【摘要】： 目的: 觀察哮喘小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)及其受體(TSLPR)的表達(dá)以及布地奈德混懸液(BUD)、卡介苗(BCG)干預(yù)對其表達(dá)的影響,探討TSLP、TSLPR與哮喘的關(guān)系,為哮喘的防治提供新的思路。 方法: 1.40只雌性昆明小鼠隨機(jī)分成4組:哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組、正常對照組,每組10只。 2.哮喘組:昆明小鼠于第1、7、14天分別腹腔內(nèi)注射0.01%OVA和10%氫氧化鋁混懸液0.2ml進(jìn)行致敏,第21天起,霧化吸入2%OVA生理鹽水溶液5ml進(jìn)行激發(fā),每天1次,每次30分鐘,連續(xù)7天。 3.BUD干預(yù)組:致敏和激發(fā)方法同哮喘組,在霧化吸入OVA前1h予以BUD生理鹽水溶液5ml(含BUDlmg)霧化吸入20～30min。 4.BCG干預(yù)組:致敏和激發(fā)方法同哮喘組,于OVA致敏前5d、3d、1d分別以BCG0.025mg皮內(nèi)注射干預(yù)。 5.正常對照組:昆明小鼠以生理鹽水代替OVA致敏、激發(fā)。 6.末次激發(fā)24h后收集肺泡灌洗液(BALF)、外周血、肺組織及脾組織。肺組織切片行HE染色觀察病理改變,并用免疫組織化學(xué)方法判斷肺組織TSLP、TSLPR的表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測定BALF中IL-4、肺組織和脾組織中TSLP和TSLPR以及血清TSLP的表達(dá)。實(shí)時熒光定量PCR法檢測肺組織中TSLP mRNA和TSLPR mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 1.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLP陽性細(xì)胞的平均光密度分別為(0.277±0.009)、(0.064±0.015)、(0.160±0.009)、(0.004±0.001)。四組間存在顯著差異(P＜0.01)。哮喘組明顯高于正常對照組(P＜0.01);BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組明顯低于哮喘組(P＜0.01):BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組明顯高于正常組(P＜0.01);BUD干預(yù)組明顯低于BCG干預(yù)組(P＜0.01)。 2.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLPR陽性細(xì)胞的的平均光密度分別為(0.413±0.030)、(0.040±0.004)、(0.168±0.008)、(0.006±0.001)。結(jié)果與肺組織TSLP陽性細(xì)胞的平均光密度比較結(jié)果相似。 3.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠BALF中IL-4的表達(dá)水平分別為(244.200±4.601)pg/ml、(220.600±3.034)pg/ml、(224.900±2.930)pg/ml、(219.200±2.480)pg/ml。四組間存在顯著差異(P＜0.01)。哮喘組明顯高于正常對照組(P＜0.01);BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組明顯低于哮喘組(P＜0.01);BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組雖高于正常對照組,但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);BUD干預(yù)組與BCG干預(yù)組比較,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 4.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLP的表達(dá)水平分別為(4.221±0.115)ng/ml、(3.899±0.071)ng/ml、(3.8980±0.046)ng/ml、(3.621±0.129)ng/ml。結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 5.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLPR的表達(dá)水平分別為(17.160±0.157)ng/ml、(16.460±0.209)ng/ml、(15.740±0.273)ng/ml、(15.860±0.285)ng/ml。結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 6.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠脾組織TSLP的表達(dá)水平分別為(5.467±0.074)ng/ml、(5.096±0.077)ng/ml、(5.101±0.161)g/ml、(4.975±0.073)ng/ml。結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 7.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠脾組織TSLPR的表達(dá)水平分別為(20.901±0.421)ng/ml、(18.280±0.159)ng/ml、(18.840±0.273)ng/ml、(17.930±0.156)ng/ml。四組間存在顯著差異(P＜0.01)。BCG干預(yù)組明顯高于正常對照組(P＜0.05)。其余結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 8.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠血清TSLP的表達(dá)水平分別為(1.611±0.204)ng/ml、(0.484±0.061)ng/ml、(0.166±0.045)ng/ml、(0.336±0.076)ng/ml。四組間存在顯著差異(P＜0.01)。哮喘組明顯高于正常對照組(P＜0.01);BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組明顯低于哮喘組(P＜0.01);BUD干預(yù)組和BCG干預(yù)組與正常對照組比較,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);BUD干預(yù)組明顯高于BCG干預(yù)組(P＜0.01)。 9.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLP mRNA的相對表達(dá)水平分別為(8.510±1.657)%、(1.756±0.518)%、(3.950±1.031)%、(0.999±0.204)%。結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 10.哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠肺組織TSLPR mRNA的相對表達(dá)水平分別為(8.601±1.847)%、(0.972±0.295)%、(3.236±0.538)%、(1.848±0.394)%。四組間存在顯著差異(P＜0.01)。BUD干預(yù)組明顯低于BCG干預(yù)組(P＜0.01)。其余結(jié)果與BALF中IL-4比較結(jié)果相似。 結(jié)論: 1.哮喘小鼠血清TSLP、肺組織和脾組織TSLP、TSLPR及肺組織TSLP mRNA、TSLPR mRNA的表達(dá)均增高。TSLP、TSLPR在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 2.BUD、BCG可明顯抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表達(dá),為BUD、BCG防治哮喘提供了新的理論依據(jù)。 3.TSLP、TSLPR在哮喘的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,可能成為治療哮喘的潛在靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R725.6
【圖文】：

