【摘要】： 目的：觀察川崎病(Kawasaki Disease，KD)患者體內(nèi)血漿一氧化氮/誘導型一氧化氮合酶(Nitric Oxide/Inducible Nitric Oxide Synthase，NO/iNOS)及相關趨化因子基質細胞衍生因子-1/CXC型趨化因子受體4(Stromal cell-derived factor-lalpha/CXC chemokine receptor 4，SDF-1α/CXCR4)、單核細胞趨化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)表達變化，為探索臨床早期診斷、治療及預后判斷新方法提供實驗和理論依據(jù)。 方法：采用ELISA方法及qRT-PCR技術分別測定12例合并冠脈損害和44例無冠脈損害KD患者的急性期與緩解期血漿(NO_3~-+NO_2~-)水平、SDF-1α水平、MCP-1水平及PBMC中iNOS mRNA表達、SDF-1α的受體CXCR4 mRNA表達、MCP-1 mRNA表達變化，并與60例非感染患兒、66例發(fā)熱病人、35例過敏性紫癜(Henoch Schoenlein Purpura，HSP)患兒進行統(tǒng)計學比較。 結果：1、KD患者緩解期血漿(NO_3~-+NO_2~-)水平(60.96±18.43umol/L)和PBMC中iNOS mRNA表達水平(1.76±0.50)較急性期血漿(NO_3~-+NO_2~-)水平(329.62±96.57umol/L)和PBMC中iNOS mRNA表達水平(2.72±0.84)明顯下降，但高于各對照組；急性期KD組中冠狀動脈損害者血漿(NO_3~-+NO_2~-)水平(416.17±44.25umol/L)和PBMC中iNOS mRNA表達水平(4.00±0.38)明顯高于無冠狀動脈損害者血漿(NO_3~-+NO_2~-)水平(306.02±93.63umol/L)和PBMC中iNOS mRNA表達水平(2.37±0.52)； 2、血漿SDF-1α水平變化：KD急性期(1833±395ng/L)與緩解期(1551±404ng/L)均高于各對照組；KD冠狀動脈損害者急性期(1769±278ng/L)和緩解期(1446±279ng/L)與無冠狀動脈損害者相比均無統(tǒng)計學差異； 3、PBMC中CXCR4mRNA表達水平變化：KD急性期(6.57±2.81)明顯高于各對照組；緩解期(4.01±2.47)與非感染對照組、HSP組比較差異有顯著性，但與發(fā)熱組無顯著差異；急性期KD冠狀動脈損害者(8.19±2.39)高于無冠狀動脈損害者(6.13±2.77)；緩解期KD冠狀動脈損害者(5.17±2.32)與無冠狀動脈損害者(3.71±2.45)相比無統(tǒng)計學差異； 4、KD患者急性期血漿MCP-1水平(409.55±97.42pg/ml)與PBMC中MCP-1 mRNA表達水平(1.97±0.77)明顯高于各對照組；KD患者緩解期血漿MCP-1水平(301.64±71.55pg/ml)與PBMC中MCP-1 mRNA表達水平(1.31±0.39)明顯高于非感染對照組、HSP組，與發(fā)熱組相比無顯著差異；KD組中冠狀動脈損害者血漿MCP-1水平與PBMC中MCP-1 mRNA表達水平在急性期與緩解期均明顯高于無冠狀動脈損害者。 結論：1、NO/iNOS在KD及其冠脈損害的發(fā)病機制中扮演了重要角色，可能通過影響多種免疫級聯(lián)反應過程發(fā)揮重要作用 2、SDF-1α/CXCR4主要在KD急性期發(fā)揮作用，可能參與了KD發(fā)病過程，但參與冠脈損害的可能性不大，并非本病中關鍵的趨化因子 3、MCP-1在川崎病患兒體內(nèi)持續(xù)增高，可能參與了促使單個核細胞聚集于冠狀動脈局部的趨化作用過程，有可能作為判斷KD病情活動狀態(tài)及冠脈損害的免疫學指標之一
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R725.4
【圖文】：

采用 ABI7000型實時熒光PCR儀進行擴增和分析，每個樣本、陰性對照及標準品均設兩個平行反應管，定量結果取其均值。循環(huán)結束后，根據(jù)同時擴增的不同拷貝數(shù)的標準品制作出標準曲線，計算機將給出各個樣本的初始拷貝數(shù)(圖1一圖3)，各樣本iNOS、CXCR4、MCP一l定量結果均用其相應的p一aetin結果標化。四、統(tǒng)計學處理:所有計量資料均采用均數(shù)士標準差表示，并進行正態(tài)性檢驗。應用SPSSll.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行t檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計意義。

圖2實時擴增時熒屏顯示待測樣品的曲線一一月.....「————廠廠廠{{{{{{{{{{{{{.{{{--一刁刁趣趣趣趣趣趣趣趣---一刁刁廈廈廈廈廈廈廈-----硯硯硯硯硯硯硯翔一一一......日日日自娜曰曰.目藺臼臼臼月里_____味味味味味味矛飛飛飛巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨巨吧吧羅孑....，....刁刁尸~一~一一門門llll亡卜一1111111]]]]]]]]]]]]]]]廳廳圖3循環(huán)結束后進行溶解曲線分析

品均設兩個平行反應管，定量結果取其均值。循環(huán)結束后，根據(jù)同時擴增的不同拷貝數(shù)的標準品制作出標準曲線，計算機將給出各個樣本的初始拷貝數(shù)(圖1一圖3)，各樣本iNOS、CXCR4、MCP一l定量結果均用其相應的p一aetin結果標化。四、統(tǒng)計學處理:所有計量資料均采用均數(shù)士標準差表示，并進行正態(tài)性檢驗。應用SPSSll.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行t檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計意義。

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