【摘要】：背景孤獨(dú)癥(Autism),是起源于嬰幼兒期的一種以社會(huì)交往能力缺陷、言語發(fā)育障礙、興趣范圍狹窄和刻板重復(fù)的行為方式為特征的廣泛性發(fā)育障礙。發(fā)病率0.6%-1%,男女發(fā)病差異顯著,比例為4-5:1,無明顯的文化種族差異。目前尚未有針對孤獨(dú)癥治療的有效方法,通過行為干預(yù)、特殊教育訓(xùn)練、家庭治療計(jì)劃以及輔以藥物治療,療效十分有限。干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞,具有自我復(fù)制、體外高度增殖和多向分化的潛能。人們不斷地嘗試將干細(xì)胞定向分化為功能細(xì)胞并用于各種器官損傷的治療研究和探索,已安全有效地治療了多種疾病。本研究通過應(yīng)用人胚胎來源神經(jīng)前體細(xì)胞(human embryonic-derived Neural Precursor Cells,hNPCs)和自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)治療低功能型孤獨(dú)癥,在治療前后運(yùn)用孤獨(dú)癥行為評定量表(Autism Behavior Checklist,ABC)、兒童孤獨(dú)癥評定量表(Childhood Autism Rating Scale,CARS)和心理教育評定量表中文修訂版(Revision of Chinese Version of Psycho-Educational Profile,C-PEP)進(jìn)行評定,同時(shí)觀察不良反應(yīng),以評價(jià)hNPCs和自體BMSCs治療兒童低功能型孤獨(dú)癥的臨床安全性和有效性。 研究對象和方法 1.研究對象 本次研究選取2006年11月至2010年9月在我科住院治療的低功能型孤獨(dú)癥患兒18例,分為兩組:人胚胎來源神經(jīng)前體細(xì)胞(hNPCs)治療組9例,其中男性8例,女性1例,最大年齡9.2歲,最小年齡3.4歲,平均6.04±1.72歲;自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)治療組9例,均為男性,最大年齡8.5歲,最小年齡4.9歲,平均6.77±1.00歲。兩組患兒入選標(biāo)準(zhǔn):①年齡3-12歲,性別不限;②符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊第四版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-Ⅳ,DSM-Ⅳ)中孤獨(dú)癥診斷標(biāo)準(zhǔn),并有精神�？漆t(yī)生明確診斷;③智商均小于70分;④訓(xùn)練半年以上無進(jìn)步者;⑤法定監(jiān)護(hù)人知情同意,并簽署《細(xì)胞移植治療知情同意書》。 2.治療方法 hNPCs治療組:經(jīng)顱骨鉆孔側(cè)腦室穿刺注射hNPCs1次。 BMSCs治療組:腰椎穿刺并蛛網(wǎng)膜下腔注射BMSCs3次,每次間隔時(shí)間為一周。 細(xì)胞治療劑量:每次治療的干細(xì)胞數(shù)量為2×10~6/Kg。 3.評價(jià)指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 3.1療效評價(jià)指標(biāo) 3.1.1臨床癥狀變化:1)生理功能的進(jìn)步;2)病理行為的改善。 3.1.2療效評價(jià)量表:1)ABC;2)CARS;3)C-PEP。 由具有評估資格不知分組的第三方醫(yī)師對所有治療者于手術(shù)前、術(shù)后1月、術(shù)后3月、術(shù)后6月進(jìn)行ABC、CARS、C-PEP的評估,比較各觀察組術(shù)前術(shù)后的變化及兩組間的區(qū)別。對兩組治療前后的得分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 1.本研究為非隨機(jī)、開放、對照臨床研究。研究過程中無脫落病例,觀察期為6個(gè)月。兩組在性別、年齡、母孕情況、家族遺傳史和智力測查等資料方面(P0.05)沒有顯著性差異。 2.安全性評價(jià)各治療組不良反應(yīng)主要為一過性發(fā)熱,細(xì)胞治療過程結(jié)束后,這些癥狀很快消失。治療前后兩組病例生命體征均較平穩(wěn)。本研究過程中無嚴(yán)重不良事件發(fā)生。 3.有效性評價(jià)1)從臨床癥狀變化和統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果看來,兩組治療方法均具有一定的療效,療效主要集中出現(xiàn)在細(xì)胞治療后3月,hNPCs治療組療效可能較BMSCs治療組為佳。2)在ABC上病理行為改善的方面主要集中在交往能力和語言能力因子方面。3)在C-PEP上生理功能的提高主要集中在精細(xì)動(dòng)作功能方面的改善。 結(jié)論 1.本研究結(jié)果提示臨床應(yīng)用hNPCs和BMSCs治療低功能型孤獨(dú)癥是安全的、可行的。 2.研究提示細(xì)胞移植治療低功能型孤獨(dú)癥具有一定療效。 3. hNPCs治療可能優(yōu)于BMSCs治療。
【圖文】：

飽和濕度的孵箱內(nèi)靜止培養(yǎng)5天。7）5天后采取半量換液方法，靜止培養(yǎng)瓶待神經(jīng)球沉淀后，輕輕棄去上層液體，加入新鮮培養(yǎng)基。8.）以后每隔三天半量換液（見圖1）。檢測：nestin 檢測為直接用神經(jīng)干細(xì)胞球進(jìn)行免疫染色，其余分化標(biāo)志物是將神經(jīng)干細(xì)胞采用1％血清誘導(dǎo)7天后檢測，方法如下：1）用吸管順著培養(yǎng)板邊緣輕柔吸去培養(yǎng)液，加入預(yù)熱的 PBS 漂洗3次。2）吸去 PBS，加入固定液，室溫下固定15分鐘。3）吸去固定液，加入新的固定液繼續(xù)固定15分鐘。4）吸去固定液，PBS 漂洗三次。5）加入適量封閉液。6）吸去封閉液，加入適量一抗（nestin 1：200

13換液一次（見圖2）。流式檢測：1）0.25%胰酶-EDTA 消化并收集細(xì)胞。2）無菌 PBS 洗滌細(xì)胞2次，1200rpm 離心5分鐘，將細(xì)胞重懸于 PBS 中。3）細(xì)胞用300目濾網(wǎng)過濾，，以除去其中的聚集細(xì)胞團(tuán)。4）將待檢測的表面分子抗體與間充質(zhì)干細(xì)胞懸液孵育30分鐘。間充質(zhì)干細(xì)胞所檢測的表面分子包括：CD29，CD44，CD73，CD90，CD105
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.9

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