發(fā)布時(shí)間：2020-07-14 17:59

【摘要】：第一部分uPA與PAI-1在川崎病并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷中的變化 目的:探討川崎病并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷損害可能的發(fā)病機(jī)制及尿激酶型纖溶酶原激活因子(urokinase-type plasminogen activator, uPA)與纖溶酶原激活劑抑制因子-1(plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)對(duì)川崎病冠狀動(dòng)脈病變的影響。 方法:川崎病病例46例,其中冠狀動(dòng)脈損傷組(coronary artery lesions, CALs)21例,非冠狀動(dòng)脈損傷組(no coronary artery lesions, NCALs)25例,健康對(duì)照組20例,收集臨床資料和靜脈血標(biāo)本。臨床資料檢測(cè)川崎病并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷可能高危因素及出凝血指標(biāo),白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、天門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、纖維蛋白原(FIB)、纖維蛋白原降解產(chǎn)物(P-FDP);酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)血漿uPA和PAI-1濃度;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(real-time quantitative polymerase chain reation, RT-qPCR)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)上uPA、PAI-1mRNA的表達(dá)強(qiáng)度。 結(jié)果: 1 WBC、CRP、PLT、ESR、APTT、PT、FIB、P-FDP在CALs組與正常對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),在CALs組都高于正常對(duì)照組;ESR和FIB在三組之間的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CALs組的ESR比NCALs組和正常對(duì)照組高,CALs組中FIB較NCALs組低; 2 CALs組uPA血漿濃度(5580.31±2712.98 pg/ml)高于NCALs組(3822.74±2059.40 pg/ml)和正常對(duì)照組(1579.81±592.99 pg/ml),P0.05;CALs組PAI-1血漿濃度(18.37±4.26ng/ml)高于NCALs組(11.56±1.14ng/ml)與正常對(duì)照組(3.70±1.65ng/ml),P0.05;相關(guān)分析提示川崎病CALs組uPA與PAI-1血漿濃度有負(fù)相關(guān)性(r=-0.657, P=0.02); 3 CALs組uPA血漿濃度與PT呈負(fù)相關(guān)(P0.05),PAI-1血漿濃度與檢測(cè)的臨床指標(biāo)無(wú)相關(guān)性(P0.05); 4 CALs組uPA mRNA表達(dá)(0.0623±0.0520)高于NCALs組(0.0411±0.0211)與正常對(duì)照組(0.0103±0.0035),P0.05;CALs組PAI-1 mRNA表達(dá)(0.1767±0.0235)高于NCALs組(0.1365±0.0189)與正常對(duì)照組(0.0231±0.0261),P0.05;相關(guān)分析提示川崎病CALs組uPA與PAI-1 mRNA無(wú)相關(guān)性(P0.05); 5 CALs組uPA與PAI-1mRNA表達(dá)強(qiáng)度與臨床指標(biāo)無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 結(jié)論:uPA及PAI-1表達(dá)升高與KD并發(fā)CALs有關(guān);通過(guò)檢測(cè)uPA及PAI-1表達(dá)水平,可成為早期診斷KD并發(fā)CALs的指標(biāo)之一。 第二部分IVIG和阿司匹林治療對(duì)川崎病并發(fā)冠狀動(dòng)脈損傷患兒uPA與PAI-1的影響 目的:探討uPA和PAI-1在川崎病并發(fā)CALs發(fā)生發(fā)展中的作用及靜脈用丙種球蛋白(IVIG)和阿司匹林治療的可能機(jī)制,為川崎病并發(fā)CALs治療提供依據(jù)。 方法:檢測(cè)21例川崎病并發(fā)CALs患兒在急性期與IVIG和阿司匹林治療后恢復(fù)期WBC、CRP、PLT、ESR、AST、APTT、PTP-FDP、FIB;ELISA檢測(cè)IVIG和阿司匹林治療前后uPA及PAI-1血漿濃度。 結(jié)果:川崎病并發(fā)CALs患兒在IVIG和阿司匹林治療后恢復(fù)期WBC、CRP、ESR、APTT、PT、FIB、P-FDP較急性期降低(P0.05);PLT和AST在兩組之間的表達(dá)無(wú)明顯變化(P0.05);恢復(fù)期uPA和PAI-1血漿濃度較急性期降低(uPA:t=4.174, P0.01;PAI-1:t=6.697, P0.01)。 結(jié)論:IVIG及阿司匹林治療可能通過(guò)降低血漿uPA和PAI-1濃度,控制高凝狀態(tài)以及減輕機(jī)體炎癥反應(yīng),從而達(dá)到防治血管受損。
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R725.4
【圖文】：

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 100μl，，棄去孔內(nèi)液體，每孔加 200μl 洗滌液，浸泡 后在吸水紙上拍干；孔加底物溶液 90μl，37℃避光顯色；孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)；儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量光密度（OD 值）。準(zhǔn)品和待測(cè)標(biāo)本的 OD 值減去零孔的 OD 值；xper1.3 軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖并得出方程，以標(biāo)作縱坐標(biāo)，繪制出擬合曲線圖（圖 1）（圖 2）

圖 2 PAI-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖注：X 軸表示濃度，Y 軸表示 OD 值方程最終求出結(jié)果。光定量聚合酶鏈反應(yīng) (real-time quantitative poly-qPCR）原理鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）可對(duì)特級(jí)的擴(kuò)增，在 RT-qPCR 反應(yīng)中，引入了一種熒光應(yīng)的進(jìn)行，PCR 反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從線圖。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的化學(xué)原理包括探針類

ss21 -0.108 ＞0.05 -0.308 21 -0.544 ＞0.05 -0.166 21 -0.313 ＞0.05 -0.217 21 0.196 ＞0.05 -0.508 21 0.559 ＞0.05 -0.307 21 0.637 ＞0.05 -0.298 21 0.675 ＜0.05 -0.120 21 -0.403 ＞0.05 0.332 21 0.189 ＞0.05 0.324 提取總 RNA 濃度在 0.5-2.0μg/μl 之間，其 OD260/O間；所有標(biāo)本在凝膠電泳圖上均可見(jiàn)清晰 28S、18 條帶的亮度達(dá)到了 18S 亮度的兩倍以上（圖 5），

【參考文獻(xiàn)】

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1 李小青;周南;宋e

本文編號(hào)：2755304