【摘要】： 多巴胺(Dopamine,DA)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)與神經(jīng)精神疾病關(guān)系密切的一種神經(jīng)遞質(zhì),主要存在于黑質(zhì)紋狀體系;多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(Dopamine transporter,DAT)則是位于多巴胺能神經(jīng)末梢突觸前膜的一種膜蛋白,它特異性的再攝取DA入突觸前末梢,而終止其對(duì)突觸后神經(jīng)元的作用,是反映多巴胺能神經(jīng)體系功能狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo),已廣泛用于神經(jīng)配基顯像技術(shù),檢測(cè)相關(guān)疾病腦內(nèi)是否存在多巴胺能神經(jīng)體系的障礙。 諸多研究顯示注意缺陷多動(dòng)障礙(Attention-Deficit/ Hyperactivity Disorder, ADHD)大多在兒童和青少年時(shí)期發(fā)病,主要表現(xiàn)為注意力分散、活動(dòng)過多等癥狀。男性患者明顯多于女性,推測(cè)其發(fā)病可能與體內(nèi)雄激素水平紊亂有關(guān)。神經(jīng)顯像技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),ADHD患者存在腦內(nèi)DAT結(jié)合信號(hào)的改變,可能雄激素水平的紊亂改變了腦內(nèi)DAT的表達(dá)。 近年的研究表明,雄性甾類激素(anabolic  androgenic steroids, AAS)可以影響腦內(nèi)的獎(jiǎng)賞系統(tǒng),對(duì)成年大鼠施予雄激素后,以β-CIT配基顯像技術(shù)(PET或SPECT)檢測(cè)到大鼠腦內(nèi)存在β-CIT結(jié)合信號(hào)的變化。?-CIT是目前用于檢測(cè)活體腦內(nèi)DAT常用的配基,然而?-CIT除結(jié)合DAT外,還能結(jié)合腦內(nèi)其它單胺能轉(zhuǎn)運(yùn)體如5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體和去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)體。研究證實(shí)腦內(nèi)大部分區(qū)域都有三種轉(zhuǎn)運(yùn)體的交織分 布。因而,應(yīng)用?-CIT配基顯像技術(shù)難以判斷DAT在腦內(nèi)的真實(shí)改變。 目的:本研究利用開放廣場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、免疫組織化學(xué)技術(shù)以及Western blot方法,觀察丙酸睪丸酮早期處理大鼠行為和黑質(zhì)-尾殼核DAT免疫反應(yīng)強(qiáng)度的變化,探討丙酸睪丸酮早期處理對(duì)大鼠行為和DAT表達(dá)的影響,藉以推測(cè)兩者之間的相互關(guān)系,以期為ADHD發(fā)病的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:選用健康雄性Wistar乳鼠,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組(testosterone propionate,TP)乳鼠自生后7d至21d ,背部皮下注射丙酸睪丸酮( 500μg/d );對(duì)照組(vehicle,Veh)乳鼠相同部位注射等體積芝麻油。在生后46d和47d以開放廣場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察大鼠運(yùn)動(dòng)行為變化,隨后以免疫細(xì)胞化學(xué)、western blot技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠腦內(nèi)DAT在腦內(nèi)的表達(dá)改變。 結(jié)果:1.開放廣場(chǎng)實(shí)驗(yàn):在所觀察指標(biāo)中,丙酸睪丸酮處理組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)及運(yùn)動(dòng)總徑長在8min組和15min組的檢測(cè)中其得分或長度較對(duì)照組有顯著性差異(p0.05);垂直運(yùn)動(dòng)得分在8min組第二天無意義(p0.05),但存在增多的趨勢(shì),在15min組三天都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);清潔動(dòng)作次數(shù)在8min組第一天無顯著差別(p0.05),但存在增多的趨勢(shì),在15min組三天都具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。此外,在成長期間,各組間體重?zé)o明顯差別,但丙酸睪丸酮處理組大鼠在開放廣場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察中行進(jìn)路線較對(duì)照組復(fù)雜,對(duì)周圍環(huán)境的警惕性相對(duì)增高。 2.