【摘要】： 目的 神經(jīng)管缺陷(neural tube defects NTDs)是常見的先天性畸形，也是世界衛(wèi)生組織常規(guī)監(jiān)測的先天性畸形之一。脊椎裂是神經(jīng)管畸形中最常見的一種類型，其中包括顯性脊椎裂和隱性脊椎裂。顯性脊椎裂脊髓病變較重，常伴有嚴重的二便失禁和肢體的感覺運動功能障礙，很多患者需要終身治療，明顯影響生活質(zhì)量。隱性脊椎裂脊髓病變較輕，有時合并輕度脊髓畸形和椎管內(nèi)脂肪瘤，患兒剛出生時可以沒有任何癥狀，但隨時間推移個別患兒可出現(xiàn)脊髓栓系綜合癥表現(xiàn)，治療非常困難，一些患兒即使經(jīng)過積極的治療(包括手術(shù)治療)，仍然存在不同程度的無法糾正的功能障礙。關(guān)于隱性脊柱裂的脊髓病理改變和出現(xiàn)臨床癥狀的機制目前尚不清楚。本試驗通過應(yīng)用維甲酸制作脊椎裂的動物模型，采用胎兒外科、顯微外科和逆向神經(jīng)示蹤相結(jié)合的技術(shù)，探討隱性脊椎裂胎鼠支配腓腸肌的感覺和運動神經(jīng)元發(fā)育情況，為進一步研究隱性脊椎裂的發(fā)生機制及改進治療方法打下必要的前期理論基礎(chǔ)。 實驗方法 1、制作動物模型 體重240-300g健康成熟未孕的Wistar大鼠，在確定懷孕的第10天，胃管灌入維甲酸135 mg／kg(橄欖油混懸液，40 mg／ml)的孕鼠為致畸組；經(jīng)胃管注入等量的橄欖油的孕鼠作為對照組。 2、胎兒外科手術(shù)與顯微注射 在大鼠懷孕20天時，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，應(yīng)用胎兒外科顯微手術(shù)和顯微注射技術(shù)，在立體顯微鏡下用纖細玻璃針將5％熒光金注入胎鼠腓腸肌。 3、示蹤神經(jīng)元觀察與統(tǒng)計 顯微注射的胎鼠存活24小時后，左心室穿刺主動脈灌注生理鹽水沖洗后，4％多聚甲醛進行灌注固定；顯微鏡下觀察胎鼠有無畸形，剪開腰骶段脊椎表面皮膚，觀察腰骶段脊椎是否裂開，解剖并取出腰骶段脊髓。放入4％多聚甲醛中固定24小時，再放入20％蔗糖溶液中，24小時后連續(xù)冰凍橫切片，熒光顯微鏡下觀察并計數(shù)熒光金標(biāo)記的感覺及運動神經(jīng)元數(shù)目，通過數(shù)碼照相系統(tǒng)將圖片掃描并存儲計算機硬盤內(nèi)，觀察對比對照組、給藥后外觀正常組和隱性脊椎裂組感覺和運動神經(jīng)元的數(shù)目、形態(tài)和分布，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。 實驗結(jié)果 1、各組感覺和運動神經(jīng)元形態(tài)和分布的比較 正常對照組(Ⅰ組)感覺和運動神經(jīng)元位于腰骶段背根節(jié)部位，分布均勻有一定規(guī)律；給藥后無畸形組(Ⅱ組)感覺和運動神經(jīng)元分布均勻，形態(tài)和分布節(jié)段與正常相似；隱性脊椎裂組(Ⅲ組)感覺和運動神經(jīng)元分布不均勻，較稀疏，分布節(jié)段減少而且不規(guī)律。 2、各組感覺和運動神經(jīng)元數(shù)目的比較 Ⅱ組感覺神經(jīng)元數(shù)目(1152±379個)較Ⅰ組(1357±393個)少，二者比較差異無顯著性；Ⅲ組感覺神經(jīng)元數(shù)目(481±188個)較Ⅰ組(1357±393個)和Ⅱ組(1152±379個)均少，與二者比較差異均有顯著性(p＜0.05)。 Ⅱ組運動神經(jīng)元數(shù)目(180±53個)較Ⅰ組(204±77個)少，二者比較差異無顯著性；Ⅲ組運動神經(jīng)元數(shù)目(106±34個)較Ⅰ組(204±77個)和Ⅱ組(180±53個)均少，與二者比較差異均有顯著性(p＜0.05)。 結(jié)論 隱性脊椎裂胎鼠支配腓腸肌的感覺和運動神經(jīng)元發(fā)育異常，感覺和運動神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，分布異常，這可能與感覺和運動功能障礙等癥狀有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R726.5
【圖文】：

正常對照組為I組，致畸組根據(jù)畸形情況分為二組，分別是給藥后無畸形組為n組，隱性脊椎裂畸形組即給藥后腰骸部外觀正常，但錐體有裂開，且不合并肛門直腸畸形者為111組(圖1，圖2)。正常對照組(I組)有胎鼠10只，給藥后無畸形組(II組)有胎鼠12只，隱性脊椎裂畸形組(m組)有胎鼠13只。I組感覺神經(jīng)元位于腰骼段背根節(jié)部位，神經(jīng)元分布均勻有一定規(guī)律，神經(jīng)元數(shù)量為1357士393個;11組標(biāo)記感覺神經(jīng)元數(shù)量、分布與正常對照相似，分布均勻，分布節(jié)段與正常相似，神經(jīng)元數(shù)量為1152士379個;111組標(biāo)記感覺神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，分布不均勻，較稀疏，分布節(jié)段減少而且不規(guī)律，神經(jīng)元數(shù)量為481士188個。如表1，圖3

正常對照組為I組，致畸組根據(jù)畸形情況分為二組，分別是給藥后無畸形組為n組，隱性脊椎裂畸形組即給藥后腰骸部外觀正常，但錐體有裂開，且不合并肛門直腸畸形者為111組(圖1，圖2)。正常對照組(I組)有胎鼠10只，給藥后無畸形組(II組)有胎鼠12只，隱性脊椎裂畸形組(m組)有胎鼠13只。I組感覺神經(jīng)元位于腰骼段背根節(jié)部位，神經(jīng)元分布均勻有一定規(guī)律，神經(jīng)元數(shù)量為1357士393個;11組標(biāo)記感覺神經(jīng)元數(shù)量、分布與正常對照相似，分布均勻，分布節(jié)段與正常相似，神經(jīng)元數(shù)量為1152士379個;111組標(biāo)記感覺神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，分布不均勻，較稀疏，分布節(jié)段減少而且不規(guī)律，神經(jīng)元數(shù)量為481士188個。如表1

神經(jīng)元分布均勻，分布節(jié)段與正常相似，神經(jīng)元數(shù)量為180士53個;m組標(biāo)記運動神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，而且分布不均勻，較稀疏，分布節(jié)段減少而且不規(guī)律，神經(jīng)元數(shù)量為106士34個。如表l，圖4，圖7，圖8所示。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2743627