【摘要】： 目的:采用行為學(xué)和電生理學(xué)評(píng)價(jià)方法,探討新生期母嬰分離(MS)對(duì)幼鼠內(nèi)臟痛覺(jué)敏感性影響;比較內(nèi)臟高敏感性幼鼠和對(duì)照組幼鼠腰骶段脊髓背角Fos蛋白表達(dá),探討脊髓背角Fos蛋白異常表達(dá)在幼鼠內(nèi)臟痛覺(jué)高敏形成中作用。 方法:[1]20只SD新生大鼠隨機(jī)分成MS組和對(duì)照組,每組10只;MS組新生大鼠予出生后第2～14天每天與母鼠分離3小時(shí)(8:00-11:00am),連續(xù)13天,對(duì)照組不予任何處理,與母鼠同籠。常規(guī)飼養(yǎng)到幼鼠期(6周齡),通過(guò)觀察大鼠在不同壓力結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)刺激后的腹壁撤退反射(AWR)評(píng)分、內(nèi)臟痛閾和腹外斜肌(EOMA)放電測(cè)量進(jìn)行內(nèi)臟痛覺(jué)敏感性評(píng)價(jià),選取降結(jié)腸進(jìn)行病理學(xué)檢查。[2]32只SD新生大鼠按析因設(shè)計(jì)分成4組,每組8只,A組為MS組,6周齡未給予CRD, B組為MS組并在6周齡時(shí)接受CRD,C組為對(duì)照組并在6周齡接受CRD,D組為對(duì)照組,6周齡未給予CRD。B、C組幼鼠接受CRD刺激后2小時(shí)和A、D組幼鼠留取L6至S2脊髓,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色及計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行脊髓Fos蛋白免疫陽(yáng)性(FLI)細(xì)胞數(shù)和灰度積分值半定量分析。采用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,α=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果:[1]隨CRD增加,幼鼠AWR評(píng)分增加;AWR評(píng)分受新生期接受MS及性別影響(F值分別為26.53、9.24,p0.001),雌性幼鼠AWR評(píng)分明顯高于雄性,MS組明顯高于對(duì)照組,性別與MS之間無(wú)明顯交互作用;MS組與對(duì)照組AWR評(píng)分在CRD20mmHg、40mmHg、60mmHg時(shí)差異明顯,CRD80mmHg時(shí)無(wú)顯著差異。MS組和對(duì)照組幼鼠痛閾值(?x±s )為17.67±8.2mmHg、33.83±4.3mmHg(F=30.415,p0.01)。[2]隨CRD增加,幼鼠腹外斜肌放電波幅增加;腹外斜肌放電波幅受MS及性別影響(F值分別為18.83、7.62,p0.05);雌性幼鼠腹外斜肌放電波幅明顯高于雄性,MS組明顯高于對(duì)照組,MS組與對(duì)照組腹外斜肌放電幅值在CRD15mmHg、30mmHg、45mmHg時(shí)有明顯差異,CRD60mmHg、75mmHg時(shí)無(wú)顯著差異。兩組幼鼠降結(jié)腸未見(jiàn)明顯病理組織損傷。[3]新生期MS和幼鼠6周齡時(shí)CRD均可使幼鼠腰骶段脊髓背角FLI細(xì)胞數(shù)顯著升高,FLI細(xì)胞灰度積分值顯著降低,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MS和CRD對(duì)脊髓背角FLI細(xì)胞數(shù)及灰度積分值影響無(wú)交互作用。 結(jié)論:新生期持續(xù)MS可導(dǎo)致幼鼠脊髓初級(jí)中樞敏化,接受傷害性CRD刺激后能顯著引起脊髓神經(jīng)元Fos蛋白高表達(dá),造成大鼠痛閾下降,出現(xiàn)慢性內(nèi)臟痛覺(jué)高敏感性,并且這種高敏感性能持續(xù)到幼年期,同時(shí)沒(méi)有明顯的組織病理學(xué)改變。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R722.1
【圖文】：

飼養(yǎng)環(huán)境為：每12小時(shí)進(jìn)行1次亮暗循環(huán)，自由進(jìn)食。(二)幼鼠內(nèi)臟痛覺(jué)敏感性測(cè)定1.行為學(xué)評(píng)價(jià)幼鼠 6 周齡時(shí)進(jìn)行不同壓力結(jié)直腸擴(kuò)張(Colorectal Distention，CRD)刺激下腹壁撤退反射(Abdominal Withdrawal Reflex，AWR)[7]評(píng)分和痛閾[8]測(cè)定，評(píng)估腸道痛覺(jué)敏感性。幼鼠在實(shí)驗(yàn)前 18 小時(shí)禁食不禁水，乙醚麻醉后，將外涂石蠟油的氣囊插入結(jié)直腸內(nèi)，使氣囊末端深入肛門內(nèi) 1.0cm，在肛門外 1.0cm 處用膠布將導(dǎo)管固定在鼠尾根部，導(dǎo)管經(jīng)三通管連接注射器和血壓計(jì)。將幼鼠置于有機(jī)玻璃觀察箱(20cm×6cm×8cm)中，幼鼠能自由前后活動(dòng)但不能轉(zhuǎn)身，待幼鼠蘇醒并完全適應(yīng)環(huán)境 30 分鐘后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。按照從低到高壓力梯度注射空氣，使球囊內(nèi)壓力分別達(dá)到 20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg，每次擴(kuò)張持續(xù) 20 秒，每個(gè)壓力重復(fù) 3 次，每次給予壓力之間間歇 4 分鐘。1.1 AWR 評(píng)分：AWR 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)示意圖見(jiàn)圖 1-1。

腹肌未抬離桌面；3 分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹肌明顯收縮變平或使下腹壁抬離箱底；4 分，結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹壁拱起或伴身體、骨盆躬起或睪丸抬起。每個(gè) CRD 壓力進(jìn)行 3 次 AWR 評(píng)分，取均值。1.2 痛閾測(cè)定：通過(guò)測(cè)定壓力閾值來(lái)反映內(nèi)臟痛閾。CRD 導(dǎo)管尾端以三通管接血壓計(jì)及注射器，持續(xù)、緩慢注氣使壓力上升，壓力每次遞增 5mmHg，保持 3 分鐘，抽出空氣間隔 1 分鐘后重復(fù)加壓直至肉眼觀察出現(xiàn)明顯的下腹壁抬離箱底或明顯收縮變平(AWR 評(píng)分為 3 分)時(shí)的最小壓力值為痛閾[8]，擴(kuò)張壓力范圍 0～80mmHg。2.電生理學(xué)評(píng)價(jià)幼鼠 6 周齡時(shí)進(jìn)行 CRD 刺激下的腹外斜肌放電測(cè)量評(píng)價(jià)內(nèi)臟痛覺(jué)敏感性。按前述方法置入氣囊后，將幼鼠固定于手術(shù)臺(tái)上，將針形電極插入腹股溝韌帶上方、距中線 1.5cm 的一側(cè)腹外斜肌上，待幼鼠蘇醒并完全適應(yīng)環(huán)境 30 分鐘后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求安靜，保持相對(duì)濕度在 40～70%，室溫 18～29℃之內(nèi)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號(hào)：2715527