【摘要】：研究背景膿毒癥是感染誘發(fā)的系統(tǒng)性失調(diào)控免疫反應(yīng),是兒童重癥監(jiān)護(hù)病房的常見危重病,在世界范圍內(nèi)是導(dǎo)致兒童死亡的主要原因之一。膿毒癥心肌損傷的具體機(jī)制尚不明確。膿毒癥發(fā)生時(shí)機(jī)體產(chǎn)生大量促炎調(diào)節(jié)因子,這些進(jìn)入血液循環(huán)的促炎因子可對(duì)心肌造成炎性損傷。大量?jī)?nèi)毒素的釋放是膿毒癥的特征之一,內(nèi)毒素可以對(duì)心肌組織造成直接損傷,使心肌組織出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)性改變以及心肌能量代謝障礙。自噬是細(xì)胞維持穩(wěn)態(tài)的一種生理現(xiàn)象,在應(yīng)激或損傷時(shí)會(huì)啟動(dòng)增強(qiáng)。內(nèi)毒素也是誘導(dǎo)自噬啟動(dòng)的重要信號(hào),一定強(qiáng)度的自噬被認(rèn)為有利于減輕膿毒癥狀態(tài)下的組織損傷。預(yù)適應(yīng)現(xiàn)象被證實(shí)存在于多種器官組織,研究證實(shí)心肌組織存在內(nèi)毒素預(yù)適應(yīng),可以減輕缺血再灌注損傷;但能否誘導(dǎo)心肌細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)內(nèi)毒素的耐受能力尚不明確。研究目的探究心肌細(xì)胞內(nèi)毒素預(yù)適應(yīng)是否具有保護(hù)作用,以及自噬在心肌內(nèi)毒素預(yù)適應(yīng)過程中的影響。研究方法第一部分:健康新生SD乳鼠,分離心肌組織進(jìn)行體外原代培養(yǎng)。隨機(jī)分為六組:(1)空白對(duì)照組CON:全培養(yǎng)基培養(yǎng)20h;(2)預(yù)適應(yīng)對(duì)照組PRE:1μg/ml LPS刺激4h,后換液為全培養(yǎng)基去除刺激至結(jié)束;(3)預(yù)適應(yīng)1組PH5:1μg/ml LPS刺激4h,后換液去除刺激12h,再使用大劑量的5μg/mlLPS刺激4h;(4)大劑量對(duì)照1組H5:5μg/mlLPS刺激4h;(5)預(yù)適應(yīng)2組PH50:1μg/mlLPS刺激4h,后換液去除刺激12h,再使用大劑量的50μg/ml LPS刺激4h;(6)大劑量對(duì)照2組H50:50μg/ml LPS刺激4h。第二部分:在第一部分基礎(chǔ)上增加藥物干預(yù)自噬的組別,雷帕霉素對(duì)照組RAPA:含雷帕霉素0.1μM/m 的全培養(yǎng)基孵育4h,后換液為全培養(yǎng)基去除刺激至結(jié)束。雷帕霉素組RH:含雷帕霉素0.1μM/ml的全培養(yǎng)基孵育4h,后換液去除刺激12h,再使用大劑量的5μg/mlLPS刺激4h。3-MA對(duì)照組PM:含1μg/ml LPS及5mM/ml 3-MA的全培養(yǎng)基孵育4h,后換液去除刺激至結(jié)束。3-甲基腺嘌呤組PMH:含1μg/ml LPS及5mM/ml3-MA的全培養(yǎng)基孵育4h,后換液為全培養(yǎng)基去除刺激12h,最后使用大劑量5μg/mlLPS刺激4h。結(jié)束后收取細(xì)胞和培養(yǎng)基,做后續(xù)IL-1β、TNF-α、LDH及LC3-Ⅱ檢測(cè)。第三部分:去除預(yù)適應(yīng)后的間歇期,設(shè)置梯度對(duì)照組P4:1μg/mlLPS刺激4h,后換液去除刺激4h,與梯度組同時(shí)收取細(xì)胞。梯度組P4H4:1μg/mlLPS刺激4h,后立即換液為大劑量5μg/ml內(nèi)毒素LPS的全培養(yǎng)基刺激4h。結(jié)束干預(yù)后收取各組細(xì)胞和培養(yǎng)基,做后續(xù)IL-1β、TNF-α、LDH及LC3-Ⅱ檢測(cè)。研究結(jié)果1.內(nèi)毒素預(yù)適應(yīng)上調(diào)了心肌細(xì)胞LC3-Ⅱ,相比于直接接觸大劑量LPS可以減輕IL-1β、TNF-α的mRNA表達(dá)以及LDH的外漏。2.雷帕霉素預(yù)先誘導(dǎo)LC3-Ⅱ上調(diào)也可以減輕高濃度LPS引起的IL-1β、TNF-α高表達(dá)和LDH漏出,使用3-MA適度下調(diào)預(yù)適應(yīng)后LC3-Ⅱ的表達(dá)量能進(jìn)一步降低IL-1β、TNF-α的表達(dá)量和LDH漏出量。3.梯度升高LPS濃度也可以上調(diào)LC3-Ⅱ蛋白,可以減輕大劑量LPS造成的 IL-1β、TNF-α 和 LDH 升高。結(jié)論1.小劑量?jī)?nèi)毒素對(duì)心肌細(xì)胞做預(yù)適應(yīng)處理后,可以在短期內(nèi)提高心肌細(xì)胞對(duì)大劑量?jī)?nèi)毒素的抵抗性,一定程度上減輕損傷。2.內(nèi)毒素預(yù)適應(yīng)的保護(hù)機(jī)制和預(yù)先誘導(dǎo)心肌細(xì)胞增強(qiáng)自噬水平有關(guān),其保護(hù)效果和自噬水平并非呈正相關(guān),適度抑制自噬也能增強(qiáng)心肌細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素的耐受能力。3.相比于單次接觸大劑量?jī)?nèi)毒素刺激,去除預(yù)適應(yīng)后間歇期而梯度升高內(nèi)毒素濃度也可以有效減輕心肌細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R720.597
【圖文】：

