研究背景慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染損傷宿主免疫應(yīng)答,致使宿主不能完全清除病毒,肝臟炎癥病理持續(xù)存在并最終發(fā)展為肝硬化和原發(fā)性肝癌。在慢性HBV感染中,由于持續(xù)暴露于高濃度的HBV抗原之下,HBV特異性的T細(xì)胞(HBV-specific T cells)數(shù)量減少并且功能耗竭,這是導(dǎo)致HBV感染慢性化的主要原因。目前治療慢性乙型肝炎(CHB)的長(zhǎng)效干擾素α(PegIFNα)可通過(guò)激活宿主免疫應(yīng)答抑制病毒復(fù)制,提高HBV e抗原(HBeAg)血清學(xué)轉(zhuǎn)換率,并且停藥后復(fù)發(fā)率較低。既往在成人CHB研究中發(fā)現(xiàn)PegIFNα能激發(fā)HBV特異性T細(xì)胞的抗病毒作用,但在兒童CHB中尚未研究。研究目的本研究以PegIFNα治療HBeAg 陽(yáng)性兒童CHB為對(duì)象,探討PegIFNα治療過(guò)程中T/NK細(xì)胞表型頻數(shù)及HBV特異性T細(xì)胞細(xì)胞因子分泌功能的動(dòng)態(tài)變化,并分析其與治療結(jié)局的關(guān)系。研究方法1.研究對(duì)象以2015-2017年20例PegIFNα治療HBeAg兒童CHB為對(duì)象。收集0,12,24,36,48周肝素鈉抗凝外周血,根據(jù)治療結(jié)局分為完全應(yīng)答組(complete response,CR)和不應(yīng)答病例組(non-response,NR)。CR組定義為HBV DNA,HBsAg和HBeAg三者轉(zhuǎn)陰;NR組定義為HBV DNA,HBsAg和HBeAg三者下降程度均小于 1 log10 IU/mL 或 1 log10 COI。2.HBV病毒定量和血清學(xué)檢測(cè)COBAS TaqMan HBV檢測(cè)血清病毒定量,雅培i2000檢測(cè)HBeAg和HBsAg。3.T/NK細(xì)胞表型檢測(cè)Ficoll密度梯度離心法分離得外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CR/NR 組 CD69+CD4+/CD8+T 細(xì)胞、TRAIL+CD4+/CD8+T 細(xì)胞和 TRAIL+CD56+NK細(xì)胞的頻數(shù)。4.HBV特異性細(xì)胞應(yīng)答檢測(cè)以合成的HBV B基因型的core/envelope/X/CF肽庫(kù)特異刺激PBMCs 10天,標(biāo)記CD4+/CD8+T細(xì)胞表型后破膜胞內(nèi)染色I(xiàn)FN-γ并以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其頻數(shù)。結(jié)果1.PegIFNα 顯著降低患兒 HBV DNA、HBsAg、HBeAg 水平HBV DNA、HBsAg、HBeAg和ALT在未治療患兒中均呈現(xiàn)較高水平(中位數(shù)分別為 HBV DNA 1.7E+08 IU/mL,HBsAg 23339.500 IU/mL,HBeAg 1260.690 COI,ALT 110.5 U/L);經(jīng)過(guò) PegIFNα 治療后,HBV DNA、HBsAg、HBeAg可見(jiàn)顯著下降(中位數(shù)分別為HBV DNA 10 IU/mL,HBsAg 0.92 IU/mL,HBeAg 2.17COI,ALT 69 U/L),均有顯著差異(P0.01)。2.CR組CD69+/TRAIL+T細(xì)胞頻數(shù)明顯高于NR組經(jīng)過(guò)PegIFNα治療后,CR組CD69+CD8+T細(xì)胞頻數(shù)顯著高于NR組(1.82%vs.0.61%,P=0.0003);同樣,TRAIL+CD4+T 和 TRAIL+CD8+T 細(xì)胞頻數(shù)在CR 組也顯著高于 NR 組(分別為 1.30%vs.0.19%,P=0.001,1.34%vs.0.34%,P=0.002)。