【摘要】：一、WT1基因及其異構體在兒童急性髓系白血病中表達及臨床意義 目的: 探討急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)患兒原代骨髓細胞中WT1(wilms’tumor gene 1)及WT1(+17AA)剪接異構體表達的臨床意義。 方法: 利用實時定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction method RQ-RT-PCR)檢測112例/次AML患兒不同階段原代骨髓細胞中WT1及WT1(+17AA)剪接異構體的表達水平,計算WT1(+17AA)/WT1比值,并與同期30例非白血病患兒對照。 結果: 初診組AML患兒WT1及WT1(+17AA)剪接異構體表達明顯高于緩解后患兒及非白血病對照組(P0.05);復發(fā)組AML患兒WT1及WT1(+17AA)剪接異構體表達接近初診組及耐藥組,組間比較無顯著性差異。WT1(+17AA)/WT1比值緩解后患兒明顯低于初診組、復發(fā)組及耐藥組(P0.05)。動態(tài)監(jiān)測3例表達WT1基因的初診AML患兒WT1及WT1(+17AA)剪接異構體,結果顯示:臨床耐藥或復發(fā)AML患兒,其WT1、WT1(+17AA)及WT1(+17AA)/WT1比值呈持續(xù)高表達,或一過性下降后再度升高。 結論: WT1及WT1(+17AA)剪接異構體的表達及動態(tài)變化可作為急性髓系白血病判斷預后及臨床治療療效指標。 二、WT1基因突變與兒童急性髓細胞白血病的相關性研究 目的: 探討WT1基因突變的發(fā)生率和突變類型與兒童急性髓系白血病預后的關系。 方法: 使用PCR-DNA測序技術對47例初診AML患者骨髓或外周靜脈血中WT1基因的外顯子7進行測序分析,檢測其是否有突變。對WT1外顯子7框移突變患者進行同源建模,分子動力學優(yōu)化模擬空間構型,試圖闡述WT1基因框移突變對WT1蛋白功能的影響,并與兒童AML的轉歸進行相關性分析。 結果: ⑴在19例AML患兒中發(fā)現(xiàn)編碼434位氨基酸的第二個堿基(A→G,G/A)存在同義突變(R434R,R為精氨酸),檢出率為40.4%(19/47),比對NCBI上的SNP庫,證實是一個單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點。 ⑵3例存在框碼移位,檢出率為6.3%(3/47),具體如下: Case1:MDS-AML患兒中發(fā)現(xiàn)c.[ 1319delG],產生框移突變,已有文獻報道。模擬空間構型示外顯子7結構域發(fā)生明顯變化。 2名原發(fā)耐藥患兒, 1名患者突變位點為c.[1342delA;1349-1350insA; 1353delG;1355-1356insG;1392delA;1400-1401insT;1405delT];c.[1415-1416insC];c.[1431delG];c.[1433-1434insA],另1名患者突變位點為c.[1345delT;1349-1350insA; 1353delG; 1355-1356insG; 1392delA]。目前沒有發(fā)現(xiàn)相關文獻報道,提示新的突變位點。模擬空間構型示外顯子7結構域未發(fā)生明顯變化。 結論: ⑴AML存在WT1基因突變,與其預后相關。 ⑵WT1基因外顯子7同義突變(c. 1303 AG)與急性髓系白血病預后無明顯相關性,而WT1基因外顯子7框移突變與MDS的惡性轉化和兒童AML耐藥相關。 (3) WT1基因外顯子7框移突變可能是通過影響WT1蛋白結構,最終影響與WT1自身或其它蛋白之間相互作用,影響細胞的生物學活性,使其發(fā)生惡性轉化或耐藥。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R733.71
【圖文】：

箭頭指示為 Marker 500bp；1、2、3 為 WT1 第 7 外顯子突7、8 為 WT1 第 7 外顯子突變陰性 AML 患兒標本NA 測序結果型 WT1 基因外顯子 7 測序結果（見圖 2）列：1295-GAT GTG CGA CGT GTG CCT GGA GTA GCC CCGGCA TCT GAG ACC AGT GAG AAA CGC CCC TTC ATGTGC AAT AAG AGA TAT TTT AAG CTG TCC CAC TTAAAG CAC ACT G-1445序列：431-D V R R V P G V A P T L V R S A S E T SP G C N K R Y F K L S H L Q Met H S R K H

圖 2⑵WT1 基因外顯子 7 異常測序結果（見圖 3）②Case1 患者 1319 號堿基缺失 G 發(fā)生框移突變，即 c.[ 1319delG]，反向測序一般資料：女，3 歲，經(jīng)骨穿確診為骨髓增生異常綜合征，半年后轉化為急性白血病 M1 型，初診白細胞數(shù)：19.9×109/L,染色體：45，XX,-7,19p+[17]/46,DAE 化療后骨穿結果示緩解，現(xiàn)繼續(xù)鞏固治療中。

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本文編號：2716979