發(fā)布時間：2020-07-04 01:29

【摘要】：第一部分壓力過載對心肌肥厚相關基因組蛋白乙�；揎椀挠绊懩康�:探討組蛋白乙酰化酶(histone acetylases,HATs)p300(E1A-binding protein300kD,p300)和PCAF(P300/CBP-associated factor,PCAF)介導的組蛋白乙�；揎検Ш庖鹦募》屎裣嚓P基因過表達在壓力過載致小鼠心肌肥厚中的作用。方法:選取8周齡昆明小鼠為研究對象,按照隨機數字表法隨機分為正常組,假手術組及胸主動脈縮窄(thoracic aortic constriction,TAC)組,每組6只小鼠。TAC組進行部分胸主動脈結扎,假手術組只分離不結扎胸主動脈,其它處理同TAC組。8周后分別對三組小鼠進行如下檢測:(1)心臟彩超觀測左心室腔及心室壁厚度;(2)測量小鼠體重,隨后頸椎脫臼法處死小鼠取心臟及肺臟組織,檢測心臟指數(heart weight/body weight,HW/BW)及肺臟指數(lung weight/body weight,LW/BW);(3)體視鏡觀察小鼠心臟外形,蘇木素-伊紅(htoxylineosin,HE)染色觀察心肌細胞形態(tài)的改變;(4)比色法檢測HATs活性;(5)Western blot檢測組蛋白H3K9ac乙�；健ATs亞型p300和PCAF以及心肌肥厚標志物ANP、β-MHC蛋白表達水平;(6)實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-Time PCR)檢測心臟核心轉錄因子MEF2A的mRNA表達水平。結果:(1)體視鏡結果顯示,TAC組小鼠心臟明顯大于正常組,假手術組未見明顯異常。(2)TAC組小鼠的心臟指數較正常組明顯升高(P0.05),而肺臟指數較對照組相比無統計學差異(P0.05)。(3)HE染色結果顯示,與正常組相比,TAC組小鼠心肌細胞明顯增大,排列紊亂,纖維化明顯。(4)心臟彩超結果顯示,TAC組小鼠左心室腔較正常組明顯縮小,且心室壁厚度明顯增厚,而假手術組無顯著改變。(5)比色法結果顯示,TAC組小鼠心肌組織中HATs活性較正常組顯著升高(P0.05),而假手術組無顯著升高(P0.05)。(6)Western blot結果顯示,TAC組小鼠與正常組小鼠相比,TAC組小鼠心肌組織中組蛋白H3K9ac乙酰化水平明顯升高(P0.05),且HATs亞型p300、PCAF和心肌肥厚標志物ANP及β-MHC的蛋白表達水平在TAC組明顯高于正常組(P0.05)。(7)Real-Time PCR檢測結果顯示,與正常組比較,TAC組小鼠心肌組織中心臟核心轉錄因子MEF2A的mRNA表達水平明顯升高,差異有統計學意義(P0.05)。結論:(1)通過胸主動脈縮窄成功構建小鼠心肌肥厚模型。(2)壓力過載致心肌肥厚小鼠心肌組織中HATs亞型p300、PCAF介導的組蛋白H3K9ac高乙酰化參與了心臟發(fā)育核心轉錄因子MEF2A及心肌肥厚相關標志物ANP和β-MHC的過表達。第二部分漆樹酸通過調控組蛋白H3K9ac乙�；揎椝綇亩纳茐毫^載所致的小鼠心肌肥厚目的:探討組蛋白乙酰化酶(histone acetylases,HATs)抑制劑漆樹酸(anacardic acid,AA)改善壓力過載致小鼠心肌肥厚的組蛋白乙�；{控作用。方法:選取8周齡昆明小鼠為研究對象,按照隨機數字表法隨機分為正常組,胸主動脈縮窄(thoracic aortic constriction,TAC)組,TAC+AA組,TAC+二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)組,正常+AA組。TAC組結扎部分胸主動脈(約占胸主動脈直徑70%)至術后8周。TAC+AA組是胸主動脈縮窄術后3周給予AA(5mg/kg)腹腔注射,每周注射3次至術后8周。TAC+DMSO組是胸主動脈縮窄術后3周給予同等劑量同等次數DMSO腹腔注射。