【摘要】： 目的 神經(jīng)源性膀胱是小兒泌尿外科較常見的疾病之一,我們對其發(fā)病機理和病理生理過程的了解非常有限。本研究希望利用維甲酸誘導大鼠胎鼠脊髓脊膜膨出,建立一種非手術(shù)的神經(jīng)源性膀胱動物模型,為深入研究神經(jīng)源性膀胱的發(fā)生機制和治療措施打下必要的前期理論和實驗基礎(chǔ)。同時獲得MMC胎鼠腰骶部脊髓、膀胱標本,通過免疫組化方法測定GFAP.α-SMA.tubulin-β-Ⅲ和nNOS蛋白表達情況,進一步了解脊髓的損傷程度、膀胱平滑肌及神經(jīng)纖維的發(fā)育分布情況,初步探討膀胱病理改變與脊髓損害的關(guān)系。 方法 1.誘導大鼠胎鼠脊髓脊膜膨出 健康懷孕的S-D大鼠隨機分為三組：a)E9實驗組：不同劑量的atRA(40-70mg／kg)溶于2ml橄欖油,母鼠孕9天灌胃；b)E10實驗組：不同劑量atRA (40-130mg／kg)溶于2ml橄欖油,母鼠孕10天灌胃；c)對照組：2ml橄欖油,母鼠孕10天灌胃。母鼠孕21天剖腹取出胚胎,觀察記錄數(shù)量及外觀情況。 2.病理和相關(guān)蛋白檢測 atRA(120mg／kg)溶于2ml橄欖油,母鼠孕10天灌胃；空白對照母鼠同期灌胃2mi橄欖油。孕21天剖腹取出胚胎,按如下條件分組：a)MMC組,母鼠atRA暴露,胎鼠出現(xiàn)MMC,不合并其他嚴重畸形；b)RA組：母鼠atRA暴露,胎鼠外觀正常；c)OIL組(空白對照組)：母鼠無atRA暴露,胎鼠外觀正常。 分別取胎鼠腰骶部脊髓及膀胱組織。常規(guī)石蠟包埋、H-E染色。免疫組化三步法測定GFAP.α-SMA.tubulin-β-Ⅲ和nNOS蛋白表達情況,顯微鏡觀察拍照后計算高倍鏡視野下的IOD值,并進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果 75只孕鼠接受灌胃,胚胎總數(shù)810個,其中MMC胎鼠97只(12.0%)；死胎及吸收胎220個(27.2%)。E9實驗組(16只)進行了4個劑量的實驗,獲得胚胎128個,未誘導出MMC胎鼠,死胎及吸收胎127個(99.2%)。E10實驗組(56只)進行了10個劑量的實驗,獲得胚胎637個,MMC胎鼠97只(15.2%),死胎及吸收胎93個(15.0%)。MMC胎鼠發(fā)生率在120mg／kg時達到最高(43.0%),死胎及吸收胎的發(fā)生率在130mg／kg時達到最高(39.5%)。對照組(3只)獲得胎鼠45只,無死胎及吸收胎,所有胎鼠外觀均正常。 脊髓組織水平位切片H-E染色顯示MMC組脊髓結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同程度的異常,同時伴有椎體軟骨發(fā)育不良、體表皮膚缺損等損害；膀胱組織切片H-E染色三組的表現(xiàn)相似,MMC組未觀察到明顯異常。 GFAP蛋白表達MMC組較另兩組增加：α-SMA蛋白表達三組間無明顯差異；tubulin-β-Ⅲ.nNOS蛋白表達MMC組均較另兩組減少；隨著皮膚缺損程度的增加,膀胱tubulin-β-Ⅲ.nNOS蛋白的表達均呈現(xiàn)下降趨勢。 結(jié)論 維甲酸能誘導大鼠胎鼠產(chǎn)生MMC,得到具有臨床和病理相似性的神經(jīng)源性膀胱非手術(shù)動物模型；母鼠孕10天時以120mg／kg的劑量灌胃atRA,MMC胎鼠的發(fā)生率最高。 維甲酸誘導的MMC相關(guān)神經(jīng)源性膀胱胎鼠,脊髓組織星形膠質(zhì)細胞增生、膠質(zhì)瘢痕形成；膀胱平滑肌發(fā)育基本正常；膀胱神經(jīng)纖維及NO能神經(jīng)纖維分布減少,且與MMC的嚴重程度相關(guān)。這些改變可能是膀胱平滑肌缺少神經(jīng)支配,造成神經(jīng)源性膀胱一系列損害的病理生理學基礎(chǔ)之一。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R726.9
【圖文】：

0.0%.口C胎鼠百分比

本文編號：2757000