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兒童營養(yǎng)不良血清低分子量蛋白質(zhì)譜圖研究

發(fā)布時間:2020-08-05 08:32
【摘要】:目的:蛋白質(zhì)-熱能營養(yǎng)不良(protein-energy malnutrition, PEM)是由于缺乏能量和(或)蛋白質(zhì)所致的一種營養(yǎng)缺乏癥,主要見于3歲嬰幼兒。PEM臨床表現(xiàn):體重不增以致減輕是營養(yǎng)不良的最初表現(xiàn)。病程持久時身長(高)也是低于正常。皮下脂肪層不充實或完全消失。其順序依次為腹部,其次為胸-背-腰部,然后上肢-下肢-臀部,最后額-頸-面頰部。皮下脂肪大量消失時,皮膚變得干燥、蒼白、松弛及出現(xiàn)皺紋、失去彈性、腸型可見。肌肉發(fā)育不良,肌張力低下,或偶爾增高。運動發(fā)育遲緩,智力落后,體溫降低,心音低鈍、節(jié)律不齊、血壓偏低、呼吸表淺。遠(yuǎn)期可影響智力及運動素質(zhì)的發(fā)展。因此,兒童期的PEM應(yīng)引起足夠重視。迄今,沒有明確的實驗室參數(shù)能早期診斷P E M。蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics),是近年來發(fā)展起來的一門新興學(xué)科,通過分析研究健康與疾病狀態(tài)的組織、細(xì)胞群和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)線粒體中蛋白質(zhì)的變化,其以細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動方式為研究對象,研究細(xì)胞在不同的生理或病理條件下表達(dá)蛋白的異同,分析蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能和蛋白質(zhì)之間的相互關(guān)系,并從而找出功能蛋白質(zhì)和特異蛋白質(zhì),進(jìn)一步闡明疾病的發(fā)病機制,并在深入研究的基礎(chǔ)上針對靶點定向合成有效的治療藥物。本實驗采用蛋白芯片結(jié)合表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)技術(shù)檢測PEM治療前及PEM治療后組中表達(dá)具有顯著差異的蛋白質(zhì)尤其是低分子量蛋白或多肽,希望找到能對PEM早期診斷具有參考意義的血清蛋白,為早期診斷PEM和PEM治療提供參考依據(jù),使患兒能夠盡早得到治療。本研究旨在探討蛋白組學(xué)在PEM中的應(yīng)用價值,找出差異蛋白,為治療提供可選擇的方法。方法:應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)來分析檢測結(jié)合在蛋白質(zhì)芯片上的血清蛋白質(zhì),共獲得68例標(biāo)本的血清低分子量蛋白表達(dá)指紋圖譜,其中56例為PEM血清蛋白表達(dá)指紋圖譜,12例為PEM治療后血清蛋白表達(dá)指紋圖譜。結(jié)果:在分子質(zhì)量/電荷比值(質(zhì)荷比,mass electron ratio,M/Z)為2000-20000范圍,PEM與PEM治療組間有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)的蛋白質(zhì)峰有5個,在治療前后蛋白表達(dá)量((?)±S)依次是5314.4(42.23±4.09;27.35±4.51)、6417.8(10.05±2.76;30.05±4.23)、6616.9(20.02±3.42;34.03±6.23)、7742.8(57.45±9.72;39.57±4.15)、10216.5(47.45±9.63;31.75±2.73),其中M/Z為5314.4(42.23±4.09;27.35±4.51)、7742.8(57.45±9.72;39.57±4.15)、10216.5(47.45±9.63;31.75±2.73)在PEM組中高表達(dá);而M/Z為6417.8(10.05±2.76;30.05±4.23)、6616.9(20.02±3.42;34.03±6.23)在PEM治療組中高表達(dá)。結(jié)論:1、通過本次試驗得出PEM有蛋白質(zhì)代謝紊亂;2、PEM患兒治療前后蛋白有所改變,PEM患兒可能由于體內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)缺損或不平衡造成某些蛋白含量較正常兒童高,經(jīng)過治療補充所需蛋白質(zhì)其蛋白趨于平衡;3、利用芯片聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)研究PEM蛋白代謝特征可能為PEM的分子診斷、生物治療、病理機制研究開辟新途徑。
【學(xué)位授予單位】:瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2011
【分類號】:R723
【圖文】:

蛋白質(zhì)芯片


的時間不同,蛋白質(zhì)的質(zhì)荷比(叨Z)與離子飛行時間的平方成正比。蛋白質(zhì)的相對含量帶有正電荷的蛋白質(zhì)離子束在到達(dá)檢測器的一瞬間,電子倍增將產(chǎn)生的瞬時電流轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的相對含量。(如圖3)

芯片,質(zhì)譜,血清,樣本


不同芯片上Nmix特征蛋白質(zhì)峰間具有較強的重復(fù)性(圖4)。讓讓少響響如心‘犯小..·.-一一丫 ...、、鄉(xiāng)次如.,,山 ---111扁少杯 杯 杯卜 卜 卜 卜瓜 瓜瓜局認(rèn)人瓜癡癮 J{{{左 左 左互 互 ....

強度值,變化趨勢,質(zhì)譜,峰強度


量為 5314.4Da、6417.8Da、6616.9Da、7742.8Da、10216.SDa,其差異低分子量蛋白質(zhì)質(zhì)譜峰強度值(表l),強度值變化趨勢(圖4),典型樣本低分子量蛋白質(zhì)質(zhì)譜指紋圖(圖5).表l兩組中五個差異低分子量蛋白質(zhì)質(zhì)譜峰強度值比較(x貸)分組例數(shù) 5314.4Da6417.8Da 66169Da7742.8DaIOZ16.SDa治療前5642.23士4.0910.05士2.7620.02士3.4257.45士9.7247.45士9.63治療后1227.35士4.51▲30.05士4.23▲34.03士6.23▲39.57士4.15▲31.75土273▲▲:與治療前相比,P<刀.oj

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