【摘要】：第一部分壓力過載對心肌肥厚相關(guān)基因組蛋白乙�；揎椀挠绊懩康�:探討組蛋白乙�；�(histone acetylases,HATs)p300(E1A-binding protein300kD,p300)和PCAF(P300/CBP-associated factor,PCAF)介導(dǎo)的組蛋白乙酰化修飾失衡引起心肌肥厚相關(guān)基因過表達(dá)在壓力過載致小鼠心肌肥厚中的作用。方法:選取8周齡昆明小鼠為研究對象,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組,假手術(shù)組及胸主動脈縮窄(thoracic aortic constriction,TAC)組,每組6只小鼠。TAC組進(jìn)行部分胸主動脈結(jié)扎,假手術(shù)組只分離不結(jié)扎胸主動脈,其它處理同TAC組。8周后分別對三組小鼠進(jìn)行如下檢測:(1)心臟彩超觀測左心室腔及心室壁厚度;(2)測量小鼠體重,隨后頸椎脫臼法處死小鼠取心臟及肺臟組織,檢測心臟指數(shù)(heart weight/body weight,HW/BW)及肺臟指數(shù)(lung weight/body weight,LW/BW);(3)體視鏡觀察小鼠心臟外形,蘇木素-伊紅(htoxylineosin,HE)染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)的改變;(4)比色法檢測HATs活性;(5)Western blot檢測組蛋白H3K9ac乙�；�、HATs亞型p300和PCAF以及心肌肥厚標(biāo)志物ANP、β-MHC蛋白表達(dá)水平;(6)實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)檢測心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:(1)體視鏡結(jié)果顯示,TAC組小鼠心臟明顯大于正常組,假手術(shù)組未見明顯異常。(2)TAC組小鼠的心臟指數(shù)較正常組明顯升高(P0.05),而肺臟指數(shù)較對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)HE染色結(jié)果顯示,與正常組相比,TAC組小鼠心肌細(xì)胞明顯增大,排列紊亂,纖維化明顯。(4)心臟彩超結(jié)果顯示,TAC組小鼠左心室腔較正常組明顯縮小,且心室壁厚度明顯增厚,而假手術(shù)組無顯著改變。(5)比色法結(jié)果顯示,TAC組小鼠心肌組織中HATs活性較正常組顯著升高(P0.05),而假手術(shù)組無顯著升高(P0.05)。(6)Western blot結(jié)果顯示,TAC組小鼠與正常組小鼠相比,TAC組小鼠心肌組織中組蛋白H3K9ac乙�；矫黠@升高(P0.05),且HATs亞型p300、PCAF和心肌肥厚標(biāo)志物ANP及β-MHC的蛋白表達(dá)水平在TAC組明顯高于正常組(P0.05)。(7)Real-Time PCR檢測結(jié)果顯示,與正常組比較,TAC組小鼠心肌組織中心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A的mRNA表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)通過胸主動脈縮窄成功構(gòu)建小鼠心肌肥厚模型。(2)壓力過載致心肌肥厚小鼠心肌組織中HATs亞型p300、PCAF介導(dǎo)的組蛋白H3K9ac高乙�；瘏⑴c了心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A及心肌肥厚相關(guān)標(biāo)志物ANP和β-MHC的過表達(dá)。第二部分漆樹酸通過調(diào)控組蛋白H3K9ac乙酰化修飾水平從而改善壓力過載所致的小鼠心肌肥厚目的:探討組蛋白乙�；�(histone acetylases,HATs)抑制劑漆樹酸(anacardic acid,AA)改善壓力過載致小鼠心肌肥厚的組蛋白乙�；{(diào)控作用。方法:選取8周齡昆明小鼠為研究對象,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為正常組,胸主動脈縮窄(thoracic aortic constriction,TAC)組,TAC+AA組,TAC+二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)組,正常+AA組。TAC組結(jié)扎部分胸主動脈(約占胸主動脈直徑70%)至術(shù)后8周。TAC+AA組是胸主動脈縮窄術(shù)后3周給予AA(5mg/kg)腹腔注射,每周注射3次至術(shù)后8周。TAC+DMSO組是胸主動脈縮窄術(shù)后3周給予同等劑量同等次數(shù)DMSO腹腔注射。