【摘要】：目的 孕期飲酒可以導致胎兒酒精綜合征，其中先天性心臟病(Congenitalheart diseases)為常見伴發(fā)畸形之一，目前其內(nèi)在機制仍不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰化修飾的改變能夠干擾心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子的表達，同時阻礙間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化，而乙醇及其代謝產(chǎn)物可以選擇性的升高心肌祖細胞CP15-13(Cardiac progenitorcells15-13)組蛋白H3第九位賴氨酸（H3Lysine9, H3K9）乙�；郊靶呐K發(fā)育相關(guān)基因表達。推測此可能為酒精致心臟發(fā)育畸形的機制之一。本研究通過構(gòu)建酒精致胚胎心臟發(fā)育異常小鼠動物模型，在體內(nèi)水平探討孕期酒精暴露所致胚胎心臟發(fā)育異常的表觀遺傳機制，為該疾病發(fā)病機制的探尋提供全新思路。 材料與方法 選取雌性昆明小鼠，受孕后分組飼養(yǎng)，實驗組于小鼠孕期心臟發(fā)育時間窗E7.5-E15.5（Embryo day）予以不同計量酒精連續(xù)灌胃，對照組予以等劑量生理鹽水灌胃。收集E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟和新生小鼠及生后一周小鼠心臟。通過檢測血液酒精濃度及HE染色觀察胚胎心臟大體結(jié)構(gòu)篩選合適酒精灌胃濃度及劑量。應(yīng)用Westernblot檢測小鼠胚胎心臟發(fā)育H3K9乙�；瘯r序水平及酒精干預(yù)對其產(chǎn)生的影響。利用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction, Q-PCR)檢測酒精干預(yù)后心臟發(fā)育相關(guān)基因Gata4、Mef2c、Nkx2.5mRNA表達水平的改變。 結(jié)果 1.血液酒精濃度顯示，10ul/g/d酒精灌胃40分鐘后血液酒精濃度為348.15±77.49mg/100ml，高于2.5ul/g/d（46.42±14.24）及5ul/g/d（154.92±41）劑量組，而15ul/g/d劑量灌胃可導致孕鼠流產(chǎn)率增高（4/5），因此選擇10ul/g/d濃度劑量進行后續(xù)實驗。 2.HE染色顯示酒精干預(yù)可以導致小鼠胚胎心臟心肌發(fā)育不良，心室腔增大，室間隔肌部變薄。未見解剖結(jié)構(gòu)畸形。 3.Western blot結(jié)果顯示胎鼠心臟發(fā)育期間，組蛋白H3K9乙�；接诎l(fā)育早期（E11.5）開始升高，E17.5達到高峰并維持至出生前，于新生時期迅速下降，生后一周仍維持在較低水平，E17.5較E11.5、新生期及生后一周均存在統(tǒng)計學差異（p0.05）。酒精干預(yù)致E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟組蛋白H3K9乙�；捷^正常對照組升高（p0.05）。 4.Q-PCR結(jié)果顯示，酒精干預(yù)可致心臟發(fā)育相關(guān)基因Gata4和Nkx2.5在E14.5和E17.5， Mef2c在E14.5表達較對照組有顯著升高（p0.05）。 結(jié)論 以上數(shù)據(jù)顯示了胚胎心臟組蛋白H3K9乙酰化的時序性規(guī)律以并提示酒精干預(yù)可致其高乙�；⒅滦呐K發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子表達上調(diào)。為揭示酒精導致先天性心臟病提供全新思路及理論支持。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.4
【圖文】：

5.0 0 5 154.92±41.0510 6 40 348.15±77.49a15 4 5 689.31±18.26a: P<0.052.2 胚胎心臟 H&E 染色分別對酒精暴露組及正常對照組妊娠末期胚胎心臟進行石蠟切片觀察大體結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：酒精暴露組較對照組心臟大體并未出現(xiàn)畸形，然而實驗組室間隔肌部明顯變薄，心室腔較正常組有所增大，心室肌厚度降低（如圖 1-1 所示）。A B

心臟發(fā)育過程中，組蛋白 H3K9 乙�；接诎l(fā)育早期（E11.5）開始升高到高峰并維持至妊娠末期（E18.5）（p＞0.05），后于新生時期顯著下降并低水平（Pd7），E17.5 較 E11.5、E14.5、新生期及生后 7 天均存在統(tǒng)計p<0.05）如圖 2-1。酒精干預(yù)致 E11.5、E14.5 及 E17.5 胚胎心臟組蛋白 H化水平較正常對照組分別升高 2.35、1.47、1.56 倍及 1.52（p<0.05）。而生后 7 天酒精干預(yù)組心臟組蛋白 H3K9 乙�；捷^對照組無統(tǒng)計學差異5）如圖 2-2。

C D圖 2-2C Western-blot 檢測 E11.5-新生小鼠心臟組蛋白 H3AcK9 水平Figure2-2C Western-blot result of E11.5-Newborn H3AcK9 level圖 2-2D Western-blot 檢測 E17.5-生后 7 天小鼠心臟組蛋白 H3AcK9 水平Figure2-2D Western-blot result of E11.5-postday7 H3AcK9 level+代表酒精處理組；－代表正常對照組+means alcohol exposure －means control

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張如華;胡開順;武遠眾;康鐵邦;;BRD7逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)定系的構(gòu)建及其功能評價[J];分子診斷與治療雜志;2013年04期

本文編號：2797538