【摘要】： 2001年,Ohura等在日本新生兒代謝篩查異常的肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中發(fā)現(xiàn)存在SLC25A13基因突變,并將其命名為Citrin缺乏引起的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥(Neonatal Intrahepatic Cholestasis caused by Citrin Deficiency,NICCD)。NICCD臨床表現(xiàn)多樣,大多數(shù)患兒有特征性氨基酸,如瓜氨酸、蛋氨酸等水平升高。早期研究認為NICCD是一種自限性疾病,但后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn),有些患兒往往在新生兒期即因為嚴重的低蛋白血癥、凝血功能異常等而夭折。而有些曾出現(xiàn)過NICCD癥狀的患兒在癥狀消失后的數(shù)年或數(shù)十年之后又出現(xiàn)嚴重的成年起病Ⅱ型瓜氨酸血癥(Adult-onset typeⅡcitrullinemia,CTLN2)表現(xiàn),導致肝功能嚴重受損,最終需要進行肝移植治療,還有的甚至發(fā)生猝死。因此,NICCD患兒的早期診斷對于指導治療和預后非常重要。近年來,隨著SLC25A13基因研究的深入,發(fā)現(xiàn)在東亞三國日本、中國及韓國人群中,SLC25A13突變基因的攜帶率都不低,而且新的突變也不斷被檢測出。不同人群中SLC25A13基因的突變形式和頻率有很大差別。SLC25A13基因突變在國內(nèi)嬰兒肝內(nèi)膽汁郁積癥中少見報道,有資料顯示中國健康人群中SLC25A13基因突變攜帶率為1/65,推測中國人群中SLC25A13基因突變應不少見。由于基因突變類型及檢出率存在著種族、地域差異,有必要探討中國人群SLC25A13基因突變特點。為此,我們對嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒進行SLC25A13基因突變研究,以探討其突變譜特征和檢出率,為將來開展分子診斷提供理論基礎(chǔ)。 第一部分伴血氨基酸異常嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中SLC25A13基因突變譜 目的:探討伴血氨基酸異常嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中是否存在SLC25A13基因突變及其突變譜特征。 方法:2003年12月至2006年12月三年間就診于復旦大學附屬兒科醫(yī)院嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒115例進行血氨基酸質(zhì)譜分析。對其中伴血瓜氨酸、蛋氨酸至少一項兩倍以上升高者10例及2007年1月至6月有類似血氨基酸譜異常的嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒4例,共14例入選基因研究。全部入選對象先行SLC25A13基因已報道的12種常見突變位點([Ⅰ]851del4,[Ⅱ]IVS11+1G＞A,[Ⅲ]1638ins23,[Ⅳ]S225X,[Ⅴ]IVS13+1G＞A,[Ⅵ]1800ins1,[Ⅶ]R605X,[Ⅷ]E601X,[Ⅸ]E601K,[Ⅹ]IVS6+5G＞A,[Ⅺ]R184X及[ⅩⅣ]IVS6+1G＞C)檢測。對僅檢出單個位點突變的研究對象,繼續(xù)進行所有外顯子區(qū)及其鄰近序列分析。 結(jié)果:檢出SLC25A13基因突變患兒8例,包括復合雜合突變[Ⅰ]/[Ⅲ]2例,純合突變[Ⅰ]/[Ⅰ]、復合雜合突變[Ⅰ]/[Ⅺ]及純合突變IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A各1例,雜合突變[Ⅰ]/-3例,其中純合突變IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A是國際上尚未見報道的一種新型突變。 小結(jié): 1.血氨基酸異常嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中存在SLC25A13基因突變。 2.SLC25A13基因突變譜和國外報道存在明顯區(qū)別:突變[Ⅰ]、[Ⅲ]是中國嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒的常見突變形式,以突變[Ⅰ]最多見;未發(fā)現(xiàn)國外報道常見突變[Ⅱ];新發(fā)現(xiàn)1例純合突變IVS6+1G＞A/IVS6+1G＞A。 第二部分嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中SLC25A13基因突變檢出率 目的:探討SLC25A13基因突變在中國嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中的檢出率。 方法:2003年12月至2006年12月就診于復旦大學附屬兒科醫(yī)院的115例嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒。對不伴血瓜氨酸和/或蛋氨酸兩倍以上升高者105例先行SLC25A13基因常見突變[Ⅰ]及[Ⅲ]篩查,突變[Ⅰ]采用實時熒光定量PCR雙標記探針法檢測,突變[Ⅲ]采用PCR產(chǎn)物直接電泳法檢測。對僅檢出單個位點突變的篩查對象,繼續(xù)進行其余已報道的10種常見突變位點檢測。檢測結(jié)果仍為單個雜合突變的對象進行SLC25A13基因所有外顯子區(qū)及其鄰近序列分析。 結(jié)果:105例不伴血氨基酸異�；純汗矙z出SLC25A13基因突變5例,其中純合突變[Ⅰ]/[Ⅰ]1例,雜合突變[Ⅰ]/-4例。和第一部分115例中10例伴血氨基酸異�；純和蛔儥z測結(jié)果合并進行檢出率分析。115例嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒共檢出SLC25A13基因突變病例10例,占8.7%,其中純合或復合雜合突變4例,雜合突變6例。 小結(jié): SLC25A13基因突變可能是我國嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因之一,除可存在于伴血瓜氨酸、蛋氨酸異常嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中外,也存在于不伴血氨基酸異常的嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中。 結(jié)論: 1.SLC25A13基因突變可能是我國嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因之一,部分可不伴血氨基酸異常。 2.突變譜和國外報道存在明顯區(qū)別:突變[Ⅰ]、[Ⅲ]是我國SLC25A13基因的常見突變形式,尤其以[Ⅰ]多見;我國存在國外未曾見報道過的新突變。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R725.7
【圖文】：

圖5DNA測序圖sa正常對照sb純合突變Ivs6+IG)A/IVS6+IG)A。IVS6+IG號內(nèi)含子剪接位點第一位堿基發(fā)生G>A改變，致使mRNA中插入整個6號內(nèi)含對)的序列，最終導致6個氨基酸的插入，并在212位產(chǎn)生終止密碼子，導致白質(zhì)的產(chǎn)生。

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 秦炯;積極開展遺傳性代謝疾病診斷與治療的研究[J];中華兒科雜志;2001年09期

2 楊艷玲,常俊霞,袁云,張月華,錢寧,宋金青,秦炯;遲發(fā)型尿素循環(huán)障礙的臨床與實驗室研究[J];中華神經(jīng)科雜志;2004年02期

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 程靜;濾紙尿半乳糖醇GC/MS分析在篩查NICCD中的應用研究[D];暨南大學;2007年

本文編號：2744356