目的： 本研究擬對(duì)MLPA診斷染色體22q11.2微缺失結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià),并應(yīng)用MLPA探討單純性圓錐動(dòng)脈干畸形染色體22q11.2微缺失的發(fā)生率。 方法： 應(yīng)用MLPA及FISH兩種方法分別檢測(cè)了32例兒童(16名男孩,16名女孩；年齡1-13歲,平均3.6±3.1歲)外周血樣本,其中,16例為已被診斷為染色體22q11.2微缺失患兒(陽性對(duì)照組),16例為體檢正常兒童(陰性對(duì)照組)。采用靈敏度,特異度及Kappa分析來評(píng)估結(jié)果。其次,MLPA對(duì)77例0-10歲單純性圓錐動(dòng)脈干畸形(CTD)患兒進(jìn)行染色體22q11.2微缺失篩查,并對(duì)陽性樣本進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)驗(yàn)證。采用Fisher精度檢驗(yàn),P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： MLPA檢測(cè)32例樣本中,16例陽性對(duì)照樣本均有染色體22q11.2微缺失,且缺失片段長(zhǎng)度約3-Mb；16例陰性對(duì)照樣本中未發(fā)現(xiàn)22號(hào)染色體缺失。FISH證實(shí)了16例22q11.2微缺失患兒均存在22號(hào)染色體缺失,16例陰性對(duì)照樣本不存在缺失。因此,MLPA診斷染色體22q11.2微缺失的靈敏度及特異度高。 MLPA對(duì)77例單純性CTD患兒進(jìn)行了22號(hào)染色體微缺失篩查,其中55例為法洛四聯(lián)癥(TOF),4例室間隔缺損型肺動(dòng)脈閉鎖(PA-VSD),8例右室雙出口(DORV),10例大動(dòng)脈轉(zhuǎn)位(TGA)。6例(7.8%)患兒存在染色體22q11.2微缺失,其中4例為TOF,1例為PA-VSD,1例為DORV;10例TGA患兒中均未發(fā)現(xiàn)22q11.2缺失。 結(jié)論： 1.MLPA是一種快速、可靠、高通量及相對(duì)經(jīng)濟(jì)的診斷染色體22q11.2微缺失的有效方法,彌補(bǔ)了FISH技術(shù)的不足,可用于臨床實(shí)驗(yàn)室快速診斷染色體22q11.2微缺失,具有較高的臨床診斷價(jià)值。 2.單純性CTD染色體22q11.2微缺失發(fā)生率約為7.8%。單純性CTD患兒中,PA-VSD, DORV及TOF比TGA更易發(fā)生染色體22q11.2微缺失。臨床醫(yī)師應(yīng)加強(qiáng)對(duì)單純性CTD患兒的遺傳篩查及咨詢。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R725.4
【部分圖文】：

9q34和 17pl3等。與本研究密切相關(guān)的14個(gè)MLPA探針分布于“典型缺失’·區(qū)，其與FISH探針的相對(duì)位置模式圖，如圖3一1。聳q，唯JAPp蒯ma妞扮1‘翎.戶.曰目...曰悅...曰..LCR名于Ae{「 !SHPmh既 MLPAPfo幻舫:N25JDZ之 :CLTCLICDC:川RA誰2325泊22572翔13.3仁G戶1日BT日大1以洲ST日義ITx45石7O6C舫:NRDZ{KLHL22ZN戶7月1O陀QAp12以丫Rl14圖3一 1LcRs、FlsH探針及MLPA探針在染色體22qll.2相對(duì)位置結(jié)構(gòu)示意圖。黑條表示 22ql1.2微缺失綜合征常見缺失片段大小(3一Mb和 1.5一Mb)。數(shù)字表示14個(gè)MLPA探針相對(duì)位置。經(jīng)典缺失片段(3一Mb)包括LcRsA一LCRsD以及14個(gè)MLPA探針 (CLTcLI一LzTRI);近端缺失片段 (l.SMb)包含LcRsA一B、9個(gè)MLPA探針(e耳eLI一ooeRS)及FISH檢測(cè)探針 (N25022575)。 FxSH對(duì)照探針22ql3.3位于染色體 22ql1.2以外區(qū)域。LCRs:低拷貝重復(fù)序列;FISH:熒光原位雜交;ML隊(duì):多重連接探針擴(kuò)增法。本研究所選用MLPA試劑盒探針具體信息如下表3一1:

D一fragments探針峰高僅稍微比 55ntD一丘銘ments探針和 96niD一丘agments探針的峰高“低”一點(diǎn)，且ML隊(duì)檢測(cè)探針峰高遠(yuǎn)“高于”DNA質(zhì)量控制探針峰高，說明MLPA反應(yīng)的探針連接、雜交等過程均成功(如圖4一l)。圖4一 1ML隊(duì)探針毛細(xì)管電泳結(jié)果示意圖。圖示一個(gè)成功的男性患兒樣本ML隊(duì)反應(yīng)，4個(gè)oNA質(zhì)量控制探針(Q一fr吧ments:64一70一76一52)峰高均明顯“低于”其余檢測(cè)探針峰高;3個(gè)ML隊(duì)反應(yīng)過程質(zhì)量控制探針(D一fragmenis:88一92一96)均可見， 92niD一fragmenis探針峰高稍低于比 88niD一fragmenis探針和96niD一fragments探針的峰高;性別判定探針 (100一 105nt)顯示該樣本為男性。其余48個(gè)ML隊(duì)探針峰高均合理分布，且高于4個(gè)DNA質(zhì)量控制探針峰高。根據(jù)探針相對(duì)基因拷貝數(shù)比值結(jié)果分析，發(fā)生缺失的探針的峰高/鋒面積應(yīng)比正常對(duì)照探針的峰高/鋒面積低約30一50%。

浙江大學(xué)碩十學(xué)位淪文第部分 {{{{{}}}七七玉 玉 }}}JJJbbb翩 翩翩 翩 444)))佩 佩咖咖血 血即 即 即即 即 即 即 即 即乞 乞乞石右藺阿、胡胡l函習(xí) }}}卜襯萬萬 ...，、.日翻翻 翻 翻翻翻翻翻 jjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj頤 頤 習(xí)習(xí)1..，皿‘ ‘ ‘ 圖4一 2MLPA診斷1例染色體22qll.2微缺失綜合征樣本(a)和1例正常對(duì)照樣本(b)毛細(xì)管電泳圖。擴(kuò)增后ML隊(duì)探針(1一14號(hào))相對(duì)基因拷貝數(shù)峰高/峰面積(a，箭頭所示)比正常對(duì)照樣本(b，箭頭所示)探針相對(duì)基因拷貝數(shù)峰高/峰面積降低30%一50%。4·ZMLPA和FlsH診斷結(jié)果FlsH檢測(cè)32例樣本中，16例陽性對(duì)照樣本均有染色體22qll.2微缺失，另外16例陰性對(duì)照不存在缺失。經(jīng)ML隊(duì)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，16例陽性樣本探針比值(0.594士0.075)，遠(yuǎn)小于正常對(duì)照樣本探針比值(p<0.05)，提示均存在染色體22qll.2微缺失

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2824805