正常+AA組是正常小鼠給予同等劑量同等次數(shù)AA腹腔注射至8周,收集各組小鼠心肌組織進(jìn)行以下檢測:(1)心臟彩超檢測左室舒張末期及收縮末期的前壁厚度(LVAWT)、室間隔厚度(IVS)、左室舒張末期直徑(LVEDD)、左室收縮末期直徑(LVESD)和左室容積(LVV);(2)蘇木素-伊紅(htoxylineosin,HE)染色,觀察小鼠心臟形態(tài)及心肌細(xì)胞表面積;(3)ChIP-Q-PCR檢測心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A啟動子區(qū)域H3K9ac乙�；郊皃300、PCAF結(jié)合量,同時探討心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A對心肌肥厚相關(guān)標(biāo)志物基因ANP、β-MHC的調(diào)控作用;(4)實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)檢測心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A的mRNA表達(dá)水平;(5)Western blot檢測組蛋白H3K9ac乙�；�、HATs亞型p300、PCAF蛋白及心肌肥厚標(biāo)志物ANP、β-MHC的蛋白表達(dá)水平;(6)觀察HATs抑制劑漆樹酸對TAC術(shù)后小鼠生存率及心臟射血分?jǐn)?shù)的影響。結(jié)果:(1)心臟彩超結(jié)果顯示,TAC+AA組與TAC組比較,LVAWT、IVS、LVEDD、LVESD和LVV等指標(biāo)均有顯著改善,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05);而TAC+DMSO組相較于TAC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。(2)HE染色結(jié)果顯示,TAC+AA組較TAC組小鼠心肌肥厚程度有明顯改善,心肌細(xì)胞表面積顯著減小(P0.05),而TAC組與TAC+DMSO組比較小鼠心肌肥厚程度及心肌細(xì)胞表面積并無顯著改變(P0.05)。(3)ChIP-Q-PCR結(jié)果表明,小鼠心肌組織中心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A啟動子區(qū)域p300、PCAF的結(jié)合量在TAC組顯著高于對照組(P0.05);MEF2A啟動子區(qū)域組蛋白H3K9ac的乙酰化水平在TAC組較對照組顯著升高(P0.05);而TAC+AA組心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A啟動子區(qū)域p300、PCAF的結(jié)合量及組蛋白H3K9ac乙酰化水平較TAC組顯著下降(均P0.05),而TAC+DMSO組較TAC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。(4)Real-Time PCR結(jié)果顯示,漆樹酸能夠顯著下調(diào)TAC小鼠心臟核心轉(zhuǎn)錄因子MEF2A mRNA的表達(dá)水平(P0.05),而TAC+DMSO組與TAC組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)Western blot檢測結(jié)果顯示,與TAC組比較,TAC+AA組組蛋白H3K9ac乙�；矫黠@下調(diào)(P0.05),而TAC+DMSO組H3K9ac乙�；捷^TAC組無顯著變化(P0.05)。同時,TAC+AA組HATs亞型p300、PCAF及心肌肥厚標(biāo)志物ANP、β-MHC蛋白表達(dá)水平較TAC組均有明顯下調(diào)(均P0.05),TAC+DMSO組較TAC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)論:(1)HATs亞型p300、PCAF介導(dǎo)的組蛋白H3K9ac高乙�；瘏⑴c了壓力過載誘導(dǎo)的小鼠心肌肥厚。(2)HATs抑制劑漆樹酸能夠通過抑制p300及PCAF介導(dǎo)的組蛋白H3K9ac高乙�；瘉碚{(diào)控心肌肥厚相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)而改善壓力過載誘導(dǎo)的小鼠心肌肥厚。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R725.4
【圖文】：

β-actinNM_114614.2TGAGAGGGAAATCGTGCGTGACGCTCGTTGCCAATAGTGATGACMEF2ANM_172582.2CACTTCCTTGGACTACTTGTTTCGTGTTCCTGCTTTTCTACTGCTCTTT3）相對定量分析：以β-actin 作為對照，運(yùn)用 LERTPA-V1.0 軟件進(jìn)行結(jié)果分析，并采用 2-deltadeltaCT（Livak 法）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。2 結(jié)果2.1 心臟彩超檢測小鼠心肌肥厚相關(guān)指標(biāo)心臟彩超觀察結(jié)果顯示，TAC 組小鼠的心室腔與正常組比較，明顯縮小且心室壁厚度明顯增厚，而假手術(shù)組無明顯改變。如圖 1.1 所示。

體視鏡結(jié)果表明：TAC組小鼠心臟組織較對照組明顯肥大，且明顯增重（圖1.2-A）。H&E染色結(jié)果顯示：心臟冠狀切面表明TAC組小鼠心臟較對照組明顯肥大且心室腔變小（圖1.2-B）。圖1.2-C為H&E染色后心肌細(xì)胞縱切圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TAC組較對照組心肌細(xì)胞明顯增大、排列紊亂。

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本文編號：2740439