【摘要】：背景孤獨癥(Autism),是起源于嬰幼兒期的一種以社會交往能力缺陷、言語發(fā)育障礙、興趣范圍狹窄和刻板重復(fù)的行為方式為特征的廣泛性發(fā)育障礙。發(fā)病率0.6%-1%,男女發(fā)病差異顯著,比例為4-5:1,無明顯的文化種族差異。目前尚未有針對孤獨癥治療的有效方法,通過行為干預(yù)、特殊教育訓(xùn)練、家庭治療計劃以及輔以藥物治療,療效十分有限。干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞,具有自我復(fù)制、體外高度增殖和多向分化的潛能。人們不斷地嘗試將干細胞定向分化為功能細胞并用于各種器官損傷的治療研究和探索,已安全有效地治療了多種疾病。本研究通過應(yīng)用人胚胎來源神經(jīng)前體細胞(human embryonic-derived Neural Precursor Cells,hNPCs)和自體骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)治療低功能型孤獨癥,在治療前后運用孤獨癥行為評定量表(Autism Behavior Checklist,ABC)、兒童孤獨癥評定量表(Childhood Autism Rating Scale,CARS)和心理教育評定量表中文修訂版(Revision of Chinese Version of Psycho-Educational Profile,C-PEP)進行評定,同時觀察不良反應(yīng),以評價hNPCs和自體BMSCs治療兒童低功能型孤獨癥的臨床安全性和有效性。 研究對象和方法 1.研究對象 本次研究選取2006年11月至2010年9月在我科住院治療的低功能型孤獨癥患兒18例,分為兩組:人胚胎來源神經(jīng)前體細胞(hNPCs)治療組9例,其中男性8例,女性1例,最大年齡9.2歲,最小年齡3.4歲,平均6.04±1.72歲;自體骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)治療組9例,均為男性,最大年齡8.5歲,最小年齡4.9歲,平均6.77±1.00歲。兩組患兒入選標(biāo)準(zhǔn):①年齡3-12歲,性別不限;②符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第四版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-Ⅳ,DSM-Ⅳ)中孤獨癥診斷標(biāo)準(zhǔn),并有精神�？漆t(yī)生明確診斷;③智商均小于70分;④訓(xùn)練半年以上無進步者;⑤法定監(jiān)護人知情同意,并簽署《細胞移植治療知情同意書》。 2.治療方法 hNPCs治療組:經(jīng)顱骨鉆孔側(cè)腦室穿刺注射hNPCs1次。 BMSCs治療組:腰椎穿刺并蛛網(wǎng)膜下腔注射BMSCs3次,每次間隔時間為一周。 細胞治療劑量:每次治療的干細胞數(shù)量為2×10~6/Kg。 3.評價指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn) 3.1療效評價指標(biāo) 3.1.1臨床癥狀變化:1)生理功能的進步;2)病理行為的改善。 3.1.2療效評價量表:1)ABC;2)CARS;3)C-PEP。 由具有評估資格不知分組的第三方醫(yī)師對所有治療者于手術(shù)前、術(shù)后1月、術(shù)后3月、術(shù)后6月進行ABC、CARS、C-PEP的評估,比較各觀察組術(shù)前術(shù)后的變化及兩組間的區(qū)別。對兩組治療前后的得分進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 1.本研究為非隨機、開放、對照臨床研究。研究過程中無脫落病例,觀察期為6個月。兩組在性別、年齡、母孕情況、家族遺傳史和智力測查等資料方面(P0.05)沒有顯著性差異。 2.安全性評價各治療組不良反應(yīng)主要為一過性發(fā)熱,細胞治療過程結(jié)束后,這些癥狀很快消失。治療前后兩組病例生命體征均較平穩(wěn)。本研究過程中無嚴(yán)重不良事件發(fā)生。 3.有效性評價1)從臨床癥狀變化和統(tǒng)計分析結(jié)果看來,兩組治療方法均具有一定的療效,療效主要集中出現(xiàn)在細胞治療后3月,hNPCs治療組療效可能較BMSCs治療組為佳。2)在ABC上病理行為改善的方面主要集中在交往能力和語言能力因子方面。3)在C-PEP上生理功能的提高主要集中在精細動作功能方面的改善。 結(jié)論 1.本研究結(jié)果提示臨床應(yīng)用hNPCs和BMSCs治療低功能型孤獨癥是安全的、可行的。 2.研究提示細胞移植治療低功能型孤獨癥具有一定療效。 3. hNPCs治療可能優(yōu)于BMSCs治療。
【圖文】：

飽和濕度的孵箱內(nèi)靜止培養(yǎng)5天。7）5天后采取半量換液方法，靜止培養(yǎng)瓶待神經(jīng)球沉淀后，輕輕棄去上層液體，加入新鮮培養(yǎng)基。8.）以后每隔三天半量換液（見圖1）。檢測：nestin 檢測為直接用神經(jīng)干細胞球進行免疫染色，其余分化標(biāo)志物是將神經(jīng)干細胞采用1％血清誘導(dǎo)7天后檢測，方法如下：1）用吸管順著培養(yǎng)板邊緣輕柔吸去培養(yǎng)液，加入預(yù)熱的 PBS 漂洗3次。2）吸去 PBS，加入固定液，室溫下固定15分鐘。3）吸去固定液，加入新的固定液繼續(xù)固定15分鐘。4）吸去固定液，PBS 漂洗三次。5）加入適量封閉液。6）吸去封閉液，加入適量一抗（nestin 1：200

13換液一次（見圖2）。流式檢測：1）0.25%胰酶-EDTA 消化并收集細胞。2）無菌 PBS 洗滌細胞2次，1200rpm 離心5分鐘，將細胞重懸于 PBS 中。3）細胞用300目濾網(wǎng)過濾，，以除去其中的聚集細胞團。4）將待檢測的表面分子抗體與間充質(zhì)干細胞懸液孵育30分鐘。間充質(zhì)干細胞所檢測的表面分子包括：CD29，CD44，CD73，CD90，CD105
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.9

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本文編號：2706445