【摘要】： 目的: 在建立新生大鼠缺氧性心肌損傷的動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,通過(guò)檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)及心肌超微結(jié)構(gòu)的改變,比較純氧與空氣復(fù)蘇對(duì)窒息新生大鼠心肌損傷的影響,為臨床針對(duì)新生兒窒息早期復(fù)蘇方案的選擇提供科學(xué)理論依據(jù)。 方法: 清潔級(jí)7日齡SD(Sprague Dawley)大鼠30只,體重12.5±1.0g,雌雄不拘(由廣州白云新市石馬動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)。出生五日齡購(gòu)入。適應(yīng)環(huán)境兩日。乳鼠在制模前稱(chēng)體重,并按體重編號(hào)。將30只乳鼠隨機(jī)分成24h組(復(fù)蘇后24h,n=15)和72h組(復(fù)蘇后72h,n=15),每組有分為3個(gè)亞組,即正常對(duì)照組(n=5);常壓純氧復(fù)蘇組(常壓1000%O_2,簡(jiǎn)稱(chēng)純氧組,PO,n=5);空氣復(fù)蘇組(21%O_2,簡(jiǎn)稱(chēng)空氣組,RA,n=5)。實(shí)驗(yàn)時(shí)將低氧艙置于36°C～37°C水中水浴,使艙內(nèi)溫度控制在36°C左右,將PO組和RA組乳鼠置于預(yù)熱的艙內(nèi),通以8%O_2和92%N_2的混合氣體,流速為1.5L/min,持續(xù)2.5h.建模后,立即將PO組置于PO艙,輸入常壓100%O_2,流速5L/min,氧艙環(huán)境同建模。 RA組置于同一室內(nèi)RA艙。分別復(fù)蘇30min。建模結(jié)束后將乳鼠放回母鼠身邊,按時(shí)間點(diǎn)將乳鼠分別在復(fù)蘇后24h,72h斷頭處死,按常規(guī)取心肌。心肌組織分別按常規(guī)進(jìn)行石蠟包埋和環(huán)氧樹(shù)脂包埋.制作石蠟切片和電鏡標(biāo)本。通過(guò)HE染色進(jìn)行病理組織學(xué)研究,TUNEL法確認(rèn)凋亡細(xì)胞,并計(jì)算凋亡指數(shù),免疫組織化學(xué)法和圖象分析系統(tǒng)檢測(cè)Bcl-2和Bax蛋白的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度,應(yīng)用透射電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果: 1.行為觀察: 缺氧模型制作期行為能力改變:乳鼠缺氧時(shí)口唇發(fā)紺逐漸加重,呼吸逐漸加快,皮膚由灰白色變?yōu)榘导t色,偶有抽搐,翻正反射難以完成。這種急性缺氧表現(xiàn)持續(xù)至2.5h結(jié)束制模實(shí)驗(yàn)時(shí),乳鼠無(wú)夭亡。復(fù)蘇期行為表現(xiàn):PO組復(fù)氧時(shí),乳鼠全身顫動(dòng),皮膚漸紅潤(rùn);RA組復(fù)氧時(shí)乳鼠呈仰頭,發(fā)呆木納狀,皮膚灰白色,紫紺緩慢消失。 2.心肌組織HE染色病理學(xué)變化 正常對(duì)照組:心肌細(xì)胞未見(jiàn)明顯改變,肌纖維相互平行,有分支。RA組:心肌細(xì)胞呈明顯的片狀或灶性壞死,反應(yīng)性的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)于壞死細(xì)胞間。PO組:心肌細(xì)胞損傷程度較RA組輕,大部分僅表現(xiàn)肌纖維腫脹或斷裂,心肌間質(zhì)及小靜脈明顯淤血。各組在時(shí)間上未表現(xiàn)出明顯的差異。 3.心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)分析 與正常對(duì)照組比較,PO組和RA組心肌細(xì)胞中可見(jiàn)較多的TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞,表現(xiàn)為細(xì)胞體積變小,細(xì)胞核呈棕黃色。PO24h及72h組的細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于相應(yīng)的正常對(duì)照組,(P＜0.01),RA24h及72h組的細(xì)胞凋亡指數(shù)均高于相應(yīng)的PO組(P＜0.01),且各24h組的細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于相應(yīng)的72h組(P＜0.05)。 4.心肌細(xì)胞Bcl-2與Bax蛋白表達(dá)分析 正常對(duì)照組有少量的Bcl-2與Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá),PO組和RA組可見(jiàn)較多的Bcl-2與Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá),表現(xiàn)為心肌細(xì)胞漿有棕褐色團(tuán)塊,非均勻分布。與正常對(duì)照組比較,PO組Bcl-2蛋白表達(dá)強(qiáng)度顯著增加(P＜0.01),PO組Bax蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01),與PO組比較,RA組Bax蛋白表達(dá)強(qiáng)度顯著增加(P＜0.01),但Bcl-2蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯降低(P＜0.01)。各組時(shí)間上的比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 5.心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變 正常對(duì)照組:心肌細(xì)胞肌膜完整,肌原纖維平行排列,線粒體膜完整,嵴呈同心圓或縱行排列,心肌細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻。PO24h組:心肌細(xì)胞肌膜增厚模糊,肌原纖維排列紊亂,有的肌絲斷裂,局部可見(jiàn)小范圍肌溶灶。線粒體明顯腫脹,嵴間隙增寬,呈波浪狀,個(gè)別呈空泡化。細(xì)胞核不規(guī)則,有的呈鋸齒狀。PO72h組的心肌細(xì)胞的損傷仍然存在,但程度較24h組輕。RA24h組:心肌細(xì)胞損傷程度較PO組明顯加重,心肌細(xì)胞嚴(yán)重水腫,界限不清,肌膜斷裂,缺損,核周積液,肌絲斷裂,溶解,形成大量的肌溶灶。線粒體彌漫性腫脹,外膜破裂,嵴稀疏,部分?jǐn)嗔讶芙?呈空泡化,并可見(jiàn)絮狀改變。細(xì)胞核腫脹,染色質(zhì)淡染。RA72h組心肌細(xì)胞改變較24h組有所減輕。 結(jié)論: 在本實(shí)驗(yàn)條件下,RA復(fù)蘇較PO復(fù)蘇后心肌細(xì)胞凋亡更嚴(yán)重,且以復(fù)蘇后24h最明顯,RA復(fù)蘇促進(jìn)Bax基因的表達(dá)上調(diào),PO復(fù)蘇可使凋亡抑制基因Bcl-2表達(dá)上調(diào),提示高濃度氧對(duì)窒息復(fù)蘇后心肌有一定的保護(hù)作用。RA復(fù)蘇較PO復(fù)蘇后心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重,各組均以復(fù)蘇后24h出現(xiàn)典型的病理變化,而復(fù)蘇后72h有一定程度的修復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2731287