【摘要】：背景:尿道下裂是兒童最常見的先天畸形之一,高居兒童泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)育畸形的第二位,國內(nèi)外相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率為1/200~1/300,并呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。尿道下裂的主要臨床表現(xiàn)為陰莖下彎、尿道開口的位置異常,嚴(yán)重影響患兒的身心健康、生活質(zhì)量,同時患兒成年后的生育能力出現(xiàn)不同程度的降低。尿道下裂發(fā)病率高,對患者生存質(zhì)量影響明顯,明顯增加了醫(yī)療負(fù)擔(dān)。隨著中國社會的進(jìn)步,國內(nèi)尿道下裂的發(fā)病率和發(fā)達(dá)國家一樣,呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢。目前關(guān)于尿道下裂被認(rèn)為是基因、環(huán)境和內(nèi)分泌等多因素所致的疾病,其具體機(jī)制尚不明確。鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)屬于鄰苯二甲酸鹽類(PEs)的一員,是我國應(yīng)用最為廣泛的通用型增塑劑,它作為一種典型的環(huán)境內(nèi)分泌污染物能夠?qū)е滦坌陨诚到y(tǒng)的發(fā)育異常。DEHP可通過各種途徑進(jìn)入人體,并導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)線粒體產(chǎn)生大量的活性氧簇(ROS)。自噬與合理的凋亡對于哺乳動物的胚胎發(fā)育、器官發(fā)生發(fā)育至關(guān)重要,現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激、自噬、凋亡三者之間具有密切的聯(lián)系,而它們在尿道下裂的發(fā)生過程中所起的作用尚不明確。目的:本實驗旨在通過對SD大鼠妊娠期進(jìn)行DEHP暴露后,探究對子代雄鼠的外生殖發(fā)育的影響,以及在子代雄鼠的生殖結(jié)節(jié)發(fā)育過程中氧化應(yīng)激、自噬、凋亡的變化,進(jìn)一步探究三者在尿道發(fā)育過程中可能的分子調(diào)控機(jī)制。方法:將20只SPF級SD孕鼠按完全隨機(jī)法分為2組,其中正常對照組(n=10)采用玉米油干預(yù),1000 mg/kg·d;DEHP暴露組(n=10)采用DEHP染毒,750 mg/kg·d。于GD8.5~18.5時灌胃處理。GD19.5時,麻醉孕鼠后,剖宮取出子代,以有無睪丸來判別子代的雌雄,稱重、計數(shù),并在解剖顯微鏡下進(jìn)行觀察,判別有無尿道下裂的發(fā)生,并利用游標(biāo)卡尺測量雄性子代的肛門生殖器距離(AGD)。收集各組的生殖結(jié)節(jié),根據(jù)有無尿道下裂的發(fā)生分為:正常對照組、DEHP暴露后正常組、尿道下裂組。HE染色、掃描電鏡(SEM)觀察生殖結(jié)節(jié)的結(jié)構(gòu)改變;各組生殖結(jié)節(jié)制成超薄切片后,用透射電鏡(TEM)觀察其中的自噬水平的改變。提取各組生殖結(jié)節(jié)的總蛋白,蛋白免疫印跡法(WB)檢測各組中相關(guān)蛋白:氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白(Nrf2、HO-1、SOD1、Gpx)、自噬標(biāo)記蛋白(p62、LC3、Beclin1)、自噬信號通路蛋白(PI3K、Akt、m TOR、p-Akt Ser473、p-m TORSer2448)以及凋亡相關(guān)蛋白(Cleved-Caspase3、Bax、Bcl-2)的表達(dá)水平。TUNEL法檢測各組生殖結(jié)節(jié)中細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果:與正常對照組相比,DEHP暴露組的子代雄鼠中出現(xiàn)尿道下裂的發(fā)生率為27.58%(P0.05),并伴有AGD、AGI的減小(P0.05)。在出現(xiàn)尿道下裂癥狀的生殖結(jié)節(jié)中,Nrf2-HO1信號通路表達(dá)異常,內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)SOD1、Gpx表達(dá)減少(P0.05),且體內(nèi)的具有抗氧化作用的Vit A、Vit E也異常減少(P0.05);同時其自噬水平異常增高,Akt/m TOR的磷酸化被抑制(P0.05);促凋亡蛋白Bax、凋亡執(zhí)行蛋白Cleved-Caspase異常增高(P0.05),生殖結(jié)節(jié)中異常增加的凋亡細(xì)胞主要集中在尿道縫及其周圍。結(jié)論:DEHP進(jìn)入子代雄鼠體內(nèi)后,被迅速水解為MEHP,MEHP在細(xì)胞內(nèi)可引起線粒體的呼吸抑制,最終導(dǎo)致過量ROS的產(chǎn)生,使胚胎組織細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。大量的抗氧化物質(zhì),如SOD1、Gpx、Vit A、Vit E等被消耗,活性氧、抗氧化物系統(tǒng)之間的平衡被打破,PI3K/Akt/m TOR通路被抑制,進(jìn)而引起生殖結(jié)節(jié)的自噬缺陷。由此,我們推測在氧化應(yīng)激失衡、自噬缺陷的共同作用下,子代雄鼠的GTs出現(xiàn)異常凋亡,尿道皺褶融合失敗,導(dǎo)致了尿道下裂的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R726.9
【圖文】：

10圖 1-1.尿道板卷曲、融合過程示意圖Fig 1-1. Schematic diagram for the curl and fusion process of urethral plate

圖 1-2.融合部位卷管化示意圖Fig 1-2. Schematic diagram for Canalization of the Urethral 年中，歐美發(fā)達(dá)國家的尿道下裂發(fā)病率增加了一倍[4, 8的趨勢[1]。有證據(jù)表明，這和環(huán)境中的內(nèi)分泌干擾物（

圖 2-1 AGD 的測量方法及示意圖Fig 2-1. Measuring method and schematic diagram of AGD1.6 GD19.5 GTs 的形態(tài)學(xué)檢查

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 馬明福;李川海;楊皓;付新云;李家菊;崔蓉;朱一劍;李練兵;;683例病殘兒泌尿生殖系統(tǒng)出生缺陷種類分析[J];中國婦幼保健;2015年19期

2 李明勇;陳柏林;邱林;華q

本文編號：2770651