肝內(nèi)膽汁淤積性肝病是兒童期肝病的重要類型,大部分預(yù)后良好,但也有少數(shù)會持續(xù)進(jìn)展為肝硬化和肝功能衰竭。進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥(Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis,PFIC)是導(dǎo)致部分肝內(nèi)膽汁淤積患兒肝病持續(xù)進(jìn)展的重要原因之一。臨床上根據(jù)GGT水平是否升高可分為正常或低GGT和伴GGT水平升高兩種臨床表型。近年來,基于分子醫(yī)學(xué)的進(jìn)步已明確表現(xiàn)為正常或低GGT的PFIC至少又可分為兩種:由ATP8B1基因突變引起的PFIC1和由ABCB11基因突變引起的PFIC2。此外,這兩種基因也分別是引起良性再發(fā)性肝內(nèi)膽汁淤積癥(Benign Recurrent Intrahepatic Cholestasis,BRIC)1型和2型的致病基因。PFIC1和PFIC2的臨床表現(xiàn)類似,如新生兒期或嬰兒期起病,臨床表現(xiàn)為黃疸、瘙癢、生長發(fā)育遲緩,血生化表現(xiàn)為結(jié)合膽紅素、轉(zhuǎn)氨酶、膽汁酸升高,GGT始終在正常范圍等。且這兩種疾病發(fā)展均較迅速,大多數(shù)患兒在成人之前會發(fā)展為肝硬化和肝功能衰竭。目前基因分析是鑒別這兩種疾病最好的方法。 ATP8B1基因位于人類染色體18q21-22,編碼P4P型ATP酶,即FIC1蛋白,該蛋白在人體的多個器官包括肝臟、胰腺和小腸等均有表達(dá)。ATP8B1基因突變所致的FIC1蛋白缺陷引起PFIC1的機(jī)制目前還不清楚。ABCB11基因位于人類染色體2q24-31,編碼ATP依賴性膽鹽輸出泵(Bile Salt Export Pump,BSEP),該蛋白是將膽鹽由肝細(xì)胞排入毛細(xì)膽管的主要載體,是形成膽汁流的重要驅(qū)動力,在人類尚未發(fā)現(xiàn)替代途徑存在。ABCB11基因突變導(dǎo)致的BSEP蛋白缺陷會使膽鹽分泌障礙,淤積于肝細(xì)胞內(nèi)的膽汁酸會對肝臟產(chǎn)生毒害作用。ATP8B1和ABCB11基因突變引起的PFIC在美國、歐洲、阿拉伯地區(qū)及我國臺灣均有病例報道,但在中國大陸還未曾見過報道。在中國大陸肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中是否存在ATP8B1和ABCB11基因突變還不清楚。本研究的目的是明確這兩種基因突變在中國大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中是否存在并明確其突變特征。 第一部分 ABCB11基因突變在低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中的意義目的明確ABCB11基因突變在中國大陸低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中是否存在及其突變特征。 方法2004.1至2007.7,復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童肝病中心診治的24例臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒為研究對象。通過PCR和直接測序的方法對這部分患兒ABCB11基因27個參與蛋白編碼的外顯子及鄰近序列進(jìn)行檢測。通過復(fù)習(xí)病史分析患兒的肝臟病理和臨床表現(xiàn)。 結(jié)果7例患兒檢測到ABCB11基因突變,共12個突變位點(diǎn)。其中包括3個無義突變、6個錯義突變、2個剪切位點(diǎn)突變和1個發(fā)生在內(nèi)含子區(qū)的突變,且這12個突變均是文獻(xiàn)上未曾見報道的新突變。這24例患兒中16例曾做過肝穿刺活檢,其中4例檢測到ABCB11基因突變,且這4例患兒均表現(xiàn)出肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變。12例沒有檢測到ABCB11基因突變的患兒中3例表現(xiàn)出肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變。結(jié)論ABCB11基因突變是導(dǎo)致本組患兒發(fā)生低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因,且突變特征與國外不同。肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變是ABCB11基因突變患兒區(qū)別于其他患兒的主要肝臟病理表現(xiàn)。肝臟病理學(xué)檢查有助于診斷PFIC2,確診還需進(jìn)行基因檢測。 第二部分 ATP8B1基因突變在低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中的意義 目的明確在中國大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中是否存在ATP8B1基因突變及其突變特征。 方法2004.1至2007.7,復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童肝病中心診治的24例臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒為研究對象。其中5例因檢測到存在ABCB11基因純合或復(fù)合雜合突變而排除在外,對剩余19例無或僅存在一個ABCB11基因突變位點(diǎn)忠兒的ATP8B1基因所有參與蛋白編碼的外顯子及鄰近序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增并直接測序。復(fù)習(xí)病史比較ABCB11基因突變患兒及ATP8B1基因突變患兒的肝臟病理表現(xiàn)。 結(jié)果共在9例患兒中檢測到10種ATP8B1基因突變類型。除錯義突變1694N和無義突變R952X外其余均為新發(fā)現(xiàn)的突變類型。在9例ATP8B1基因突變患兒中4例檢測到P209T和IVS6+5T＞G連鎖突變,其中2例純合子,2例雜合子。9例檢測到ATP8B1基因突變的患兒中5例曾做過肝臟病理學(xué)檢查,淤膽但不伴肝細(xì)胞的巨細(xì)胞樣變是這些患兒的共同病理特征。 結(jié)論在中國大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中存在ATP8B1基因突變。連鎖突變P209T和IVS6+5T＞G是該組研究對象的熱點(diǎn)突變類型。與ABCB11基因突變患兒相比,ATP8B1基因突變患兒的肝臟病理很少出現(xiàn)肝細(xì)胞巨細(xì)胞變。 總結(jié) 1.ABCB11和ATP8B1基因突變是導(dǎo)致本組患兒發(fā)生低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因。 2.本組患兒的ABCB11和ATP8B1基因突變特征與國外人群不同,有其自己的突變特點(diǎn)。 3.P209T和IVS6+5T＞G連鎖突變是該組研究對象ATP8B1基因的熱點(diǎn)突變類型。 4.肝臟病理學(xué)檢查有助于區(qū)分PFIC1和PFIC2。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R725.7
【部分圖文】：

