【摘要】： 目的:評價(jià)變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技術(shù)在兒童型脊髓性肌萎縮癥(spinal muscular atrophy,SMA)基因診斷及攜帶者基因篩查中的應(yīng)用價(jià)值。 方法:對37例臨床疑診為兒童型SMA的患者采用臨床標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷,臨床診斷SMA和非SMA。同時(shí),應(yīng)用DHPLC技術(shù)聯(lián)合雙重PCR技術(shù)對所有入選患者、臨床標(biāo)準(zhǔn)診斷為SMA患者的雙親進(jìn)行SMN1拷貝數(shù)檢測,作出SMA患者基因診斷及判斷攜帶者。對入選患者的兩種診斷結(jié)果進(jìn)行對比,分析靈敏度、特異度等。分析SMA患者雙親的攜帶情況。 結(jié)果:1、37例入選患者,臨床標(biāo)準(zhǔn)診斷SMA17例,非SMA20例;2、DHPLC技術(shù)檢測37例入選患者:17例臨床診斷SMA患者中,14例SMN1拷貝數(shù)為0,為純合缺失型SMA患者,2例SMN1拷貝數(shù)為1,為雜合缺失型SMA患者,1例SMN1拷貝數(shù)為2,為非SMA;20例臨床診斷為非SMA者,SMN1拷貝數(shù)為2,基因診斷為非SMA。3、與臨床標(biāo)準(zhǔn)診斷相比,DHPLC技術(shù)診斷SMA靈敏度為94.1%,特異度為100%。17例臨床診斷為SMA患者的34名雙親中,1例SMN1拷貝數(shù)為0,6例SMN1拷貝數(shù)為2,27例SMN1基因拷貝數(shù)為1,考慮為“1+0”型攜帶者,該法對SMA患者雙親的攜帶檢出率為79.4%。 結(jié)論:1、應(yīng)用DHPLC技術(shù)可以檢測出SMN1基因拷貝數(shù),進(jìn)行SMA基因診斷靈敏度和特異度高,方便、快捷,適合臨床應(yīng)用。2、應(yīng)用該技術(shù)可以進(jìn)行SMA攜帶者篩查,為遺傳分析和產(chǎn)前診斷提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R744;R450
【圖文】：

3.2 DHPLC 技術(shù)檢測結(jié)果校正樣本：約 2.7 分鐘出現(xiàn) SMN1 峰，約 6.2 分鐘出現(xiàn) KRIT1 峰，兩基因峰型正常，大致呈正態(tài)分布曲線，應(yīng)用軟件讀取兩者峰高，SMN1 峰高 1.074，KRIT1 峰高 1.259，兩者比值約為 0.85（1.074/1.259），以該比值作為本試驗(yàn)的校正系數(shù)。見圖 3.1.1。入選病例樣本：37 例樣本 SMN1、KRIT1 基因均在相應(yīng)的時(shí)間出現(xiàn)，且峰型正常，大致呈正態(tài)分布曲線。其中 14 例 SMN1 峰高很低，接近 0，分析 SMN1拷貝數(shù)為 0，考慮為 SMN1 患者（純合缺失型）；2 例 SMN1 峰高約為 KRIT1的一半，經(jīng)校正系數(shù)校正后為 1/2，分析 SMN1 拷貝數(shù)為 1，考慮為 SMN1 患者（雜合缺失型）；21 例 SMN1 峰高接近 KRIT1，經(jīng)校正系數(shù)校正后為 1，分析SMN1 拷貝數(shù)為 2，考慮為非 SMA。見圖 3.1.2。

KRIT1 峰高 1.259，兩者比值約為 0.85（1.074/1.259），以該比值作為本試驗(yàn)的校正系數(shù)。見圖 3.1.1。入選病例樣本：37 例樣本 SMN1、KRIT1 基因均在相應(yīng)的時(shí)間出現(xiàn)，且峰型正常，大致呈正態(tài)分布曲線。其中 14 例 SMN1 峰高很低，接近 0，分析 SMN1拷貝數(shù)為 0，考慮為 SMN1 患者（純合缺失型）；2 例 SMN1 峰高約為 KRIT1的一半，經(jīng)校正系數(shù)校正后為 1/2，分析 SMN1 拷貝數(shù)為 1，考慮為 SMN1 患者（雜合缺失型）；21 例 SMN1 峰高接近 KRIT1，經(jīng)校正系數(shù)校正后為 1，分析SMN1 拷貝數(shù)為 2，考慮為非 SMA。見圖 3.1.2。圖 3.1.1：約 2.7 分鐘出現(xiàn) SMN1 峰，6.2 分鐘出現(xiàn) KRIT1 峰，峰高比值約為 0.85（1.074/1.259）

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