【摘要】：目的:通過輪狀病毒(Rotavirus,RV)感染新生昆明乳鼠,建立RV腹瀉模型,在此基礎上,觀察蒙脫石散及益生菌對RV感染乳鼠腸黏膜的作用,探討蒙脫石散聯(lián)合益生菌對腸道黏膜屏障的影響及機制。方法:用MA104細胞(猴胎腎細胞)培養(yǎng)人RV毒株,并進行細胞培養(yǎng)半數(shù)感染量(cell culture infective dose 50%,CCID_(50))檢測RV毒力。將180只昆明乳鼠隨機分為五組:對照組20只、病毒組40只、蒙脫石散治療組40只、蒙脫石散聯(lián)合益生菌治療組40只、益生菌治療組40只。實驗組乳鼠灌服RV 0.2ml(10~(-3.167)CCID_(50));對照組乳鼠灌服不含病毒培養(yǎng)液0.2ml,造模成功的乳鼠根據(jù)組別進行以下處理:蒙脫石散治療組第2天始灌服蒙脫石散0.1ml,1次/日,連續(xù)5天;蒙脫石散聯(lián)合益生菌治療組第2天始灌服蒙脫石散0.1ml后1小時再灌服布拉氏酵母菌散0.1ml,1次/日,連續(xù)5天;益生菌治療組第2天始灌服布拉氏酵母菌散0.1ml,1次/日,連續(xù)5天;病毒組乳鼠造模成功后不給予藥物治療。每天記錄乳鼠臨床表現(xiàn)、糞便的性狀、腹瀉率及體重;分別于灌服后第2、4、6、10天收集乳鼠糞便,采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測糞便中的RV病原,采用16Sr DNA PCR測序方法分析糞便中雙歧桿菌(Bifidobacteria,B)、大腸桿菌(Escherichia coli,E)的基因拷貝數(shù),計算出B/E值,同時在上述相同時間點,隨機處死實驗組乳鼠10只,對照組乳鼠5只,取乳鼠小腸組織,采用ELISA法檢測腸道分泌性Ig A(sIgA)的含量;腹腔靜脈采血,用ELISA法檢測血清中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)的含量;另取一段乳鼠小腸組織,用光鏡觀察腸黏膜的病理變化。采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結果:1人輪狀病毒W(wǎng)a株可以成功感染昆明乳鼠,導致其出現(xiàn)腹瀉癥狀。2與對照組相比,灌服病毒乳鼠出現(xiàn)精神倦怠,活動減少,食欲欠佳,皮膚干燥,出現(xiàn)腹瀉,應用蒙脫石散、布拉氏酵母菌散治療后乳鼠上述癥狀改善;各治療組腹瀉率雖低于病毒組,但無統(tǒng)計學差異(P0.05),各組之間乳鼠體重相比也無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3腸道菌群檢測結果示,雙歧桿菌:灌服RV第2天時,各實驗組乳鼠雙歧桿菌數(shù)量均較對照組減少(P0.05),第4天時,各治療組雙歧桿菌數(shù)量均較病毒組增加(P0.05),但各治療組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);第6天時,聯(lián)合治療組雙歧桿菌數(shù)量較單一治療組增加迅速(P0.05),單一治療組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);第10天時,病毒組仍低于對照組(P0.05)。大腸桿菌:不同時間點實驗組乳鼠腸道大腸桿菌數(shù)量相對增多,與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P0.05)。B/E值:灌服RV后第2天時,各實驗組乳鼠B/E值均低于對照組(P0.05),第4天時,治療組乳鼠B/E值均高于病毒組(P0.05),但各治療組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);第6天時,聯(lián)合治療組B/E值高于單一治療組(P0.05),單一治療組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);第10天時病毒組仍低于對照組(P0.05)。4腸道內sIgA結果顯示,灌服RV第2天時各實驗組乳鼠腸道中sIgA濃度均低于對照組(P0.05),第4天時,各治療組乳鼠sIgA濃度均高于病毒組(P0.05),但各治療組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);第6天時,聯(lián)合治療組乳鼠腸道sIgA濃度均高于單一治療組(P0.05),單一治療組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);第10天時病毒組sIgA濃度仍低于對照組(P0.05)。5血清血DAO結果顯示,灌服RV第2天時,各實驗組乳鼠血清DAO濃度均較對照組增高(P0.05),第4天時,各治療組乳鼠DAO濃度均低于病毒組(P0.05),但各治療組之間比較無統(tǒng)計學差異(P0.05);第6天時,聯(lián)合治療組DAO濃度較單一治療組降低明顯(P0.05),單一治療組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);第10天時,病毒組DAO濃度仍高于對照組(P0.05)。6小腸黏膜組織病理結果顯示,對照組乳鼠小腸黏膜絨毛形態(tài)、結構完整,未見損傷;各實驗組乳鼠小腸黏膜絨毛損傷,上皮細胞水腫,出現(xiàn)廣泛空泡變性,部分細胞壞死。結論:1.人Wa株RV可以成功感染4日齡昆明乳鼠,造模成功;2.RV感染乳鼠的早期即發(fā)生腸道菌群失衡,表現(xiàn)在雙歧桿菌數(shù)量減少,大腸桿菌數(shù)量變化不明顯,但B/E值降低;3.被RV感染乳鼠腸道中sIgA濃度呈現(xiàn)一種趨勢變化,即早期sIgA濃度降低,隨后逐漸升高,在乳鼠感染病毒后第4-6天達高峰,第10天基本接近正常值;4.被RV感染乳鼠血液DAO濃度有不同程度升高,在第4-6天時損傷最為嚴重,第10天基本接近正常;5.蒙脫石散聯(lián)合益生菌制劑治療RV腸炎療效最好。蒙脫石散、益生菌能夠保護腸黏膜完整性,改善腸道通透性;可以促進腸道sIgA分泌,提高機體免疫機能;能夠改善RV腸炎小鼠的腸道微生態(tài),快速增加腸道有益菌數(shù)量,調節(jié)腸道菌群結構,盡快扶正腸道微生態(tài)平衡。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R725.1
【圖文】：

正常形態(tài)MA104細胞（×100）

MA104細胞菜花樣聚集（×100）

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

1 孫俊超;周必英;;雙歧桿菌介導的寄生蟲基因工程疫苗研究進展[J];中華地方病學雜志;2017年08期

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本文編號：2740389