【摘要】： 目的 探討PACAP對HIBD的保護作用及有效劑量,以期為臨床治療新生兒HIE提供有效的方法和途徑。 方法 1.制備HIBD模型將60只新生7日齡SD大鼠隨機分為假手術(shù)(sham)組、缺氧缺血(HI)對照組和PACAP治療組,PACAP治療組按給藥劑量分為3個小組:PACAP-H(10~(-8)mol)、PACAP-M(10~(-9)mol)和PACAP-L(10~(-12)mol)。新生大鼠行頸部正中切口,分離結(jié)扎左側(cè)頸總動脈后給予低氧(8%O_2,92%N_2)處理2小時,制成HIBD模型,sham組僅分離左側(cè)頸總動脈,不結(jié)扎,不低氧處理。其余兩組于HI前15min于側(cè)腦室注射生理鹽水或PACAP。所有新生鼠于HI后24h處死。 2.行為能力檢查分別于手術(shù)前及缺氧后1小時對每只新生大鼠進行翻身能力、夾尾左旋測試。 3.腦大體形態(tài)檢查處死時觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)。 4.SOD、MDA、caspase-3基因表達及XIAP基因表達測定以新生鼠HIBD后24h損傷側(cè)腦組織為標(biāo)本,應(yīng)用黃嘌吟氧化酶法測定SOD,應(yīng)用改良的硫代巴比妥酸法測定MDA,應(yīng)用熒光定量RT-PCR檢測caspase-3mRNA和XIAPmRNA的表達。 結(jié)果 1.行為為能力檢查術(shù)前每只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測定,60只全部正常。術(shù)后Sham組測定結(jié)果同前。HI對照組和PACAP治療組的共48只大鼠,12只不能翻身,18只出現(xiàn)夾尾左旋,還有18只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時存在。 2.腦大體檢查新生大鼠HIBD后HI對照組結(jié)扎側(cè)半球腦組織受損嚴(yán)重,在24h時蒼白、水腫明顯,體積明顯大于對側(cè),PACAP治療組大鼠未見上述改變或僅見結(jié)扎側(cè)腦半球輕微的水腫;sham組大鼠大腦半球左右對稱,未見任何病理變化。 3.SOD及MDA表達檢測結(jié)果HIBD后24h,HI對照組MDA比sham組顯著增高(p0.01),HI對照組SOD比sham組顯著降低(p0.01);PACAP治療組各劑量組MDA比HI對照組均顯著減少(p0.01),PACAP治療組各劑量組SOD比HI對照組均顯著回升(p0.01)。 4.caspase-3mRNA及XIAPmRNA表達檢測結(jié)果HIBD后24h,HI對照組caspase-3mRNA的表達和XIAPmRNA的表達均比sham組顯著增高(p0.01);PACAP治療組各劑量組caspase-3mRNA的表達均比HI對照組顯著減少(p0.01);PACAP治療組各劑量組XIAPmRNA的表達均比HI對照組顯著增加(p0.01)。 結(jié)論 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。 2.SOD、MDA、caspase-3及XIAP參與HIBD的發(fā)病機制:新生大鼠HIBD后MDA表達增高,SOD活力降低,證實存在自由基的損傷;caspase-3mRNA升高;證實存在細胞凋亡;XIAPmRNA升高,證實存著抗細胞凋亡的自身調(diào)節(jié)。 3.PACAP可能通過增加SOD,抑制MDA,上調(diào)XIAP,抑制caspase-3,減輕細胞凋亡而對HIBD發(fā)揮保護作用,且在高劑量(10~(-8)mol)、中劑量(10~(-9)mol)和低劑量(10~(-12)mol)時均有效。為PACAP臨床治療新生兒HIE提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R722.121
【圖文】：

圖3總RNA瓊脂糖凝膠電泳注:總RNA中的285和185兩條帶濃度較高，位置正確，其EB的顯色強度為2:1左右，RNA完整。OD260/280在1.9一2.0之間，表明總RNA中沒有蛋白污染�？俁NA提取結(jié)果優(yōu)。

圖4瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注:nLZ000Ma眾e:6條電泳帶由上往下依次為Z000bp、一ooobp、750bp、soobp、250bp、loobp;p一aetin產(chǎn)物長度為Z17bp;樣本產(chǎn)物長度為176bp，與p一aetin相當(dāng)，均在250bp與loobp之lb]。4.3easpase一3pCR結(jié)果sham組相t匕(1.00肚0.144)，Hl對照組caspase一3的相對士0.599)有明顯的升高(P<0.001)，而各劑量PACAP治療組(1.318士0.342，5.544士0.553)與Hl對照組分別t匕較均有明顯的降低(P<0.12、表2及圖13。D.的a而扮Cyel.--一一丫一‘勺一;;{L纓儼吧一一﨏

【參考文獻】

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本文編號：2724404