【摘要】：目的研究促紅細(xì)胞生長素(erythropoietin, EPO)早期對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)海馬齒狀回顆粒下帶(SGZ)5-溴脫氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)和海馬齒狀回DG區(qū)巢蛋白(Nestin)表達(dá)變化的影響,從神經(jīng)細(xì)胞再生分化和行為學(xué)兩方面探索不同劑量EPO早期對新生鼠HIBD的保護(hù)作用,為臨床應(yīng)用EPO治療新生兒缺氧缺血性腦病選擇合適的治療劑量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法新生7日齡Wistar大鼠160只隨機(jī)分為HIBD生理鹽水對照組、假手術(shù)組、EPO治療Ⅰ組、EPO治療Ⅱ組、EPO治療Ⅲ組,每組32只,通過結(jié)扎并剪斷7日齡新生大鼠右側(cè)頸總動脈,吸入8%02+92%N2的低氧氣源2小時制備新生鼠HIBD模型。EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別于缺氧缺血完成后即刻注射rhEPO5u/g、10μ/g、15u/g, HIBD對照組即刻注射生理鹽水0.5ml/只,連續(xù)14天,除用于Morris水迷宮(Morris water maze)行為測定的大鼠外,所有動物分別于處死前1天注射BrdU。各組分別于術(shù)后14天、21天、28天不同時點(diǎn)斷頭取腦組織。用免疫組織化學(xué)染色法和計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測各組大鼠不同時點(diǎn)海馬SGZ區(qū)BrdU和DG區(qū)Nestin表達(dá)變化及HE染色觀察腦組織病理變化,通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察五組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。 結(jié)果1.海馬SGZ區(qū)BrdU表達(dá)：BrdU陽性細(xì)胞數(shù)隨著新生大鼠的腦發(fā)育成熟而減少,同組大鼠BrdU表達(dá)每后一時點(diǎn)低于前一時點(diǎn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；五組大鼠同一時點(diǎn)BrdU表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中EPO干預(yù)組表達(dá)最多,HIBD對照組表達(dá)次之,假手術(shù)組表達(dá)最少(術(shù)后14天、21天有差異,術(shù)后28天則無差異)；EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組各個時點(diǎn)海馬SGZ區(qū)BrdU表達(dá)隨著劑量增加呈現(xiàn)逐漸減少趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.海馬DG區(qū)Nestin的表達(dá)：同組大鼠DG區(qū)Nestin的表達(dá)隨著時相的延長而減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；各組大鼠同一時相Nestin表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),EPO干預(yù)組表達(dá)最多,HIBD對照組表達(dá)次之,假手術(shù)組表達(dá)最少(術(shù)后14天、21天有差異,術(shù)后28天則無差異)；EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組海馬SGZ區(qū)BrdU表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Morris水迷宮行為測定：①學(xué)習(xí)能力：五組大鼠逃逸伏期總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中假手術(shù)組最短,EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組次之,HIBD對照組最長。②記憶能力：HIBD對照組穿環(huán)指數(shù)與假手術(shù)組、EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而假手術(shù)組與EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),EPO治療Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組間相互比較,差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論1、外源性給予EPO治療新生鼠HIBD后可促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中BrdU、Nestin的表達(dá),促進(jìn)受損神經(jīng)細(xì)胞增殖、再生,在缺氧缺血性腦損傷中發(fā)揮一定的保護(hù)作用； 2、EPO早期治療可改善新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后的學(xué)習(xí)和記憶功能；3、缺氧缺血性腦損傷可刺激新生動物腦內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化和再生：4、通過對本試驗(yàn)的選擇的三種EPO實(shí)驗(yàn)劑量對新生大鼠HIBD的影響結(jié)果表明,隨著EPO劑量的增加,反映新生大鼠HIBD后神經(jīng)細(xì)胞再生的指標(biāo)表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢,增加EPO劑量并不能增強(qiáng)腦保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R722.1
【圖文】：

分:結(jié)扎對側(cè)前肢屈曲，側(cè)推抵抗力弱，轉(zhuǎn)圈試驗(yàn)陰性;3分:結(jié)扎對側(cè)前肢屈曲，側(cè)推抵抗力弱，轉(zhuǎn)圈試驗(yàn)陽性。3分者為成功模型，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.2.2腦組織HE染色病理改變(見附圖1一5):假手術(shù)組大鼠海馬細(xì)胞層次分明，胞核圓形、淡染，核仁明顯;對照組大鼠神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，海馬錐體細(xì)胞層次紊亂、排列松散，部分神經(jīng)細(xì)胞固縮、胞漿深染、核濃縮，結(jié)構(gòu)不清;治療組腦組織神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死較對照組減輕。圖1假手術(shù)組術(shù)后海馬cAI區(qū)(HE染色X400)神經(jīng)細(xì)胞無變化、壞死，海馬錐體細(xì)胞層次分明，排列緊密。 Figure1HIPPoealnPalCAIregionofthesham operationgrouP(HEX400)，幾 ehiPPoeamPusP皿a而 daleelllayersweremultilayer， theeells arrangedregularly