哮喘組小鼠肺組織切片HE染色見支氣管及肺泡內(nèi)粘液分泌增多，周圍有較多炎性細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等)浸潤，支氣管管壁變厚，氣道變窄，氣道上皮受損腫脹，基膜輕度增厚、細(xì)支氣管平滑肌輕度增生等表現(xiàn)(圖1);BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組小鼠肺組織及支氣管炎癥改變較輕，炎性細(xì)胞較哮喘組減少，氣道、氣道上皮損傷較輕(圖2、圖3);正常對照組小鼠肺組織切片HE染色可見支氣管形態(tài)規(guī)則，上皮完整，細(xì)支氣管、肺泡隔及血管壁周圍未見炎性細(xì)胞浸潤(圖4)。圖1哮喘組肺組織病理切片 (x200倍)圖 2BUD干預(yù)組肺組織病理切片(x200倍)

促、腹肌抽搐、二便失禁等癥狀，嚴(yán)重者呼吸減慢或節(jié)律不齊，動作遲緩或俯伏不動，四肢癱軟、反應(yīng)遲鈍，BUD干預(yù)組及BCG千預(yù)組較哮喘組比較上述癥狀相對減輕，正常對照組無上述癥狀。二、各組小鼠肺組織病理變化哮喘組小鼠肺組織切片HE染色見支氣管及肺泡內(nèi)粘液分泌增多，周圍有較多炎性細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等)浸潤，支氣管管壁變厚，氣道變窄，氣道上皮受損腫脹，基膜輕度增厚、細(xì)支氣管平滑肌輕度增生等表現(xiàn)(圖1);BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組小鼠肺組織及支氣管炎癥改變較輕，炎性細(xì)胞較哮喘組減少，氣道、氣道上皮損傷較輕(圖2、圖3);正常對照組小鼠肺組織切片HE染色可見支氣管形態(tài)規(guī)則，上皮完整，細(xì)支氣管、肺泡隔及血管壁周圍未見炎性細(xì)胞浸潤(圖4)。

圖3BCG干預(yù)組肺組織病理切片(x200倍)圖4正常對照組肺組織病理切片(X200倍)三、各組小鼠BALF中IL一4的表達(dá)哮喘組、BUD干預(yù)組、BCG干預(yù)組及正常對照組小鼠BALF中IL一4的表達(dá)水平分別為(244.20肚4.601)pg/ml、(220.60肚3.034)pgiml、(224.90肚2.930)pg/ml、(219.20肚2.480)pg/ml。四組間存在顯著差異(F=ll.876，P=0.000)。哮喘組明顯高于正常對照組(t=4.783，P=O.OOO);BUD干預(yù)組明顯低于哮喘組(t=4.282，P=0.001);BCG干預(yù)組明顯低于哮喘組(t=3.538，尸=0.002);BUD干預(yù)組雖高于正常對照組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(拼0.357，尸=0.725);BCG干預(yù)組雖高于正常對照組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.485，P=O.155);BUD干預(yù)組與BCG干預(yù)組比較，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(t=l.olg，P=0.322)。見表l，圖5。表1各組小鼠BALF中l(wèi)L一的檢測結(jié)果(p創(chuàng)mD

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏煜;張建華;季正華;李曉狄;郁志偉;劉海燕;;BCG干預(yù)對哮喘小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成的影響[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2006年05期

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本文編號：2785603