3.CR組T/NK細(xì)胞表型隨治療的動(dòng)態(tài)變化選取相鄰時(shí)間log10 HBV DNA最大變化點(diǎn)(定義為MFC)作為縱向比較的時(shí)間點(diǎn),MFC時(shí)間點(diǎn)的CD69+CD4+/CD8+T細(xì)胞頻數(shù)顯著高于基線(分別為1.19%vs.0.69%,P=0.01;2.45%vs.1.18%,P=0.003);MFC時(shí)間點(diǎn) TRAIL+CD4+/CD8+T細(xì)胞頻數(shù)同樣顯著高于基線(分別為2.81%vs.1.92%,P=0.009;2.75%vs.1.89%,P=0.002)。此外,與基線相比,MFC 時(shí)間點(diǎn)的 TRAIL+CD56hi NK細(xì)胞的頻數(shù)顯著升高(2.00%vs.0.92%,P=0.003)。并且,基線時(shí)的TRAIL+CD56hi NK細(xì)胞頻數(shù)與基線的ALT水平呈正相關(guān)(r=0.663,P=0.002)。4.CR組HBV T細(xì)胞特異性應(yīng)答水平顯著高于NR組HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答在CR組和NR組可檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果。在基線時(shí)間點(diǎn),CR組的core/envelope肽庫(kù)特異性刺激的IFN-γ+CD4+/CD8+T細(xì)胞頻數(shù)顯著高于NR組(均值0.68%vs.0.26%,P=0.001);而在治療結(jié)束時(shí),兩組HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答水平的差異進(jìn)一步增大。在CR組中,治療結(jié)束時(shí)間點(diǎn)的core特異性的IFN-γ+CD4+/CD8+T細(xì)胞應(yīng)答水平顯著高于基線(0.67 vs.1.04,P=0.009;0.5 vs.0.91;P=0.041);基線core/envelope特異性的IFN-γ+CD4+/CD8+T頻數(shù)分別與log 10 HBV DNA從基線到12 周的下降程度呈正相關(guān)(r=0.639,P=0.002;r=0.680,P=0.001)。結(jié)論在PegIFNα治療兒童CHB中,早期增強(qiáng)的HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答水平與治療結(jié)局相關(guān),強(qiáng)效的HBV特異性T細(xì)胞應(yīng)答預(yù)示更易發(fā)生HBsAg轉(zhuǎn)陰,最終可達(dá)到臨床治愈。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R725.1
【圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．邋Ｃｌａｓｓｉｃａｌ邋ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ邋（ＩＦＮ）邋ａｎｄ邋ＩＦＮ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ邋ｇｅｎｅ邋（ＩＳＧ）逡逑ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｔｏ邋ｖｉｒａｌ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ逡逑（圖片來(lái)源：Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ邋ｉｎ邋Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ邋（２０１８）邋１８；邋９：１６１１）逡逑于２周歲以上兒童，ＩＦＮｏｔ可考慮作為首選治療［３７，３８］。丨ＦＮａ副作用包括發(fā)熱、類逡逑流感癥狀、甲狀腺功能亢進(jìn)或減低、自身免疫疾病、行為異常、消化不良、白逡逑細(xì)胞減少以及生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，但這些副作用在停藥后基本可自行消退［３＜Ｘ３＼逡逑長(zhǎng)效干擾素目前尚未批準(zhǔn)治療兒童慢性乙型肝炎（已批準(zhǔn)聯(lián)合利巴韋林治逡逑療兒童慢性丙型肝炎）。由于在干擾素分子上增加了聚乙二醇基團(tuán)，長(zhǎng)效干擾逡逑素更不易被分解，能維持體內(nèi)較高水平的血藥濃度，與普通干擾素相比注射間逡逑隔時(shí)間更長(zhǎng)（一周…次）。并且在治療成人慢性乙型肝炎的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，逡逑長(zhǎng)效干擾素抗病毒效果優(yōu)于普通干擾素，而安全性相似［３９］。在一項(xiàng)長(zhǎng)效干擾素逡逑６逡逑

