發(fā)布時(shí)間：2020-06-17 06:41

【摘要】： 研究目的: 通過建立新生大鼠高氧肺損傷模型并分析測定不同時(shí)期肺損傷的肺組織中CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBPα)基因及其蛋白產(chǎn)物表達(dá)水平的變化,從而探討C/EBPα在新生大鼠高氧性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的地位及作用,為今后的臨床預(yù)防和治療提供新的作用靶點(diǎn)。 研究方法: 選取80只出生6小時(shí)內(nèi)的清潔級Sprague-Dawley(S-D)新生大鼠(簡稱新生大鼠)作為研究對象,按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用以下研究方法: 1.實(shí)驗(yàn)分組:將上述新生大鼠根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件隨機(jī)分為2組:Ⅰ、空氣對照組,Ⅱ、高氧暴露組,每組40只。Ⅰ組置于正�？諝猸h(huán)境中與母鼠共同喂養(yǎng),Ⅱ組置于專用高氧箱中喂養(yǎng); 2.高氧肺損傷模型的建立:高氧暴露組新生大鼠置90-95%氧濃度環(huán)境的高氧箱中喂養(yǎng),按照高氧暴露后12h末、1d、3d、7d、14d,5個(gè)時(shí)間點(diǎn)分5個(gè)亞組,每個(gè)亞組8只,各時(shí)間點(diǎn)處死動物; 3.組織學(xué)觀測:取左肺予常規(guī)組織學(xué)方法制作標(biāo)本切片,HE染色后鏡下觀察肺臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化并檢測肺組織輻射狀肺泡計(jì)數(shù)(RAC),并與對照組大鼠比較; 4.糖原染色:取標(biāo)本切片以過碘酸雪夫氏染色法(PAS染色法)處理,鏡下觀測并評估組織中糖原含量,并與對照組比較; 5. C/EBPαmRNA的表達(dá)及其蛋白產(chǎn)物的檢測:取右肺標(biāo)本制肺組織均漿,RT-PCR測定肺組織均漿中C/EBPαmRNA的變化;免疫組織化學(xué)結(jié)合顯微圖像分析檢測C/EBPα基因蛋白的表達(dá),并分別與對照組比較。 研究結(jié)果: 1.高氧性肺損傷組織學(xué)變化:與空氣對照組相比,實(shí)驗(yàn)組新生大鼠高氧暴露12h, 1天后肺組織結(jié)構(gòu)未見明顯變化,3天后見肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、肺泡充血及少量出血、炎性細(xì)胞浸潤等病理變化;7d后肺損傷表現(xiàn)進(jìn)一步加重,表現(xiàn)為大面積肺組織出血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤明顯;14天肺泡腔炎性滲出不明顯,肺泡數(shù)量減少,肺間隔明顯增厚,肺間質(zhì)細(xì)胞增加,肺組織結(jié)構(gòu)紊亂,形成結(jié)構(gòu)簡單的肺泡; 2.肺組織輻射狀肺泡計(jì)數(shù)(RAC):與空氣組新生大鼠比較,高氧暴露后3d內(nèi)RAC雖有減少但無顯著性差異(P0.05);此后隨著日齡兩組間RAC差異逐漸增大,至高氧暴露7d后,實(shí)驗(yàn)組新生大鼠RAC計(jì)數(shù)明顯低于相應(yīng)空氣組,差異有顯著性意義(P0.05),14d高氧組與相應(yīng)空氣組RAC比較減少更為明顯,兩者間差異有高度顯著性意義(P0.01); 3.肺組織中糖原含量的比較:與空氣組新生大鼠比較,高氧暴露12小時(shí)及1天時(shí)糖原含量有所下降,但兩組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),3天及7天后肺組織上皮細(xì)胞中糖原含量下降明顯,兩組間差異有顯著性意義(P0.05,P0.01),而高氧暴露14天后糖原含量明顯增加,兩組比較差異有顯著性意義(P0.01); 4. mRNA及蛋白產(chǎn)物的表達(dá):RT-PCR及免疫組織化學(xué)檢測檢測結(jié)果均表明:空氣對照組新生大鼠肺組織中C/EBPα的表達(dá)在生后12小時(shí)達(dá)峰值,此后隨著時(shí)間的推移,C/EBPα的表達(dá)逐漸下降。高氧組新生大鼠肺組織中C/EBPα表達(dá)情況則呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,即在出生后12小時(shí)比空氣組表達(dá)水平略高,但兩組間無顯著性差異(P0.05);1天后兩者間差異進(jìn)一步加大且有顯著性意義(P0.05),至實(shí)驗(yàn)3天后高氧組新生大鼠肺組織中C/EBPα的表達(dá)達(dá)到高峰,較空氣組明顯升高,差異有高度顯著性意義(P0.01);隨后開始下降,第7天時(shí)與空氣組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),第14天時(shí),較空氣組明顯下降,兩組間差異有顯著性意義(P0.01); 結(jié)論: 1.本實(shí)驗(yàn)成功建立了新生大鼠高氧肺損傷的病理模型,隨著高氧暴露時(shí)間的延長,肺組織的損傷程度進(jìn)行性加重,至高氧暴露14天時(shí),出現(xiàn)了類似于支氣管肺發(fā)育不良的表現(xiàn); 2. C/EBPα主要表達(dá)于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞及終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞中,在正常對照組生后C/EBPα表達(dá)呈現(xiàn)逐漸遞減的趨勢,提示生后C/EBPα的調(diào)控可能與正常肺發(fā)育關(guān)系密切; 3. C/EBPαmRNA及蛋白表達(dá)在高氧肺損傷的早期有高表達(dá),晚期表達(dá)下降,表明轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα可能參與高氧肺損傷應(yīng)激初期肺組織的保護(hù)性調(diào)節(jié)機(jī)制,但隨著損傷程度的加重,這種保護(hù)性機(jī)制將出現(xiàn)失衡,晚期表達(dá)下降可能是導(dǎo)致肺泡發(fā)育受阻,成熟障礙的重要因素; 4.隨著高氧暴露時(shí)間的延長,肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)的糖原含量呈現(xiàn)先減少后增多的趨勢,其糖原含量減少可能與C/EBPα的保護(hù)性調(diào)節(jié)機(jī)制及肺損傷時(shí)糖原過度消耗有關(guān),后期糖原含量明顯增加則提示高氧肺損傷晚期存在肺泡Ⅱ型細(xì)胞分化成熟障礙。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R722.1
【圖文】：