邐ａｂｄ逡逑Ｉ１０－逡逑＿＿媝W 邋§邋｜逡逑圖１－５．邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ分析ＬＣ３－ＩＩ蛋白表達(dá)的半定量結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋１－５．邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ＬＣ３－ＩＩ邋ｂｙ邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ．邋ａＰ＜０．０５邋ｖｓ．逡逑ＣＯＮ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｂＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋ＰＲＥ邋ｇｒｏｕｐ，邋ＣＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋Ｈ５邋ｇｒｏｕｐ，邋ｄＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋Ｈ５０邋ｇｒｏｕｐ．邋Ｎ＝４邋ｉｎ邋ｅａｃｈ逡逑ｇｒｏｕｐ．邋Ｎ＝４邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑２８逡逑

＼ｊｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ逡逑ｏ0Ｖ，Ｚ邋產(chǎn)邋＃邋＃邋＃邋—逡逑圖２－５．邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ分析ＬＣ３－ＩＩ蛋白表達(dá)的半定量結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋２－５．邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ＬＣ３－ＩＩ邋ｂｙ邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ．邋ａＰ＜０．０５邋ｖｓ．逡逑ＣＯＮ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｈＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋ＲＡＰＡ邋ｇｒｏｕｐ，邋ＣＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋ＰＲＥ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｄＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋ＰＭ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｅＰ＜０．０５逡逑ｖｓ．邋ＰＨ邋ｇｒｏｕｐ，邋＇Ｐ＜０．０５邋ｖｓ．邋Ｈ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｎ＝４邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ．邋Ｎ＝４邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑４６逡逑

｜邋１．０－邐ａ邐墓邐ａ邋＾邋ａ逡逑＾°－５＇ｉ邐Ｉ邋■邋１１逡逑圖３－５．邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ分析ＬＣ３－ＩＩ蛋白表達(dá)的半定量結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋３－５．邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ＬＣ３－ＩＩ邋ｂｙ邋Ｉｍａｇｅ邋Ｊ．邋ａＰ＜０．０５邋ｖｓ．逡逑ＣＯＮ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｂＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋Ｐ４邋ｇｒｏｕｐ，邋ＣＦ＜０．０５邋ｖｓ．邋ＰＨ邋ｇｒｏｕｐ，邋ｄＰ＜０．０５邋ｖｓ．邋Ｈ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑６０逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 萬朝敏;俞蕙;劉鋼;許紅梅;毛志芹;徐翼;金玉;羅如平;王文建;方峰;;布拉酵母菌預(yù)防嬰幼兒抗生素相關(guān)性腹瀉的多中心隨機(jī)對(duì)照研究[J];中華兒科雜志;2017年05期

2 程國(guó)平;李自華;戴昕;汪在華;蔡萍;陳麗;張振;;抗生素相關(guān)性腹瀉患兒艱難梭菌感染分析[J];中華兒科雜志;2015年03期

3 項(xiàng)迎春;;110例抗生素相關(guān)性腹瀉的臨床研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2012年04期

4 馬紅茹;劉偉;;小兒使用抗生素與腸道菌群失調(diào)的調(diào)查分析[J];中國(guó)婦幼保健;2007年07期

5 張愛紅;孫素芹;劉陽(yáng);劉慧林;;腸道菌群失調(diào)與廣譜抗生素應(yīng)用的相關(guān)性分析[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年05期

本文編號(hào)：2802917