【摘要】： 目的：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是新生兒常見疾病,是由圍產(chǎn)期窒息引起,可導致新生兒死亡及新生兒期以后永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷,目前尚無有效的治療方法。本研究建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型,給予亞低溫(mild hypothemia)干預,觀察不同時間點腦組織天冬氨酸特異酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Bax和Bcl-2表達的變化。從而揭示亞低溫發(fā)揮神經(jīng)保護作用的可能機制,為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病開辟新的途徑。 方法：7日齡Wistar大鼠120只,雌雄不限,體重12-18g,隨機分為三組：假手術對照組,HIBD模型組,亞低溫治療組,每組各40只。HIBD模型組和亞低溫治療組均先制備HIBD模型,三組均根據(jù)處死時間不同又分為5個亞組：6h組、12h組、24h組、48h組、72h組,每亞組各8只。模型采用阻斷左側(cè)頸總動脈后置于含8%02的低氧環(huán)境中2h制備而成。治療組在HIBD后即刻給予亞低溫治療。各組分別于HIBD后不同時間點取腦組織,假手術組也在相應時間點取腦組織,肉眼觀察腦組織大體形態(tài)變化,光鏡下觀察各組大鼠左側(cè)腦組織HE染色的病理改變,免疫組織化學方法檢測三組大鼠不同時間點左側(cè)腦組織Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達。 結(jié)果：(1)新生大鼠在HIBD后出現(xiàn)了不同程度的行為異常。(2)HIBD模型組在HIBD后各時間點肉眼觀察腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變,而亞低溫治療組各時間點腦組織大體形態(tài)基本正常。(3)HE染色：假手術組各時間點腦組織細胞層次清楚、細胞形態(tài)正常；HIBD模型組在HIBD后6h、12h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細胞水腫、變性,24h、48h神經(jīng)細胞出現(xiàn)不同程度的壞死,細胞核碎裂、溶解,72h細胞壞死更明顯；亞低溫治療組各時間點腦組織病理變化較HIBD模型組明顯減輕,細胞排列尚規(guī)則。(4)Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達：Caspase-3、Bax及Bcl-2陽性表達均呈棕黃色細顆粒沉積,陽性細胞可表達于大腦皮層和海馬,陽性著色主要位于神經(jīng)細胞胞漿及突起。①Caspase-3的表達：Caspase-3在假手術組呈低水平表達,各時間點之間相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；Caspase-3陽性表達在HIBD模型組隨著時間延長表達逐漸增多,48h達高峰,隨后降低,72h腦組織Caspase-3陽性表達仍多于假手術組；亞低溫治療組各時間點Caspase-3陽性表達均明顯降低,與HIBD模型組各時間點相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。②Bcl-2的表達：在假手術組呈低水平表達,各時間點比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；HIBD組各時間點Bcl-2陽性表達較假手術組增多,各時間點比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；亞低溫治療組各時間點Bcl-2陽性表達較HIBD明顯增加,與HIBD模型組各時間點比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；HIBD組Bcl-2陽性產(chǎn)物表達高峰在術后24h,亞低溫治療組Bcl-2陽性產(chǎn)物表達高峰在術后48h。提示了,亞低溫可以使得抗凋亡蛋白Bcl-2峰值時程延長。③Bax表達：Bax蛋白在假手術組中有少量表達；HIBD組表達增加,各時間點陽性細胞平均灰度值較假手術組低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；亞低溫治療組Bax表達較模型組減少,各時間點比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結(jié)論：(1)新生大鼠HIBD后給予亞低溫治療可減輕腦組織的病理改變,提示亞低溫對新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護作用。(2)亞低溫可能通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達,降低HIBD后Caspase-3的表達,抑制神經(jīng)細胞凋亡,減輕HIBD病理損傷過程,從而對新生大鼠缺氧缺血引起的神經(jīng)細胞損傷起到一定的保護作用,進一步為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦損傷提供新的治療思路。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R722.1

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 閆煥利;HIF-1α及其抑制劑對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時神經(jīng)細胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學;2012年

本文編號：2730461