圖 4 空氣組 C/EBPα mRNA 條帶 圖 5 高氧組 C/EBPα mRNA 條帶表 4 兩組肺組織 C/EBPα mRNA 表達(dá)的比較時(shí)間點(diǎn)組別 12h 1d 3d 7d 14d F 值 P 值高氧組 0.92±0.12 0.96±0.06 1.02±0.03 0.76±0.03 0.38±0.04 42.32 <0.01空氣組 0.89±0.09 0.82±0.07 0.77±0.16 0.72±0.16 0.71±0.02 2.01 <0.05P 值 P>0.05 P<0.05 P<0.01 P>0.05 P<0.01兩組肺組織C/EBPα mRNA表達(dá)比較0.801.001.20高氧組空氣組

述 CCAAT 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α在高氧肺損傷新生大鼠肺組織中的動態(tài)表達(dá)及其式調(diào)控作用有三個(gè)必需的功能域：a 穩(wěn)定功能域(SR)，位于 C/EBPs 的 N 端，到穩(wěn)定 C/EB 蛋白結(jié)構(gòu)的作用；b DNA 結(jié)合功能域(DBD)，位于 C/EBP 的 C 端亮氨酸拉鏈區(qū)(Lz)和堿性氨基酸區(qū)(BR)兩個(gè) C/EBP 異構(gòu)體的 Lz 區(qū)通過螺旋的作用形成 C/EBPs 的同源或異源二聚體，然后成對的 BR 區(qū)結(jié)合在 DNA 上具有保守結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)又稱為bZI蛋白；c 激活功能域(AD)位于DBD區(qū)和SR區(qū)之趣的是，C/EBP 包含兩個(gè)功能上可相互促進(jìn)但不相互依賴的激活功能域 AD1D2，且 ADl 的激活功能強(qiáng)于 AD2。成員的基本結(jié)構(gòu)區(qū)域是強(qiáng)大的正電荷區(qū)域，與 DNA 直接相互作用。

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本文編號：2717230