【摘要】： A組輪狀病毒是引起嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉的主要病原體,幾乎所有兒童在5歲前至少感染過一次輪狀病毒,每年因感染輪狀病毒而導(dǎo)致的嬰幼兒腹瀉高達(dá)2億,住院人數(shù)超過200萬,死亡高達(dá)100萬人,僅在美國(guó),每年因輪狀病毒而產(chǎn)生的醫(yī)療費(fèi)用就高達(dá)1億美元。 自1973年輪狀病毒在人體發(fā)現(xiàn)以來,各國(guó)科研人員對(duì)其進(jìn)行了大量的研究,對(duì)其結(jié)構(gòu)和感染機(jī)制的研究日益深入,但到目前為止,尚無針對(duì)輪狀病毒的特效藥物,因此,快速、準(zhǔn)確的診斷和安全、有效的疫苗對(duì)控制輪狀病毒的感染極其重要。病毒樣顆粒(Virus-Like Particles,VLPs)作為輪狀病毒的候選疫苗具有廣闊的發(fā)展前景,對(duì)進(jìn)一步研究輪狀病毒的感染機(jī)制和組裝機(jī)制也具有重要的意義。 我們?cè)诖竽c桿菌中表達(dá)了輪狀病毒的結(jié)構(gòu)蛋白VP2,首次在體外成功的組裝了輪狀病毒核心樣顆粒(Core-like Particle,CLP)并初步研究了環(huán)境因素對(duì)其穩(wěn)定性的影響,為進(jìn)一步研究其免疫原性和免疫保護(hù)性奠定了基礎(chǔ);通過缺失突變研究了VP6的自身相互作用的區(qū)域,發(fā)現(xiàn)243-334aa為VP6形成三聚體的最小區(qū)域,通過定點(diǎn)突變研究了半胱氨酸在VP6聚體形成中的作用并通過免疫印跡研究了缺失突變和定點(diǎn)突變對(duì)VP6免疫反應(yīng)性的影響,通過同源建模構(gòu)建了VP6的結(jié)構(gòu)并分析了定點(diǎn)突變對(duì)VP6結(jié)構(gòu)的影響;構(gòu)建了VP4和VP7的表達(dá)質(zhì)粒;此外,還制備了輪狀病毒的單克隆抗體,初步實(shí)驗(yàn)證實(shí)7H11、2A9和5C2具有較好的廣譜性和特異性。該研究為輪狀病毒VLP的體外組裝及VLP疫苗的研究奠定了基礎(chǔ),對(duì)進(jìn)一步研究輪狀病毒的感染機(jī)制和組裝機(jī)制也具有重要的意義。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R725.1
【圖文】：

圖1輪狀病毒電鏡圖(左171)、脫衣殼過程(右上181)和結(jié)構(gòu)示意圖(右下191)Fig1EleetronMierograPhandSehematies(right)ofRotavirus

輪狀病毒腹瀉及其全球分布

全長(zhǎng)的VPZ對(duì)蛋白酶較為敏感，N端43aa、92aa以及368aa附近存在蛋白酶作用位點(diǎn)，為了在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)的穩(wěn)定的VPZ，同時(shí)研究CLP的體外組裝機(jī)制，設(shè)計(jì)了多個(gè)亞克隆(圖6)。 2.1.2VPZ基因的克隆通過PCR擴(kuò)增RV結(jié)構(gòu)蛋白的目的基因，通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定，可見特異性的DNA條帶(圖7)，通過小量膠回收試劑盒回收目的DNA，連接PMD18一T，酶切鑒定正確后送博亞生物工程公司測(cè)序。

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本文編號(hào)：2755139