背景與目的 新生兒缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是新生兒期的重要疾病,是兒童致殘的重要原因。迄今為止尚無理想的治療方法。其發(fā)病機制及治療等問題一直是研究熱點。 神經(jīng)元之間的信息交流最關(guān)鍵的部位是突觸。突觸素p38是一種分子量為38KD的鈣結(jié)合糖蛋白,參與神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿、谷氨酸等的釋放和突觸可塑性的調(diào)節(jié),與腦功能活動有密切關(guān)系,對突觸素p38免疫產(chǎn)物的定位和定量能夠反映突觸的分布和密度,是突觸重建和神經(jīng)可塑性的重要標(biāo)志之一。 新生兒缺氧缺血性腦損傷早期干預(yù)是近年來研究的熱點。電刺激作為一種促進神經(jīng)康復(fù)的物理療法已應(yīng)用于臨床,但關(guān)于電刺激對神經(jīng)損傷修復(fù)的超微結(jié)構(gòu)研究及其在缺氧缺血性腦損傷后的研究較少。本實驗通過觀察新生大鼠缺氧缺血損傷后,神經(jīng)元、突觸超微結(jié)構(gòu)及突觸素表達變化的情況,來探討電刺激小腦頂核對神經(jīng)損傷后的修復(fù)及功能重建的機制。 材料與方法 1.分組:新生7d齡健康SD大鼠180只,雌雄不限,體重12-16g,隨機分成對照組、模型組、電刺激組,各60只。各組于制模術(shù)后又按3天、7天、14天、21天隨機分為4組,每組各15只。 2.Rice法模型制作:新生7d齡SD大鼠,乙醚吸入麻醉,消毒后取頸左側(cè)切口,游離左頸總動脈,用絲線結(jié)扎,縫合切口,置于缺氧箱中,持續(xù)充以氣流量為2L/min的92:8氮氧混合氣體2h。對照組僅分離出左側(cè)頸總動脈,不結(jié)扎亦不缺氧。術(shù)后夾尾左旋是制模成功的標(biāo)志,據(jù)此納入實驗。 3.電刺激治療方法:電刺激組在術(shù)后24h開始刺激治療,每次電刺激30分鐘,刺激部位為耳后相當(dāng)于人乳突處,每日1次,電刺激強度為3V、頻率70HZ,使大鼠肢體稍有震顫為宜。對照組與模型組不予電刺激治療,僅與相應(yīng)時段捕捉。 4.標(biāo)本采集與制備:三組大鼠每組分別于3天、7天、14天、21天隨機各取5只大鼠乙醚吸入麻醉后,剪開胸腔,暴露心臟,經(jīng)左心室灌注1g/L戊二醛,直至右心耳流出澄清液體,用10g/L戊二醛內(nèi)固定后,迅速取腦海馬切成1mm×1mm×2mm薄片入40g/L戊二醛中固定保存,進行觀察超微結(jié)構(gòu)。同時到預(yù)定時間,其余大鼠心臟灌注40g/L多聚甲醛固定腦組織,斷頭取腦,做冠狀切片,進行突觸素p38免疫組化檢測。 5.指標(biāo)測定 1)突觸素p38免疫組織化學(xué)方法染色:突觸素p38陽性表達呈棕黃色,用彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量切片海馬CA1區(qū)p38吸光度值(OD),每張切片取5個視野測量取其均值,同時測量同一張切片胼胝體的OD值以作為背景OD值,用矯正吸光度值COD(實測值-背景值)進行比較和分析,以避免染色過程中非特異性染色所造成的誤差。 2)海馬神經(jīng)元及突觸超微結(jié)構(gòu)觀察:將戊二醛固定標(biāo)本經(jīng)PBS液沖洗后,放入1%鋨酸中后固定,經(jīng)脫水、包埋、聚合、50nm超薄切片、醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重電子染色后,日立H-7500型透射電子顯微鏡下觀察神經(jīng)元及突觸超微結(jié)構(gòu)的變化。 6.統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS15.0軟件分析,多組均數(shù)比較用單因素方差分析,組間兩兩比較用最小顯著差異(LSD)檢驗,數(shù)據(jù)均以(?)±s表示,以α=0.05作為顯著性檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果 神經(jīng)元及突觸超微結(jié)構(gòu): 1)模型組海馬神經(jīng)元細胞固縮性改變,細胞器數(shù)量減少,細胞質(zhì)水腫明顯,線粒體腫脹明顯 2)模型組海馬神經(jīng)元突觸數(shù)量減少,突觸間隙融合不清,突觸小泡明顯減少 3)電刺激組不同時間大鼠海馬神經(jīng)元細胞線粒體水腫逐漸減輕,突觸間隙逐漸清楚,突觸小泡較前增加,與模型組同時間相比病理改變明顯減輕,至21天時神經(jīng)細胞及突觸超微結(jié)構(gòu)接近正常。 突觸素p38免疫組化染色: 1)電刺激組海馬CA1區(qū)突觸素校正光密度值(COD)3天與模型組相比有升高但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05); 2) 14天、21天突觸素COD值與模型組相比表達升高且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)且21天時與對照組相比表達升高且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論 1.電刺激可促進缺氧缺血腦損傷新生大鼠腦組織的神經(jīng)元及突觸的超微結(jié)構(gòu)恢復(fù) 2.電刺激治療可促進缺氧缺血腦損傷新生大鼠腦組織突觸的重建。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R722.1
【部分圖文】：

電刺激7d組:突觸間隙部分融合，突

圖9模型3d組:突觸間隙消失，典型的突圖10電刺激3d組:突觸間隙消失，突觸小觸結(jié)構(gòu)消失。泡減少。圖n模型7d組:突觸間隙模糊不清，突觸圖12電刺激7d組:突觸間隙部分融合，突前成分水腫。觸小泡減少。

圖9模型3d組:突觸間隙消失，典型的突圖10電刺激3d組:突觸間隙消失，突觸小觸結(jié)構(gòu)消失。泡減少。圖n模型7d組:突觸間隙模糊不清，突觸圖12電刺激7d組:突觸間隙部分融合，突前成分水腫。觸小泡減少。

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10 趙紅;徐梅;初桂蘭;;Calpain-1在缺氧缺血性腦損傷新生大鼠心肌中的表達及意義[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2011年02期

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3 健康時報特約記者 yび板

本文編號：2827408