大劑量甲氨喋呤化療對急性淋巴細(xì)胞白血病患兒腸道菌群的影響研究

發(fā)布時間：2020-08-31 19:51

　　目的：(1)研究和分析大劑量甲氨喋呤(HDMTX)化療對急性白血病患兒腸道菌群的影響；(2)探討16SrRNA／DNA熒光定量PCR技術(shù)在臨床細(xì)菌定量分析中可行性。方法：(1)提取36例健康兒童和36例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒行大劑量甲氨喋呤化療前后糞便標(biāo)本的細(xì)菌DNA，測量和比較對照組和觀察組標(biāo)本細(xì)菌的OD_(260)值；(2)采用16SrRNMDNA熒光定量PCR技術(shù)對對照組和觀察組糞便標(biāo)本中的雙歧桿菌和大腸桿菌進(jìn)行定量分析和比較。結(jié)果：(1)大便標(biāo)本中細(xì)菌的OD_(260)值分別為：對照組3479.3±870.5ng／μl，觀察組化療前1天2436.3±768.6 ng／μl，化療后第3天1496.5±577.1 ng／μl，化療后第7天1966.6±598.3 ng／μl；對照組和觀察組以及觀察組化療前后相比，均有顯著差異(P＜0.01)；(2)大便標(biāo)本中雙歧桿菌對數(shù)值分別為：對照組9.49±0.41，觀察組化療前1天7.24±0.33，化療后第3天6.00±0.27，第7天6.59±0.33；大腸桿菌對數(shù)值分別為對照組7.52±0.43，觀察組化療前1天6.62±0.42，化療后第3天5.96±0.42，第7天7.02±0.41；對照組和觀察組以及觀察組化療前后，大便標(biāo)本中雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量的對數(shù)值均有顯著差異(P＜0.01)，其中觀察組較對照組、觀察組化療后較化療前的雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量均有明顯減少，化療后第3天尤顯，而第7天較第3天有所回增。結(jié)論：(1)大劑量甲氨喋呤化療方案對急性白血病患兒腸道雙歧桿菌和大腸桿菌有明顯影響，化療后數(shù)量顯著下降；(2)急性白血病患兒腸道菌群和健康兒童相比有顯著差異，細(xì)菌總數(shù)和益生菌量都有明顯減少，可能與長期化療及抗生素等因素有關(guān)；(3)16SrRNA／DNA熒光定量PCR技術(shù)在臨床細(xì)菌定量分析中切實可行。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R733.71
【部分圖文】：

熔解曲線,雙歧桿菌,產(chǎn)物,二聚體

455 Stage372℃，10minl結(jié)果從熔解曲線的產(chǎn)物峰讀取Tm，如圖2、3，由于二聚體鏈明顯短于產(chǎn)物鏈，Tm低于產(chǎn)物，故去二聚體溫度一般選定產(chǎn)物Tm的低值，據(jù)此可以在反應(yīng)程序的延伸后各加入一個循環(huán)溫度分別為:雙歧桿菌88℃55，大腸桿菌83℃55。:職纂球繃圖2:雙歧桿菌熔解曲線

熔解曲線,大腸桿菌,雙歧桿菌,定量PCR

圖3:大腸桿菌熔解曲線雙歧桿菌產(chǎn)物Tm為88℃~90℃;大腸桿菌產(chǎn)物Tm為S3℃一84℃。3.4.2.定量PCR反應(yīng)反應(yīng)體系同表3，設(shè)定反表5:雙歧桿菌熒光定量反應(yīng)反應(yīng)步驟Stagel反應(yīng)溫度和時間95oC，smin(預(yù)變性)n5s，、反·11反.)S匪毅長5峭11StageZStage395℃60℃，72℃88℃72“C，10min表6:大腸桿菌熒光定量反應(yīng)

雙歧桿菌,循環(huán)曲線