2.1.1各組實(shí)驗(yàn)動物術(shù)后表現(xiàn):H工BD治療組和H工BD對照組在術(shù)后2h內(nèi)少動，呼吸稍急促。3一4d后左側(cè)前肢屈曲，側(cè)推抵抗力弱，轉(zhuǎn)圈試驗(yàn)陽性，3w左右好轉(zhuǎn)，可正常活動。2.2判斷動物模型成功的標(biāo)準(zhǔn)采用運(yùn)動功能評價2.2.10分:向地面伸展雙前肢，未見行為異常;1分:結(jié)扎對側(cè)前肢持續(xù)屈曲;2分:結(jié)扎對側(cè)前肢屈曲，側(cè)推抵抗力弱，轉(zhuǎn)圈試驗(yàn)陰性;3分:結(jié)扎對側(cè)前肢屈曲，側(cè)推抵抗力弱，轉(zhuǎn)圈試驗(yàn)陽性。3分者為成功模型，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.2.2腦組織HE染色病理改變(見附圖1一5):假手術(shù)組大鼠海馬細(xì)胞層次分明，胞核圓形、淡染，核仁明顯;對照組大鼠神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，海馬錐體細(xì)胞層次紊亂、排列松散，部分神經(jīng)細(xì)胞固縮、胞漿深染、核濃縮，結(jié)構(gòu)不清;治療組腦組織神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死較對照組減輕。

圖3“PO治療組I海馬CA‘區(qū)(H“染色x400)神經(jīng)細(xì)胞部分變性、海馬錐體細(xì)胞層次清楚，排列較松散。Fioe3Hi，eamnaleAlre鄉(xiāng)onloftheEPotreated1grouPofHIBD(HEX400)，The圖4EPO治療n組海馬CAI區(qū)(HE染色x400)神經(jīng)細(xì)胞部分變性、海馬錐體細(xì)胞層次清楚，排列較松散。Figure4HIPpoeamPalCAIregionoftheEPOtreated11grouPofHIBD(HEX400)，The

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張雋;祝平;王連坤;侯丹慧;王瑩;王昆祥;;亞低溫可促進(jìn)腦出血大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年32期

2 ;[J];;年期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 韋慶軍;陸定貴;陸榮斌;;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及BrdU標(biāo)記的體外研究[A];第十八屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

2 張向榮;劉德伍;郭光華;彭燕;;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定及BrdU標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 鄭修元;李勝活;燕鐵斌;劉慧華;向云;莊志強(qiáng);彭源;;神經(jīng)肌肉電刺激對急性腦梗死大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及梗死側(cè)皮質(zhì)nestin蛋白表達(dá)的影響[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第七次全國康復(fù)治療學(xué)術(shù)會議主題報(bào)告、學(xué)術(shù)交流論文匯編[C];2010年

4 魯珊珊;施海彬;劉圣;祖慶泉;許曉泉;王建偉;張宇;;磁粒子及BrdU雙標(biāo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)頸內(nèi)動脈移植治療犬腦梗死的MRI及形態(tài)學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

5 肖華亮;卞修武;蔣雪峰;王清良;林俐;李增鵬;;Nestin免疫染色在神經(jīng)上皮腫瘤病理診斷中的應(yīng)用價值[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

6 李革飛;李劍平;;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測神經(jīng)干細(xì)胞表面標(biāo)志物-Nestin[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

7 王巧稚;呂愛紅;吳雨嶺;韓藝;療磊;;BrdU標(biāo)記脂肪干細(xì)胞異體移植修復(fù)全層皮損的研究[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

8 馬睿杰;林咸明;陳曉軍;;電項(xiàng)針對大鼠腦缺血再灌注損傷后NCAM和Nestin表達(dá)的影響[A];2011中國針灸學(xué)會年會論文集（摘要）[C];2011年

9 宋萌;時素華;姚海江;余仁峰;鄭光華;李志剛;;電針對大鼠脊髓損傷后Nestin表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國針灸學(xué)會第九屆全國中青年針灸推拿學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 王樹興;袁群芳;姚志彬;;穹隆海馬傘切斷對大鼠基底前腦nestin陽性神經(jīng)元的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 ;單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂誘導(dǎo)成年大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞成為神經(jīng)前體細(xì)胞及其分化作用的研究[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 龔加慶;干細(xì)胞參與胰腺炎損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 田井琦;大鼠胰島和胰腺干細(xì)胞的體外分離和培養(yǎng)[D];吉林大學(xué);2004年

3 劉鵬

本文編號：2761274