【摘要】： 背景 糖原貯積癥(Glycogen storage disease,GSD)是一組由于各種不同先天性酶缺陷所導致的糖代謝障礙,至少有12個分型。其中GSD-Ⅲ為糖原脫支酶(glycogendebranching enzyme,GDE)缺乏而引起的常染色體隱性遺傳病,是GSD中發(fā)病率較高的一型(高于GSD總發(fā)病率的24%),并有a、b、c、d四個亞型。GDE編碼基因為AGL(amyloglucosidase gene)。當GDE活性缺乏時,會導致大量形態(tài)結(jié)構(gòu)異常的極限糊精在患者的肝臟和/或肌肉中累積,從而引發(fā)各種臨床癥狀,如:肝脾腫大、低血糖、身材矮小、血脂異常、肌肉及肝臟受累等。部分患者可能并發(fā)肝腺瘤甚至肝細胞癌。肌肉常為進行性受累,可累及心肌,嚴重者可致命。根據(jù)臨床癥狀對此疾病很難確診,須與之鑒別的病種很多。尤其是GSD-Ⅰ的臨床癥狀與GSD-Ⅲ極為相似,在早期很難分辨。對AGL基因進行分析可以明確診斷,但是AGL有35個外顯子,全部測序以尋找突變點耗費巨大,應用于臨床會造成患者嚴重的經(jīng)濟負擔;常見突變點的覆蓋率又小,僅篩查這些突變點會造成漏診。目前,對肌肉和/或肝臟的活檢組織進行糖原含量測定、糖原形態(tài)檢測以及糖原脫支酶的活力測定是國際通用的確診及分型依據(jù),其耗時短、花費少,且能明確診斷。國內(nèi)大陸還沒有成熟的酶學測定方法,以及中國人種正常人群的參考范圍。 目的 本研究的目的便是建立肌肉中GSD-Ⅲa的酶學診斷以及糖原含量測定方法,并且制定中國人種正常值的參考范圍,以在臨床上推廣應用。 方法 1.對臨床疑診為GSD-Ⅲ的患者進行基因分析,以獲得明確的GSD-Ⅲa患者組。 2.制備取得知情同意的56例受試者(正常對照組35例;GSD-Ⅲa患者組12例;非GSD的其它肌病組9例)的活檢肌肉組織勻漿。 3.以淀粉葡萄糖苷酶降解肌肉勻漿中的糖原,通過測定葡萄糖產(chǎn)量以明確糖原含量。 4.以磷酸化酶降解肌肉勻漿中的糖原,通過測定葡萄糖產(chǎn)量以明確糖原形態(tài)。 5.以極限糊精為底物,測定肌肉勻漿中的糖原脫支酶活力。 6.對12例GSD-Ⅲa患者的臨床資料進行綜合分析。 7.應用所建立的方法對4例非Ⅲa型的GSD患者進行驗證性實驗。 8.對肌纖維含脂量高的肌肉標本進行檢測,觀察脂肪對實驗結(jié)果的影響。 9.歸納總結(jié)GSD-Ⅲ的診斷參考意見。 結(jié)果 1.經(jīng)基因分析共確診12例GSD-Ⅲa患者,突變類型有16個。 2.GSD-Ⅲa患者組的糖原含量、G1P/G(葡萄糖-1-磷酸/葡萄糖總量)比率以及脫支酶活力這三項指標與正常對照組及其他肌病組均存在顯著性差異(p=0.000)。 3.其它肌病組與正常對照組各項指標均無顯著性差異。 4.正常值范圍:糖原百分含量(0.31%～0.43%,g/g),G1P/G總比率(22.37%～26.43%),脫支酶活力(0.234U～0.284U)。 5.非Ⅲ型但累及肌肉的GSD患者的脫支酶活力較正常值高。 6.脂肪會嚴重影響實驗結(jié)果。 結(jié)論 1.肌肉中脫支酶活力檢測及糖原含量、形態(tài)的測定方法對GSD-Ⅲa的診斷效率與基因分析等同。本方法更適合于臨床應用,且特異性高,不會受到其他肌病的影響。 2.本研究于我國首次成功建立了肌肉中GSD-Ⅲa的酶學診斷以及糖原含量測定方法,并測定出了中國人群的正常值范圍,可于臨床推廣應用。 3.應嚴格控制標本質(zhì)量,不得摻雜脂肪組織。對肌纖維中含脂量高的肌肉要注意異常結(jié)果的出現(xiàn)。
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R725.8

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1 王薇;肌肉中的糖原脫支酶活力測定及糖原定量、定性以診斷Ⅲa型糖原貯積癥[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

2 王丹;肝移植患者血清谷氨酸脫氫酶活性對供肝熱/冷缺血保存、再灌注損傷及肝移植預后的酶學診斷研究[D];福建醫(yī)科大學;2005年

3 王新寧;粘多糖貯積癥Ⅰ型的分子遺傳學診斷和Zellweger綜合征的臨床及基礎研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

4 李社勇;黏多糖病酶學診斷方法的建立及其臨床應用[D];廣州醫(yī)學院;2011年

本文編號：2735888