ACCACCACCTGTGr\.圖1一14B:::戈 戈土土 {{{八八工工人、 、卜 卜 卜卜、、 、 、.、尸~~~圖1一14C圖1一14A為例20患兒基因測序圖，3875位點(diǎn)出現(xiàn)雜合序列，即箭頭示雙峰C/A;B為其一母親基因測序圖，3875位點(diǎn)亦出現(xiàn)雜合序列，即箭頭示雙峰C/A;C為其父親基因測序圖，3875位點(diǎn)序列正常，即箭頭示為C。討論ABcBll基因突變呈世界性分布。在東南亞，日本【”，和中國臺灣地區(qū)【“，曾有過該基因突變引起低GGT性進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥的病例報道。在占世界人口1/5的中國大陸該基因突變所致的PFIC是否存在及其突變特征仍不清楚。本研究首次在中國大陸低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中檢測到ABCBn基因突變

基因編碼區(qū)的8種突變在ATPSBI基因中所處的位置

形成微腺管狀結(jié)構(gòu)，門管區(qū)纖維增生伴眾多纖維間隔形成。圖2一15例6(HE染色，放大倍數(shù)10*20)肝細(xì)胞彌漫性膽汁淤積伴毛細(xì)膽管擴(kuò)張膽栓形成，門管區(qū)輕度炎癥。討論口前為止，已報道的ATPSBI基因突變類型已達(dá)70余種，不同種族之間甚至同一種族不同患者之間其突變類型也各不相同l3，’7一’91。chen等【’9]曾在4例發(fā)生AfPSBI基因突變的臺灣患兒中發(fā)現(xiàn)5種突變類型，但除1694N外其余均有別于在西方人群中發(fā)現(xiàn)的突變類型。在中國大陸也存在低GGT進(jìn)行性淤膽患兒，但還未見關(guān)于ATPSBI基因突變的報道

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 韓潔;43例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的并發(fā)癥、妊娠結(jié)局的分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

2 晏曉敏;ABCB11/BSEP相關(guān)性進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥的研究[D];華中科技大學(xué);2012年

本文編號：2831882