目的 1.通過氣相色譜質(zhì)譜(Gas chromatography-Mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用分析方法建立定量尿液N-乙酰天門冬氨酸(N-Acetyl Aspartic acid, NAA)的方法,并探討在篩查和診斷Canavan病(Canavan disease,CD)中的意義。 2.比較SCAN和SIM兩種離子掃描模式在定量檢測尿中NAA的差異和意義。 方法 1.對尿液NAA進行GC-MS定量分析。 2.取100ul尿液,加入100ul內(nèi)標(biāo)物正十七烷酸,采用尿素酶法進行樣本前處理。 3.應(yīng)用內(nèi)標(biāo)法建立尿液中NAA的定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4.對尿液中NAA定量分析方法的線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、精密度、回收率和定量下限進行方法學(xué)評價。 5.測定正常健康對照組尿液中NAA的濃度范圍。 6.對2009年-2010年由歐洲遺傳代謝病篩查診斷中心提供的CD室間質(zhì)控(ERNDIM External Quality Assurance (EQA) schemes )尿液樣品進行檢測。 7.標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬定、方法學(xué)的評價、正常健康對照組尿液中的NAA濃度范圍以及室間陽性質(zhì)控尿液樣品中NAA的濃度都分別采用GC/MS分析方法中的SCAN和SIM離子掃描模式進行檢測分析。 8. GC/MS分析方法中的SCAN和SIM離子掃描模式在NAA定量中的線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、精密度、回收率、定量下限等的比較和意義。 結(jié)果 1. NAA衍生化后在色譜圖中會出現(xiàn)NAAdi- TMS和NAAtri-TMS兩種形式,其保留時間分別為17.008min和17.249min。采用GC/MS分析方法的SCAN離子掃描模式時,NAA在10～1000μg/ml內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)在0.9956,批內(nèi)精密度為5.4%～12.15%,批間精密度為5.82%～10.43%,穩(wěn)定性及重復(fù)性好。100ug/ml及1000ug/ml兩個濃度回收率分別為87%及95%,準(zhǔn)確性高,但是10ug/ml時回收率為180%,準(zhǔn)確性下降。定量下限為10ug/ml。正常健康對照組尿液中的NAA濃度范圍是48.88±17.2umol/mmolCr(mean±2SD)。用該方法檢測歐洲遺傳代謝病篩查診斷中心提供的CD室間質(zhì)控尿液標(biāo)本,檢出濃度均在其95%的置信區(qū)間內(nèi)。 2.比較GC/MS分析方法中使用SCAN和SIM離子掃描模式在定量NAA時的差異:采用GC/MS分析方法的SIM離子掃描模式時,NAA在1～1000μg/ml內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)在0.9984,批內(nèi)精密度為2.49%～7.96%,批間精密度為4.28%～8.79%,穩(wěn)定性及重復(fù)性較SCAN離子掃描模式好。10ug/ml、100ug/ml及1000ug/ml三個濃度回收率分別為110%、90.03%及108%,定量低濃度NAA時準(zhǔn)確性較SCAN離子掃描模式高。正常健康對照組的尿液NAA濃度范圍是8.67±7.88umol/mmolCr(mean±2SD)。用該方法檢測歐洲遺傳代謝病篩查診斷中心提供的CD室間質(zhì)控尿液標(biāo)本,檢出濃度均在其95%的置信區(qū)間內(nèi)。 結(jié)論 1.通過GC-MS建立了快速、敏感及準(zhǔn)確地定量檢測尿液中NAA的分析方法,符合歐洲質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),為篩查及診斷CD提供了參考和依據(jù)。 2. GC/MS分析方法的SIM較SCAN離子掃描模式更為穩(wěn)定,重復(fù)性更好,定量更準(zhǔn)確,在低濃度時可對NAA作更準(zhǔn)確的定量。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R725.8

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本文編號：2816560