【摘要】： 新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)是導致早產(chǎn)兒死亡的重要原因。目前臨床上主要采用糖皮質激素對妊娠晚期孕婦進行預防性治療,獲得良好療效,極大的降低了NRDS發(fā)病率與早產(chǎn)兒死亡率。然而大劑量、多療程的激素治療給母嬰帶來的副作用使其應用受到限制。氨溴索是臨床常用的快速排痰藥,產(chǎn)前使用具有與糖皮質激素相似的作用,能有效促進胎肺中肺泡Ⅱ型上皮細胞的發(fā)育,增加肺泡表面活性物質的合成與分泌,顯著降低NRDS的發(fā)生率和早產(chǎn)兒死亡率。普遍認為氨溴索可能最有希望替代糖皮質激素成為產(chǎn)前促進早產(chǎn)兒胎肺成熟的新臨床用藥。 現(xiàn)已知胚胎肺臟發(fā)育受多種激素、細胞因子調節(jié),涉及多條信號通路。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是一種具有廣泛生物學活性的多功能細胞因子,胚胎肺發(fā)育的關鍵步驟幾乎都受到了BMP的調控,BMP信號轉導通路與肺臟發(fā)育的關系日益受到關注。 因此本文第一部分的研究從大鼠胎肺形態(tài)發(fā)育角度探討了產(chǎn)前給藥氨溴索以及小劑量地塞米松、倍他米松對大鼠妊娠后期胎肺發(fā)育的影響。第二部分研究進一步從分子水平評價產(chǎn)前給藥氨溴索、地塞米松、倍他米松對大鼠胎肺BMP信號轉導通路的影響。 本文從發(fā)育生物學角度評價氨溴索、小劑量糖皮質激素對胎肺發(fā)育的作用,所獲氨溴索及小劑量激素促進胎肺結構發(fā)育的證據(jù),將為其產(chǎn)前預防性治療NRDS提供新的理論依據(jù)。氨溴索、糖皮質激素對大鼠胎肺BMP信號通路影響的研究將為孕晚期的預防性治療機理提供新線索。 第—部分氨溴索、糖皮質激素對大鼠胎肺形態(tài)發(fā)育影響的對比研究 目的:比較產(chǎn)前給藥氨溴索和糖皮質激素(地塞米松、倍他米松)對大鼠胎肺形態(tài)發(fā)育的影響。 方法:18只孕鼠隨機分成6組:生理鹽水對照組,氨溴索組、地塞米松1天和3天組,倍他米松1天和3天組共5個干預組。對照組、氨溴索組、地塞米松3天組、倍他米松3天組孕鼠于妊娠16、17、18天分別腹腔注射生理鹽水、100mg(kg·d)的氨溴索、0.2mg(kg·d)的地塞米松、0.2mg(kg·d)倍他米松。地塞米松、倍他米松1天組于妊娠16、17天腹腔注射生理鹽水,妊娠18天分別注射地塞米松、倍他米松0.2mg(kg·d)。雌鼠孕19天時剖宮取胎鼠肺組織作為早產(chǎn)鼠肺模型。通過HE染色、光鏡觀察及電鏡技術比較各組孕鼠的胎仔肺組織形態(tài)發(fā)育差異。 結果:干預組除地塞米松1天組外各干預組呼吸膜周徑、肺泡面積均高于對照組(P＜0.05),肺泡間隔厚度均低于對照組(P＜0.01),以倍他米松3天組改變最為明顯。倍他米松1天組、3天組分別與地塞米松1天、3天組比較:肺泡間隔薄(P＜0.01),呼吸膜周徑及肺泡表面積大(P＜0.01)。倍他米松1天組較氨溴索組肺泡間隔薄(P＜0.05),呼吸膜周徑大(P＜0.01)。倍他米松3天組及地塞米松3天組的肺泡間隔小于氨溴索組(P＜0.01),而呼吸膜周徑及肺泡表面積顯著大于氨溴索組(P＜0.01)。透射電鏡下治療組除地塞米松1天組外各組肺泡Ⅱ型上皮內可見板層小體,細胞器多見,以倍他米松、地塞米松3天組改變最為明顯,而對照組內未見板層小體、細胞器少見。 結論:氨溴索、小劑量地塞米松、倍他米松均能促進肺發(fā)育,倍他米松效果優(yōu)于地塞米松和氨溴索,激素3天用藥效果優(yōu)于1天用藥。 第二部分氨溴索、糖皮質激素對大鼠胎肺骨形態(tài)發(fā)生蛋白信號通路的影響 目的:比較產(chǎn)前給藥氨溴索、糖皮質激素(GC)對大鼠胎肺骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)信號轉導通路的影響。 方法:18只孕鼠隨機分成6組:對照組、氨溴索組、地塞米松1天組和3天組,倍他米松1天組和3天組。孕鼠妊娠第19天剖腹取出胎仔肺組織,通過RT-PCR、免疫組化和Western blotting技術檢測各組胎肺BMP信號通路中BMP4、BMPR-Ⅱ、Smadl、ATF-2基因轉錄水平及蛋白表達差異。 結果:(1)BMP4 mRNA表達在倍他米松3天組、地塞米松3天組、倍他米松1天組的表達均明顯高于對照組(P＜0.05),氨溴索組與地塞米松1天組與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。免疫組化和Westernblotting結果顯示:與對照組相比,地塞米松3天組、倍他米松1天組及3天組BMP4表達量顯著增加(P＜0.01)。氨溴索組、地塞米松1天組與對照組相比表達無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (2)與對照組相比BMPR-ⅡmRNA在倍他米松1天組、3天組以及地塞米松1天組、3天組表達增加(P＜0.05),氨溴索組與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。免疫組化檢測及Western bloning分析提示:GC干預組BMPR-Ⅱ蛋白表達量顯著大于對照組(P＜0.01),而氨溴索與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (3)與對照組相比,Smadl mRNA在倍他米松1天、3天組、地塞米松1天、3天組表達增加(P＜0.05),氨溴索組表達無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。免疫組化方法檢測顯示:地塞米松3天組、倍他米松1天、3天組中pSmadl蛋白的表達均明顯強于對照組(P＜0.01),氨溴索組、地塞米松1天組與對照組相比表達無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 (4)ATF-2 mRNA表達在各組中未見統(tǒng)計學差異(P＞0.05),免疫組化定量分析顯示:ATF-2蛋白在地塞米松3天組、倍他米松1天、3天組中的表達均明顯強于對照組(P＜0.01),氨溴索組、地塞米松1天組與對照組相比表達無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 結論:倍他米松、地塞米松可能參與調控大鼠胎肺BMP信號通路過程。倍他米松、地塞米松用藥對BMP信號轉導分子BMP4、BMPR-Ⅱ、Smadl表達的上調可能是GC促胎肺成熟的重要機制之一。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R722.1
【圖文】：

骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)信號轉導通路

RNA電泳圖

【參考文獻】

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1 付學明,余加林,劉官信,鄧兵;鹽酸氨溴索和地塞米松對胎鼠肺表面活性蛋白基因表達的影響[J];中華兒科雜志;2004年06期

本文編號：2729845