正常+AA組是正常小鼠給予同等劑量同等次數AA腹腔注射至8周,收集各組小鼠心肌組織進行以下檢測:(1)心臟彩超檢測左室舒張末期及收縮末期的前壁厚度(LVAWT)、室間隔厚度(IVS)、左室舒張末期直徑(LVEDD)、左室收縮末期直徑(LVESD)和左室容積(LVV);(2)蘇木素-伊紅(htoxylineosin,HE)染色,觀察小鼠心臟形態(tài)及心肌細胞表面積;(3)ChIP-Q-PCR檢測心臟核心轉錄因子MEF2A啟動子區(qū)域H3K9ac乙酰化水平及p300、PCAF結合量,同時探討心臟核心轉錄因子MEF2A對心肌肥厚相關標志物基因ANP、β-MHC的調控作用;(4)實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-Time PCR)檢測心臟核心轉錄因子MEF2A的mRNA表達水平;(5)Western blot檢測組蛋白H3K9ac乙�；健ATs亞型p300、PCAF蛋白及心肌肥厚標志物ANP、β-MHC的蛋白表達水平;(6)觀察HATs抑制劑漆樹酸對TAC術后小鼠生存率及心臟射血分數的影響。結果:(1)心臟彩超結果顯示,TAC+AA組與TAC組比較,LVAWT、IVS、LVEDD、LVESD和LVV等指標均有顯著改善,差異有統計學意義(均P0.05);而TAC+DMSO組相較于TAC組差異無統計學意義(均P0.05)。(2)HE染色結果顯示,TAC+AA組較TAC組小鼠心肌肥厚程度有明顯改善,心肌細胞表面積顯著減小(P0.05),而TAC組與TAC+DMSO組比較小鼠心肌肥厚程度及心肌細胞表面積并無顯著改變(P0.05)。(3)ChIP-Q-PCR結果表明,小鼠心肌組織中心臟核心轉錄因子MEF2A啟動子區(qū)域p300、PCAF的結合量在TAC組顯著高于對照組(P0.05);MEF2A啟動子區(qū)域組蛋白H3K9ac的乙酰化水平在TAC組較對照組顯著升高(P0.05);而TAC+AA組心臟核心轉錄因子MEF2A啟動子區(qū)域p300、PCAF的結合量及組蛋白H3K9ac乙酰化水平較TAC組顯著下降(均P0.05),而TAC+DMSO組較TAC組差異無統計學意義(均P0.05)。(4)Real-Time PCR結果顯示,漆樹酸能夠顯著下調TAC小鼠心臟核心轉錄因子MEF2A mRNA的表達水平(P0.05),而TAC+DMSO組與TAC組比較差異無統計學意義(P0.05)。(5)Western blot檢測結果顯示,與TAC組比較,TAC+AA組組蛋白H3K9ac乙�；矫黠@下調(P0.05),而TAC+DMSO組H3K9ac乙酰化水平較TAC組無顯著變化(P0.05)。同時,TAC+AA組HATs亞型p300、PCAF及心肌肥厚標志物ANP、β-MHC蛋白表達水平較TAC組均有明顯下調(均P0.05),TAC+DMSO組較TAC組差異無統計學意義(均P0.05)。結論:(1)HATs亞型p300、PCAF介導的組蛋白H3K9ac高乙酰化參與了壓力過載誘導的小鼠心肌肥厚。(2)HATs抑制劑漆樹酸能夠通過抑制p300及PCAF介導的組蛋白H3K9ac高乙酰化來調控心肌肥厚相關基因的表達水平進而改善壓力過載誘導的小鼠心肌肥厚。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R725.4
【圖文】：

β-actinNM_114614.2TGAGAGGGAAATCGTGCGTGACGCTCGTTGCCAATAGTGATGACMEF2ANM_172582.2CACTTCCTTGGACTACTTGTTTCGTGTTCCTGCTTTTCTACTGCTCTTT3）相對定量分析：以β-actin 作為對照，運用 LERTPA-V1.0 軟件進行結果分析，并采用 2-deltadeltaCT（Livak 法）進行數據分析。2 結果2.1 心臟彩超檢測小鼠心肌肥厚相關指標心臟彩超觀察結果顯示，TAC 組小鼠的心室腔與正常組比較，明顯縮小且心室壁厚度明顯增厚，而假手術組無明顯改變。如圖 1.1 所示。

體視鏡結果表明：TAC組小鼠心臟組織較對照組明顯肥大，且明顯增重（圖1.2-A）。H&E染色結果顯示：心臟冠狀切面表明TAC組小鼠心臟較對照組明顯肥大且心室腔變�。▓D1.2-B）。圖1.2-C為H&E染色后心肌細胞縱切圖，實驗結果顯示TAC組較對照組心肌細胞明顯增大、排列紊亂。

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本文編號：2740439