圖１－２．邋ＨＢＶ感染過(guò)程中的適應(yīng)性抗病毒應(yīng)答逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２．邋Ａｎｔｉ－ｖｉｒａｌ邋ａｄａｐｔｉｖｅ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ＨＢＶ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ逡逑（圖片來(lái)源？？邋Ｖｉｒｕｓｅｓ邋（２００９）邋１：邋９１－１０３邋）逡逑除，機(jī)體對(duì)ＨＢＶ特異性Ｔ淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)顯得尤為重要。其中ＰＤ－ｌ，逡逑ＩＬ－１０，精氨酸酶，髓源抑制細(xì)胞（ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ邋ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ邋ｃｅｌｌｓ，邋ＭＤＳＣｓ）和逡逑調(diào)節(jié)性Ｔ細(xì)胞（ｒｅｇｕｌａｒ邋Ｔ邋ｃｅｌｌｓ，邋Ｔｒｅｇ）在負(fù)調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用１５５＿５７］。在這些負(fù)調(diào)逡逑節(jié)細(xì)胞或分子的調(diào)控下，ＨＢＶ特異性Ｔ淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，應(yīng)答水平降低，同時(shí)逡逑記憶Ｔ細(xì)胞增加并可維持?jǐn)?shù)十年［５８］。逡逑ＣＤ４＋邋和０0８＋丁細(xì)胞識(shí)別不同表位（ｃｏｒｅ，邋ｅ，ｅｎｖｅｌｏｐｅ，ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ和ｘ）所逡逑產(chǎn)生的特異性效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量有差異１５９４２１。識(shí)別優(yōu)勢(shì)表位更有助于研發(fā)相應(yīng)的逡逑疫苗，從而增強(qiáng)Ｔ細(xì)胞應(yīng)答，防止病毒變異逃逸。但與此相關(guān)的研究比較少，逡逑因?yàn)榧词故穷l數(shù)最高的表位特異性的Ｔ細(xì)胞，尚不能等價(jià)于抗病毒效果最好的Ｔ逡逑細(xì)胞。人類Ｔ細(xì)胞表位非常復(fù)雜，同一人的ＣＤ８＋邋Ｔ細(xì)胞最多可以表達(dá)６種ＭＨＣ逡逑

第一章前言逡逑１．５慢性ＨＢＶ感染過(guò)程免疫應(yīng)答與年齡關(guān)系逡逑如前所述，母嬰傳播是兒童慢性ＨＢＶ感染的首要病因。由于兒童慢性ＨＢＶ逡逑感染以免疫耐受為特點(diǎn)，并且在ＨＢＶ轉(zhuǎn)基因小鼠的研宄中發(fā)現(xiàn)幼齡小鼠的Ｔ／Ｂ逡逑細(xì)胞分化成熟受抑制［８９］，因此既往認(rèn)為ＨＢＶ是一種利用嬰兒不成熟的免疫系統(tǒng)逡逑從而建立持續(xù)感染的典型病毒。但是隨著研究進(jìn)展發(fā)現(xiàn)，在胎兒早期，效應(yīng)免逡逑疫應(yīng)答和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答已經(jīng)可以被檢測(cè)到；并且，新生兒對(duì)病毒感染可以建立逡逑病毒特異性的Ｔ細(xì)胞應(yīng)答。流行病學(xué)研宄也發(fā)現(xiàn)ＨＢＶ陽(yáng)性母親所分娩的嬰兒對(duì)逡逑ＨＢＶ疫苗的應(yīng)答效率和健康對(duì)照組相似［％］；并且在瘧疾－ＨＢＶ共感染的患兒中逡逑發(fā)現(xiàn)其血液原蟲(chóng)數(shù)量更少，但更易發(fā)生腦型瘧疾（腦型瘧疾是Ｔｈｌ型細(xì)胞介導(dǎo)的逡逑并發(fā)癥）［９１］�？傊@一結(jié)論正在經(jīng)歷挑戰(zhàn)。逡逑

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本文編號(hào)：2807315