【摘要】：肥胖已在全世界呈流行態(tài)勢,成為威脅兒童青少年身心健康的重要因素。肥胖可以引起一系列并發(fā)癥,包括:胰島素抵抗、2型糖尿病、心腦血管疾病等。兒童肥胖年齡越小、肥胖程度越重,其今后發(fā)生嚴重并發(fā)癥的可能越大。因此,探討肥胖及其并發(fā)癥的發(fā)病機制已成為兒科學的重要研究方向之一。 人STEAP4基因是本研究小組2004年應(yīng)用抑制性差減雜交技術(shù)(suppression subtractive hybridization,SSH)篩選肥胖與正常人網(wǎng)膜脂肪組織獲得并克隆到的一條肥胖相關(guān)全長新基因。前期研究發(fā)現(xiàn):STEAP4定位于細胞膜,高表達于人脂肪組織,肥胖者脂肪組織中該基因表達顯著下調(diào),人脂肪細胞中該基因過表達(overexpression)能顯著提高成熟脂肪細胞胰島素刺激下的葡萄糖攝取率,提示STEAP4基因與肥胖及胰島素敏感性的調(diào)節(jié)可能相關(guān)。由于有關(guān)STEAP4基因與肥胖、胰島素敏感性之間的關(guān)系目前尚無研究報道,因此首先明確該基因在人脂肪細胞中的生物學屬性十分必要,本文觀察了該基因在人前體脂肪細胞分化過程中的表達變化,并初步探討了影響其表達的調(diào)控因素。 本研究第一部分:以人前體脂肪細胞株為工具,應(yīng)用3-異丁甲基黃嘌呤(3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX)、地塞米松、胰島素、羅格列酮聯(lián)合方案,誘導人前體脂肪細胞分化為成熟的脂肪細胞,采用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測人脂肪細胞分化過程中STEAP4基因的表達變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),STEAP4基因在前體脂肪細胞中mRNA表達水平相對較高,隨人前體脂肪細胞逐漸分化成熟該基因mRNA表達水平逐漸降低;除在誘導分化前至誘導分化第4天、第14-17天時段內(nèi)無顯著性差異外,其余各觀察時間點之間STEAP4基因的mRNA表達水平均有顯著差異(P0.05)。STEAP4基因隨人脂肪細胞分化成熟表達逐漸下調(diào)的模式提示,該基因可能參與脂肪細胞的分化過程,與脂滴積聚有關(guān)。 本研究第二部分:選擇與脂肪細胞代謝、胰島素敏感性調(diào)節(jié)密切相關(guān)的脂源性細胞因子腫瘤壞死因子alpha(Tumor necrosis factor-alpha,TNFα)、白細胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)、瘦素(Leptin)為潛在可能的調(diào)控因子,干預(yù)人成熟脂肪細胞后采用熒光定量RT-PCR、Western-Blot方法,檢測人成熟脂肪細胞中STEAP4核酸與蛋白的表達變化,初步分析能影響STEAP4基因表達的調(diào)控因素。結(jié)果發(fā)現(xiàn),①不同濃度(5、10、25、50 ng/ml)TNFα干預(yù)人成熟脂肪細胞24小時均能顯著上調(diào)人成熟脂肪細胞中STEAP4基因的mRNA表達,具有隨干預(yù)濃度增高其表達水平逐漸升高的趨勢;②不同濃度(5、10、25、50 ng/ml)TNFα干預(yù)24小時同樣能顯著上調(diào)人成熟脂肪細胞中STEAP4的蛋白表達,在0-25ng/ml范圍內(nèi)STEAP4蛋白表達水平的升高呈現(xiàn)濃度依賴性;③TNFα對人成熟脂肪細胞中STEAP4基因mRNA表達的調(diào)控尚具時間依從性特征,10ng/ml TNFα干預(yù)6、12、24小時均能顯著上調(diào)人成熟脂肪細胞中STEAP4基因的mRNA表達,且STEAP4基因mRNA表達水平隨TNFα干預(yù)時間延長而逐漸升高;④30ng/ml IL-6干預(yù)人成熟脂肪細胞6、12、24小時均能上調(diào)STEAP4基因的mRNA表達,以干預(yù)6小時的效果最明顯;⑤與核酸表達結(jié)果相一致,30ng/ml IL-6干預(yù)24小時同樣能顯著上調(diào)人成熟脂肪細胞中STEAP4的蛋白表達;⑥100ng/ml Leptin干預(yù)人成熟脂肪細胞6、12、24小時均能下調(diào)STEAP4基因mRNA表達,且呈時間依從性;⑦100ng/ml Leptin干預(yù)24小時同樣能顯著下調(diào)STEAP4的蛋白表達。上述結(jié)果提示,脂源性細胞因子TNFα、IL-6、Leptin均能調(diào)節(jié)人成熟脂肪細胞中STEAP4的表達,但各因子對STEAP4的調(diào)節(jié)模式并不相同。 總之,本研究初步探討了STEAP4在人脂肪細胞分化進程中的表達變化規(guī)律及脂源性細胞因子對其表達的調(diào)控作用,為進一步深入分析STEAP4基因與肥胖、胰島素敏感性之間的關(guān)系提供了有用的實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R723.14

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本文編號：2742412