【摘要】：目的 1.采用氣相色譜質(zhì)譜(Gas chromatography-Mass spectrometry,GC-MS)聯(lián)用對尿液中異常代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量分析; 2.探討不同前處理方法對尿液中代謝產(chǎn)物檢測的影響。 方法 1.對尿液12種特征性代謝產(chǎn)物進(jìn)行GC-MS定量分析 2.采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法,以正十七烷酸作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì),建立定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3.對定量分析方法的線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、定量下限、精密度、準(zhǔn)確度等指標(biāo)進(jìn)行可行性評價(jià)。 4.采集正常兒童尿液,對其中12種特征性代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測,確定各個(gè)化合物參考值。 5.收集了49例診斷為有機(jī)酸尿癥、氨基酸代謝缺陷病以及NICCD患兒的急性發(fā)作期尿液標(biāo)本以及9個(gè)2009年-2010年由歐洲遺傳代謝病篩查診斷中心提供的室間質(zhì)控(ERNDIM External quality assurance (EQA) schemes )陽性尿液標(biāo)本進(jìn)行檢測。 6.以上標(biāo)本都分別采用尿素酶法和有機(jī)酸萃取法兩種前處理進(jìn)行檢測。 7.檢出的尿液代謝產(chǎn)物采用NIST圖譜庫定性。 8.采用尿素酶前處理法和有機(jī)酸萃取法對12種特征性代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量分析,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,觀察線性相關(guān)系數(shù)、定量下限、批內(nèi)、批間精密度,回收率等指標(biāo)。 9.探討尿素酶前處理法和有機(jī)酸前處理法對尿液異常特征性代謝產(chǎn)物在定性及定量上的差異,采用配對T檢驗(yàn),當(dāng)P0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.采用尿素酶前處理法,對12種有機(jī)酸進(jìn)行測定。3-羥基丙酸、甲基丙二酸、2-羥基異己酸、尿嘧啶、戊二酸、己二酸、2-羥基苯乙酸、3-羥基-3-甲基戊二酸、辛二酸、苯丙酮酸、乳清酸、癸二酸這12種有機(jī)酸的保留時(shí)間分別為8.23min, 9.75min, 10.18min, 12.07min, 13.15min, 14.79min, 15.78min, 16.35min, 17.60min, 17.79min, 18.38min, 20.16min。除苯丙酮酸外,線性相關(guān)系數(shù)在0.981-0.999之間,批內(nèi)及批間精密度小于15%,除尿嘧啶和乳清酸低濃度回收率在70%左右,其余各有機(jī)酸平均回收率在80%-111%之間。苯丙酮酸經(jīng)肟化后采用有機(jī)酸液液萃取前處理,其線性相關(guān)系數(shù)為0.998,批內(nèi)批間精密度小于15%,回收率在92%-104%之間,符合生物樣品分析方法的基本要求。 2.尿素酶預(yù)處理法不能檢測己酰甘氨酸、苯丙酰甘氨酸,有機(jī)酸萃取法不能檢測半乳糖、半乳糖酸、半乳糖醇及氨基酸。 3.分別通過尿素酶預(yù)處理及有機(jī)酸萃取法前處理后,甲基丙二酸、戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、2-羥基苯乙酸等有機(jī)酸的批內(nèi)CV為3～10%之間,批間CV為9%～15%,平均回收率均為90%～105%,兩種方法作T-test無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4. 3-羥基丙酸、乳清酸、尿嘧啶、3-羥基-3-甲基戊二酸在采用尿素酶預(yù)處理后,批內(nèi)CV為2～13%,批間CV15%,平均回收率在90～110%之間;采用有機(jī)酸萃取前處理,批內(nèi)及批間CV15%,平均回收率小于90%或大于110%,兩種方法做T-test,P0.05,兩種方法比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 1.建立了尿液中12種特征性代謝產(chǎn)物的GC-MS定量分析方法,該方法線性良好,重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性較好,符合生物樣品分析方法基本要求。 2.由于尿素酶前處理法不能檢測己酰甘氨酸、苯丙酰甘氨酸這兩種特征性代謝產(chǎn)物,故尿素酶前處理法不能診斷中鏈脂肪酸代謝障礙。 3.對于極性有機(jī)酸如3-羥基丙酸、乳清酸、尿嘧啶等的定量分析,兩種前處理方法比較有顯著性差異,采用尿素酶前處理法處理尿液標(biāo)本后定量,可獲得更好的線性關(guān)系,重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性亦更佳。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R725.8
【圖文】：

甲醇溶劑的空白色譜圖

混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖

正常質(zhì)控尿液樣品的色譜圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2771829