術(shù)后12W時分別對各組實(shí)驗(yàn)動物行逆行尿道造影及尿動力學(xué)檢查。結(jié)果1.體外培養(yǎng)、擴(kuò)增的ADSCs為梭形。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測表型CD44、CD105陽性,而CD34陰性,符合間充質(zhì)干細(xì)胞特征;VEC原代細(xì)胞呈貼壁生長,細(xì)胞形態(tài)多樣,圓形、橢圓形、長梭形或多角形,傳代內(nèi)皮呈鋪路石樣;共培養(yǎng)細(xì)胞7天時部分細(xì)胞仍保留原有的梭形,另外一部分細(xì)胞形態(tài)不同于前者,可呈多角形,巢樣分布,14天時觀察可見細(xì)胞間存在許多相互連接的突觸,并且部分細(xì)胞可融合成團(tuán)塊狀;2.E組檢測尿路上皮血管內(nèi)皮細(xì)胞因子(FⅧ)、平滑肌肌動蛋白(a-SMA)均為陽性,與脫細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合均生長良好。3.術(shù)后1W、2W、4W、12W時分別對各組兔子尿道行組織學(xué)觀察,可見E組毛細(xì)血管數(shù)目及平滑肌明顯多于C、D組;4.統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示C、D、E三組和A組相比術(shù)后出現(xiàn)并發(fā)癥的幾率低;而C、D、E三組之間相比術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率則無明顯差異。結(jié)論1.ADSCs和VEC經(jīng)體外共培養(yǎng)后可作為種子細(xì)胞應(yīng)用于組織工程化尿道的構(gòu)建和長段尿道缺損的修復(fù)。2.VEC可支持ADSCs向尿道上皮方向的轉(zhuǎn)變,并且還可以加快血管的發(fā)生;
【關(guān)鍵詞】：脂肪干細(xì)胞(ADSCs) 血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC) 共培養(yǎng) 脫細(xì)胞基質(zhì) 尿道組織工程 尿道重建
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R726.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACTS7-12
• 中英文對照縮略詞12-13
• 前言13-15
• 材料及方法15-22
• 結(jié)果22-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 附圖30-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述 組織工程的研究進(jìn)展及其在尿道重建中的應(yīng)用37-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 個人簡歷及攻讀碩士期間發(fā)表的論文59-60
• 致謝60

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本文編號：283414