【摘要】： 目的：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是新生兒常見(jiàn)疾病,是由圍產(chǎn)期窒息引起,可導(dǎo)致新生兒死亡及新生兒期以后永久性神經(jīng)系統(tǒng)損傷,目前尚無(wú)有效的治療方法。本研究建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型,給予亞低溫(mild hypothemia)干預(yù),觀察不同時(shí)間點(diǎn)腦組織天冬氨酸特異酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Bax和Bcl-2表達(dá)的變化。從而揭示亞低溫發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制,為臨床上治療新生兒缺氧缺血性腦病開(kāi)辟新的途徑。 方法：7日齡Wistar大鼠120只,雌雄不限,體重12-18g,隨機(jī)分為三組：假手術(shù)對(duì)照組,HIBD模型組,亞低溫治療組,每組各40只。HIBD模型組和亞低溫治療組均先制備HIBD模型,三組均根據(jù)處死時(shí)間不同又分為5個(gè)亞組：6h組、12h組、24h組、48h組、72h組,每亞組各8只。模型采用阻斷左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于含8%02的低氧環(huán)境中2h制備而成。治療組在HIBD后即刻給予亞低溫治療。各組分別于HIBD后不同時(shí)間點(diǎn)取腦組織,假手術(shù)組也在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取腦組織,肉眼觀察腦組織大體形態(tài)變化,光鏡下觀察各組大鼠左側(cè)腦組織HE染色的病理改變,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)左側(cè)腦組織Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達(dá)。 結(jié)果：(1)新生大鼠在HIBD后出現(xiàn)了不同程度的行為異常。(2)HIBD模型組在HIBD后各時(shí)間點(diǎn)肉眼觀察腦組織大體形態(tài)出現(xiàn)不同程度的異常改變,而亞低溫治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織大體形態(tài)基本正常。(3)HE染色：假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞層次清楚、細(xì)胞形態(tài)正常；HIBD模型組在HIBD后6h、12h出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)細(xì)胞水腫、變性,24h、48h神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的壞死,細(xì)胞核碎裂、溶解,72h細(xì)胞壞死更明顯；亞低溫治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織病理變化較HIBD模型組明顯減輕,細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達(dá)：Caspase-3、Bax及Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)均呈棕黃色細(xì)顆粒沉積,陽(yáng)性細(xì)胞可表達(dá)于大腦皮層和海馬,陽(yáng)性著色主要位于神經(jīng)細(xì)胞胞漿及突起。①Caspase-3的表達(dá)：Caspase-3在假手術(shù)組呈低水平表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)之間相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)在HIBD模型組隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增多,48h達(dá)高峰,隨后降低,72h腦組織Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)仍多于假手術(shù)組；亞低溫治療組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)均明顯降低,與HIBD模型組各時(shí)間點(diǎn)相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。②Bcl-2的表達(dá)：在假手術(shù)組呈低水平表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；HIBD組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)較假手術(shù)組增多,各時(shí)間點(diǎn)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；亞低溫治療組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)較HIBD明顯增加,與HIBD模型組各時(shí)間點(diǎn)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；HIBD組Bcl-2陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)高峰在術(shù)后24h,亞低溫治療組Bcl-2陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)高峰在術(shù)后48h。提示了,亞低溫可以使得抗凋亡蛋白Bcl-2峰值時(shí)程延長(zhǎng)。③Bax表達(dá)：Bax蛋白在假手術(shù)組中有少量表達(dá)；HIBD組表達(dá)增加,各時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值較假手術(shù)組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；亞低溫治療組Bax表達(dá)較模型組減少,各時(shí)間點(diǎn)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：(1)新生大鼠HIBD后給予亞低溫治療可減輕腦組織的病理改變,提示亞低溫對(duì)新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護(hù)作用。(2)亞低溫可能通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá),降低HIBD后Caspase-3的表達(dá),抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡,減輕HIBD病理?yè)p傷過(guò)程,從而對(duì)新生大鼠缺氧缺血引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷起到一定的保護(hù)作用,進(jìn)一步為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦損傷提供新的治療思路。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R722.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 閆煥利;HIF-1α及其抑制劑對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2730461