免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①DAT(抗DAT單克隆抗體)免疫反應(yīng)強(qiáng)標(biāo)記信號(hào)主要分布在中腦黑質(zhì)和尾殼核。早期丙酸睪丸酮處理大鼠可提高DAT在中腦黑質(zhì)和尾殼核表達(dá)強(qiáng)度,通過靜態(tài)灰度值分析發(fā)現(xiàn):實(shí)驗(yàn)組黑質(zhì)101.41±4.72,對(duì)照組黑質(zhì)111.01±12.14;實(shí)驗(yàn)組尾殼核102.61±5.73,對(duì)照組尾殼核113.68±12.08,丙酸睪丸酮處理組大鼠的DAT灰度值明顯低于對(duì)照組(P0.01),在黑質(zhì)和尾殼核分別降低了9.47%和10.79%。具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②TH免疫組化結(jié)果:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)目無明顯差別(P0.05)。黑質(zhì)和紋狀體TH免疫反應(yīng)的靜態(tài)灰度值分析結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的灰度值明顯低于對(duì)照組,分別降低了13.46%和14.15%(P0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3. Western blot結(jié)果: Western blot結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,丙酸睪丸酮處理組各指標(biāo)與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值明顯升高。(1)DAT(抗DAT單克隆抗體)與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值在對(duì)照組大鼠分別黑質(zhì)0.7044±0.0734(80kDa)和0.4179±0.041(50kDa),尾殼核4.2416±0.5436(80kDa)和1.0976±0.3659(50kDa);丙酸睪丸酮處理組大鼠為:黑質(zhì)0.9081±0.0199(80kDa)和0.5374±0.0567(50kDa),尾殼核5.4952±0.6285(80kDa)和1.5117±0.1134(50kDa)。實(shí)驗(yàn)組大鼠80kDa和50kDa處DAT在黑質(zhì)和尾殼核的相對(duì)吸光度比值較對(duì)照組升高(P0.05),在黑質(zhì)增高了28.9%(80kDa)和28.6%(50kDa),尾殼核增高了29.6%(80kDa)和37.7%(50kDa),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)DAT(兔抗DAT多克隆抗體)與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值在對(duì)照組大鼠分別黑質(zhì)1.0297±0.4702(80kDa)和0.4377±0.1389(50kDa),尾殼核0.5227±0.3035(80kDa)和0.2148±0.0898(50kDa);丙酸睪丸酮處理組大鼠為:黑質(zhì)2.5606±0.8808 ( 80kDa )和0.7371±0.1302(50kDa),尾殼核1.1914±0.232(80kDa)和0.4352±0.0938(50kDa)。實(shí)驗(yàn)組大鼠80kDa和50kDa處DAT在黑質(zhì)和尾殼核的相對(duì)吸光度比值較對(duì)照組明顯升高(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)TH與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值在對(duì)照組大鼠分別為:黑質(zhì)1.4604±0.2174、尾殼核2.6931±0.2523;丙酸睪丸酮處理組大鼠為:黑質(zhì)1.9263±0.1647、尾殼核4.2186±0.3987。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組各個(gè)腦區(qū)TH與β-actin的比值增高(P0.05),在黑質(zhì)和尾殼核分別增高了31.9%和56.7%,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論:1.早期丙酸睪丸酮的處理改變大鼠青春期的運(yùn)動(dòng)行為,主要表現(xiàn)為水平運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)、總徑長和清潔動(dòng)作次數(shù)的增多;2.早期丙酸睪丸酮的處理增加大鼠黑質(zhì)-尾殼核DAT的含量;3.早期丙酸睪丸酮的處理增加大鼠黑質(zhì)-尾殼核TH的含量。4.早期雄激素水平的紊亂可能通過改變腦內(nèi)DA能神經(jīng)體系而影響大鼠的運(yùn)動(dòng)行為,這很可能與ADHD發(fā)病的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R749.94

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2713779