發(fā)布時(shí)間：2017-03-31 10:09

  本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號(hào)調(diào)控杯狀細(xì)胞化生的效應(yīng)和機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的： 支氣管哮喘(哮喘)是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病,是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。Hedgehog(HH)信號(hào)通路在胚胎期發(fā)育和生后組織、器官的完整及功能的發(fā)育保持中起重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)急性肺損傷的修復(fù)不但與胎肺的發(fā)育過程類似,且修復(fù)過程中HH信號(hào)通路異常激活。杯狀細(xì)胞分布于氣道上皮細(xì)胞中,并參與構(gòu)成黏液纖毛清除系統(tǒng)而成為氣道的第一道防線,其化生引起的氣道黏液大量分泌是哮喘氣道重塑的重要特征之一,但尚未見HH信號(hào)通路與杯狀細(xì)胞化生之間的相關(guān)報(bào)道。因此本課題主要研究HH信號(hào)通路在杯狀細(xì)胞化生中的作用和作用機(jī)制。 方法： 首先建立ICR雌性小鼠的哮喘模型,并用1mg/ml、3mg/ml和6mg/ml的Smo蛋白抑制劑環(huán)巴胺(Cyclopamine)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療,初步了解抑制HH信號(hào)通路對(duì)哮喘的影響。為排除環(huán)巴胺致炎作用的干擾,我們將Smof/f小鼠的氣道上皮細(xì)胞接觸性敲除Smo基因,期望在不影響肺部炎癥的情況下,了解HH信號(hào)通路對(duì)杯狀細(xì)胞化生的影響。敲除效率及敲除部位主要通過Smo蛋白的Western Blot和免疫組化來驗(yàn)證,然后用上述實(shí)驗(yàn)小鼠建立哮喘模型。計(jì)算支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的白細(xì)胞總數(shù)、分類計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)肺泡炎癥的情況；采用組織切片HE染色和PAS染色及Muc5c免疫熒光的方法測(cè)定肺組織炎癥浸潤(rùn)和黏蛋白的情況；同時(shí)用免疫組化方法檢測(cè)小鼠肺組織Ptchl和Glil的蛋白表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)用S]mo激動(dòng)劑Purmorphamine誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞(HBE),通過qRT-PCR來評(píng)價(jià)上皮細(xì)胞Muc5ac、Spdef、FoxA2和HH信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子的mRNA水平改變。結(jié)果： (1)Smo蛋白抑制劑環(huán)巴胺實(shí)驗(yàn)性治療哮喘：給藥組小鼠與模型組小鼠相比,肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)降低,肺組織的炎癥浸潤(rùn)同樣是減輕趨勢(shì)(1mg/ml的環(huán)巴胺對(duì)炎癥無明顯影響)；給藥組Muc5ac、Ptch1和Glil的蛋白水平與模型組相比總趨勢(shì)也是降低的,1mg/ml的環(huán)巴胺可以顯著降低Muc5ac的合成。 (2)氣道上皮細(xì)胞敲除Smo基因后對(duì)哮喘的影響：采用氣道上皮Smo敲除的小鼠模型,發(fā)現(xiàn)哮喘模型組小鼠的炎癥細(xì)胞總數(shù)增高及肺部的浸潤(rùn)明顯嚴(yán)重,而氣道上皮的Smo基因敲除后,炎癥情況沒有顯著性差異。Muc5ac的蛋白水平在哮喘模型組氣道上皮細(xì)胞中同樣明顯增高,基因敲除后表達(dá)量顯著性降低,與HH信號(hào)通路下游信號(hào)分子的變化趨勢(shì)一致。 (3)體外機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)：Smo激動(dòng)劑能有效的上調(diào)HBE細(xì)胞中Ptchl和Glil的基因表達(dá),與此同時(shí),促進(jìn)Spdef基因表達(dá),抑制FoxA2基因表達(dá),最終上調(diào)Muc5ac基因。 結(jié)論： HH信號(hào)通路在哮喘小鼠肺中是異常激活的；HH信號(hào)通路參與了哮喘氣道黏液的分泌,并可能參與促進(jìn)杯狀細(xì)胞化生的機(jī)制；HH信號(hào)通路可能是通過Spdef和FoxA2來調(diào)控杯狀細(xì)胞化生、調(diào)節(jié)黏蛋白分泌。研究結(jié)果提示HH信號(hào)通路促進(jìn)上皮細(xì)胞杯狀化生,可能是治療哮喘的潛在靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：HH信號(hào)通路 支氣管哮喘 杯狀細(xì)胞 化生 Muc5ac
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略語(yǔ)中英文對(duì)照11-13
• 目次13-14
• 1 引言14-19
• 2 材料與方法19-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-59
• 4 討論59-63
• 5 結(jié)論63-64
• 6 不足和進(jìn)一步工作展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 綜述71-81
• 參考文獻(xiàn)77-81
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所發(fā)表的論文81

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 金鑫;石穆穆;李欣;賈心善;;氣管和肺干細(xì)胞定位及其分子調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)肺癌雜志;2010年06期

2 楊佳麗;石娟;馬凌潔;包少文;郝秀靜;曾瑾;李勇;劉曉明;;豬肺臟氣道上皮干細(xì)胞的特異抗體篩選與抗原表達(dá)研究[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年09期

3 楊艷娟;鄭西衛(wèi);楊桂蘭;侯嘉;程德云;;凝血酶敏感蛋白-1對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠肺成纖維細(xì)胞的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年19期

4 劉龍陽(yáng);張帝開;易娟娟;陳R，

本文編號(hào)：279458