本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號調(diào)控杯狀細胞化生的效應和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的： 支氣管哮喘(哮喘)是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病,是由多種細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。Hedgehog(HH)信號通路在胚胎期發(fā)育和生后組織、器官的完整及功能的發(fā)育保持中起重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)急性肺損傷的修復不但與胎肺的發(fā)育過程類似,且修復過程中HH信號通路異常激活。杯狀細胞分布于氣道上皮細胞中,并參與構(gòu)成黏液纖毛清除系統(tǒng)而成為氣道的第一道防線,其化生引起的氣道黏液大量分泌是哮喘氣道重塑的重要特征之一,但尚未見HH信號通路與杯狀細胞化生之間的相關(guān)報道。因此本課題主要研究HH信號通路在杯狀細胞化生中的作用和作用機制。 方法： 首先建立ICR雌性小鼠的哮喘模型,并用1mg/ml、3mg/ml和6mg/ml的Smo蛋白抑制劑環(huán)巴胺(Cyclopamine)進行實驗性治療,初步了解抑制HH信號通路對哮喘的影響。為排除環(huán)巴胺致炎作用的干擾,我們將Smof/f小鼠的氣道上皮細胞接觸性敲除Smo基因,期望在不影響肺部炎癥的情況下,了解HH信號通路對杯狀細胞化生的影響。敲除效率及敲除部位主要通過Smo蛋白的Western Blot和免疫組化來驗證,然后用上述實驗小鼠建立哮喘模型。計算支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的白細胞總數(shù)、分類計數(shù)評價肺泡炎癥的情況；采用組織切片HE染色和PAS染色及Muc5c免疫熒光的方法測定肺組織炎癥浸潤和黏蛋白的情況；同時用免疫組化方法檢測小鼠肺組織Ptchl和Glil的蛋白表達。體外實驗用S]mo激動劑Purmorphamine誘導人支氣管上皮細胞(HBE),通過qRT-PCR來評價上皮細胞Muc5ac、Spdef、FoxA2和HH信號通路關(guān)鍵信號分子的mRNA水平改變。結(jié)果： (1)Smo蛋白抑制劑環(huán)巴胺實驗性治療哮喘：給藥組小鼠與模型組小鼠相比,肺泡灌洗液中白細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞數(shù)降低,肺組織的炎癥浸潤同樣是減輕趨勢(1mg/ml的環(huán)巴胺對炎癥無明顯影響)；給藥組Muc5ac、Ptch1和Glil的蛋白水平與模型組相比總趨勢也是降低的,1mg/ml的環(huán)巴胺可以顯著降低Muc5ac的合成。 (2)氣道上皮細胞敲除Smo基因后對哮喘的影響：采用氣道上皮Smo敲除的小鼠模型,發(fā)現(xiàn)哮喘模型組小鼠的炎癥細胞總數(shù)增高及肺部的浸潤明顯嚴重,而氣道上皮的Smo基因敲除后,炎癥情況沒有顯著性差異。Muc5ac的蛋白水平在哮喘模型組氣道上皮細胞中同樣明顯增高,基因敲除后表達量顯著性降低,與HH信號通路下游信號分子的變化趨勢一致。 (3)體外機制研究實驗：Smo激動劑能有效的上調(diào)HBE細胞中Ptchl和Glil的基因表達,與此同時,促進Spdef基因表達,抑制FoxA2基因表達,最終上調(diào)Muc5ac基因。 結(jié)論： HH信號通路在哮喘小鼠肺中是異常激活的；HH信號通路參與了哮喘氣道黏液的分泌,并可能參與促進杯狀細胞化生的機制；HH信號通路可能是通過Spdef和FoxA2來調(diào)控杯狀細胞化生、調(diào)節(jié)黏蛋白分泌。研究結(jié)果提示HH信號通路促進上皮細胞杯狀化生,可能是治療哮喘的潛在靶點。
【關(guān)鍵詞】：HH信號通路 支氣管哮喘 杯狀細胞 化生 Muc5ac
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略語中英文對照11-13
• 目次13-14
• 1 引言14-19
• 2 材料與方法19-43
• 3 實驗結(jié)果43-59
• 4 討論59-63
• 5 結(jié)論63-64
• 6 不足和進一步工作展望64-65
• 參考文獻65-71
• 綜述71-81
• 參考文獻77-81
• 作者簡歷及在讀期間所發(fā)表的論文81

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金鑫;石穆穆;李欣;賈心善;;氣管和肺干細胞定位及其分子調(diào)控機制[J];中國肺癌雜志;2010年06期

2 楊佳麗;石娟;馬凌潔;包少文;郝秀靜;曾瑾;李勇;劉曉明;;豬肺臟氣道上皮干細胞的特異抗體篩選與抗原表達研究[J];動物醫(yī)學進展;2013年09期

3 楊艷娟;鄭西衛(wèi);楊桂蘭;侯嘉;程德云;;凝血酶敏感蛋白-1對體外培養(yǎng)的大鼠肺成纖維細胞的影響[J];廣東醫(yī)學;2013年19期

4 劉龍陽;張帝開;易娟娟;陳R，

本文編號：279458