目的探索褪黑素增強(qiáng)病毒唑抗呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)感染的作用及其部分機(jī)制;觀察褪黑素(MT)對(duì)感染鼠的免疫功能影響,為褪黑素可能應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 方法①體外試驗(yàn)中,采用微量細(xì)胞病變抑制法,通過四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT),觀察兩種藥物單獨(dú)使用以及聯(lián)用時(shí)分別對(duì)RSV在人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2)所致細(xì)胞病變抑制效應(yīng),按Reed-muench法計(jì)算出藥物致細(xì)胞半數(shù)中毒濃度(TD50)、半數(shù)50%病變抑制的藥物濃度(IC50)和治療指數(shù)(TI),用統(tǒng)計(jì)學(xué)及金正均法q值判斷兩藥的相互作用,以及MT在不同給藥時(shí)間時(shí)病毒唑?qū)SV的抑制作用。②體內(nèi)試驗(yàn)中,以呼吸道合胞病毒滴鼻感染小鼠建立病毒性肺炎模型,褪黑素和病毒唑進(jìn)行灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、病毒模型組、病毒唑組(17.5、35、70mg/kg 3個(gè)劑量組)、褪黑素組(5、10、20mg/kg 3個(gè)劑量)、褪黑素和病毒唑聯(lián)合組(9個(gè)劑量組)。分別從小鼠眼球取血,收取血清。斷頸處死小鼠,取肺組織,無菌取脾臟。觀察褪黑素和病毒唑單獨(dú)使用以及聯(lián)合使用時(shí)對(duì)小鼠病毒性肺炎的治療作用;用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)作為誘導(dǎo)劑,MTT法檢測(cè)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能;以YAC-1細(xì)胞作為靶細(xì)胞用MTT法檢測(cè)小鼠NK細(xì)胞活性;采用SRBC的定量溶血測(cè)定法,觀察褪黑素對(duì)小鼠抗體形成細(xì)胞能力的影響;ELISA法檢測(cè)血清樣品中IFN-γ水平;將右肺中葉取出后立即用10%的福爾馬林固定,常規(guī)切片HE染色后在光鏡下觀察。 結(jié)果 一、體外實(shí)驗(yàn) ①褪黑素和病毒唑?qū)ep-2細(xì)胞的TD50分別為2655±235 mg/L和3874±356mg/L。 ②病毒唑?qū)粑篮习《揪哂幸种谱饔?且有濃度依賴性關(guān)系,其IC50為280±46mg/L,TI為9.48±3.8。③兩種藥物聯(lián)合使用時(shí),對(duì)病毒的抑制作用明顯增加,褪黑素25、50mg/L分 別與病毒唑50、100、200mg/L聯(lián)合使用時(shí),q值均1.15,呈現(xiàn)協(xié)同作用。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果均顯示兩種藥物間存在交互作用。褪黑素能增強(qiáng)病毒唑的抑制RSV感染作用。 ④MT同時(shí)處理或者預(yù)處理,RSV對(duì)病毒唑的敏感性均提高,而且MT預(yù)處理24h的效果更優(yōu)于同時(shí)處理。 二、體內(nèi)試驗(yàn) ①RSV感染鼠治療結(jié)果顯示,病毒唑可以明顯降低小鼠肺指數(shù)值,其有效濃度為17.5 mg.kg-1,隨著藥物劑量增加,療效增強(qiáng)。 ②經(jīng)褪黑素大、中、小三個(gè)劑量組(20、10、5mg/kg)的處理,其小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能、NK細(xì)胞活性、抗體形成細(xì)胞能力與模型組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。褪黑素能夠明顯提高小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能、NK細(xì)胞活性以及抗體形成細(xì)胞能力。 ③褪黑素能提高淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ的能力,并呈現(xiàn)劑量依賴性。 ④病理學(xué)結(jié)果顯示,病毒唑能減輕肺組織的炎性損傷,但褪黑素聯(lián)合應(yīng)用能夠明顯減輕肺組織的炎性損傷。 結(jié)論 ①體外抗病毒實(shí)驗(yàn)表明,病毒唑能夠抑制RSV細(xì)胞病變,且具有濃度依賴性關(guān)系。褪黑素能夠促進(jìn)病毒唑的抗病毒能力,兩者聯(lián)合運(yùn)用較病毒唑單獨(dú)使用具有更好的效果。 ②體內(nèi)抗病毒實(shí)驗(yàn)表明,病毒唑?qū)Ω腥臼蟮牟《拘苑窝拙哂幸欢ǖ囊种谱饔?褪黑素能夠增強(qiáng)病毒唑的抗病毒作用。兩者聯(lián)合后可以增強(qiáng)抑制RSV的作用,達(dá)到優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的效果。 ③褪黑素能夠增強(qiáng)病毒性肺炎模型小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能、NK細(xì)胞活性以及抗體形成細(xì)胞能力,并且提高血清中的IFN-γ水平,從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能,促進(jìn)病毒唑抗呼吸道合胞病毒的作用。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2818080