【摘要】： 前言 腸黏膜屏障是機(jī)體最重要的免疫防御屏障,將機(jī)體與腸道內(nèi)的外源性物質(zhì)隔離開(kāi)來(lái),避免病原微生物的侵襲和抗原分子的損傷。腸黏膜屏障主要包括以下三個(gè)方面:①腸道連續(xù)的黏膜上皮構(gòu)成的機(jī)械屏障,②由腸道淋巴樣組織細(xì)胞網(wǎng)提供的細(xì)胞及體液免疫系統(tǒng),也稱免疫屏障,③正常的大量的腸道厭氧菌群,防止致病微生物的過(guò)度增生及在腸道黏膜的定植,構(gòu)成微生物屏障。 腸黏膜的機(jī)械屏障由腸表面黏液,微絨毛,腸黏膜上皮細(xì)胞及其間的連接以及黏膜的特殊結(jié)構(gòu)組成,是腸黏膜屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。上皮細(xì)胞的形態(tài)改變、連接縫隙增寬或開(kāi)放數(shù)目增多都會(huì)影響上皮細(xì)胞屏障功能,使通透性增加。目前研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜通透性增加參與了多種疾病的發(fā)生發(fā)展,如:炎癥性腸病、敗血癥、燒傷、終末期肝病、重癥胰腺炎等,進(jìn)一步引起全身炎癥反應(yīng)綜合征甚至多器官功能衰竭。近期研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜屏障的破壞在兒科急慢性疾病的發(fā)生發(fā)展中亦具有顯著的意義:急性期,細(xì)菌移位可引起敗血癥及多器官功能衰竭;而嬰兒時(shí)期的腸黏膜屏障破壞將會(huì)成為隨后產(chǎn)生的部分變應(yīng)性疾病的始發(fā)因素,如:濕疹,食物過(guò)敏,谷膠病,1型糖尿病,哮喘,炎癥性腸病及孤獨(dú)癥等。因此腸黏膜屏障功能及其完整性這一課題在兒科領(lǐng)域也受到越來(lái)越多的關(guān)注。 腸上皮屏障通透性增加與多種因素有關(guān),不僅包括疾病的起始致病因子如感染、缺血等,也包括機(jī)體繼發(fā)產(chǎn)生的內(nèi)源性免疫介質(zhì)。尋找這個(gè)炎癥連鎖反應(yīng)中的關(guān)鍵因素一直是我們努力的方向。有趣的是,一直在循環(huán)系統(tǒng)中倍受關(guān)注的血小板活化因子(PAF)同樣可以由腸上皮細(xì)胞產(chǎn)生,存在于正常的小腸組織中,并調(diào)節(jié)黏膜的通透性。更為重要的是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),給予小劑量PAF,在不足以引起腸損傷的情況下,即可以增加腸黏膜的通透性,觸發(fā)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的活化。因此,PAF被認(rèn)為是腸上皮屏障通透性增加的關(guān)鍵因素,但具體作用機(jī)制和方式還不明了。 本實(shí)驗(yàn)中我們應(yīng)用Caco-2細(xì)胞株建立體外腸上皮細(xì)胞屏障模型,觀察PAF對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障通透性的影響,確定其作用位點(diǎn),并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討PAF對(duì)維持腸黏膜機(jī)械屏障正常通透性的細(xì)胞骨架蛋白F-actin,構(gòu)成細(xì)胞緊密連接的重要蛋白Occludin,Claudin-1,ZO-1,以及在腸道的自我保護(hù)和修復(fù)中具有重要意義的三葉肽ITF在基因、蛋白、定位等方面的影響,系統(tǒng)探討PAF對(duì)腸黏膜機(jī)械屏障的損傷機(jī)制。 腸三葉因子(ITF)屬三葉肽家族,是近年來(lái)被人們注意到的對(duì)胃腸道粘膜屏障有重要保護(hù)和修復(fù)作用的多肽,是一種新型的生長(zhǎng)因子類多肽物質(zhì)。它的生理功能主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面:首先ITF可與粘液糖蛋白相互作用或交聯(lián),形成粘彈性的粘液凝膠層,對(duì)腸道粘液層起固定和支持作用,防止有害物質(zhì)對(duì)腸粘膜細(xì)胞的損傷,從而增強(qiáng)胃腸道粘膜屏障的保護(hù)能力;其次ITF具有很強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞增殖與移行的能力,被認(rèn)為是粘膜損傷的快速反應(yīng)肽,在損傷早期即可表達(dá),促進(jìn)受損區(qū)域上皮細(xì)胞重建并加快上皮細(xì)胞移行速度,因而在腸道的自我保護(hù)機(jī)制中占據(jù)重要地位。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明腸三葉因子在維持腸上皮細(xì)胞的完整性,恢復(fù)腸黏膜的正常通透性方面均起到重要作用。近期的體外實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)ITF可以調(diào)控緊密連接蛋白Claudin-1和Claudin-2的表達(dá)而影響腸上皮的跨上皮阻力。但PAF是否可以影響內(nèi)源性ITF的表達(dá)?外源性給予基因重組ITF是否可以起到保護(hù)作用?其機(jī)制如何?這些問(wèn)題的回答也為臨床應(yīng)用ITF治療胃腸黏膜損傷性疾病提供了可靠的理論依據(jù)。 材料和方法 一、細(xì)胞培養(yǎng) Caco-2細(xì)胞株,來(lái)源于人大腸癌細(xì)胞,可分化成有極性的腸上皮細(xì)胞。應(yīng)用含有150 ml/L胎牛血清和青霉素-鏈霉素雙抗液的RPMI 1640高糖培養(yǎng)液,在37℃、50 ml/L CO_2條件下進(jìn)行培養(yǎng),每7 d按1:2的比例傳代。將細(xì)胞接種于transwell、蓋玻片、六孔板上或培養(yǎng)瓶中,待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%左右,換無(wú)血清培養(yǎng)液,按實(shí)驗(yàn)分組加藥,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。每種實(shí)驗(yàn)均選取至少三組非同代細(xì)胞進(jìn)行。 二、實(shí)驗(yàn)分組 分別設(shè)正常對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組(含模型對(duì)照組)、ITF預(yù)防組、ITF治療組。 正常對(duì)照組:不加刺激物及干預(yù)因素。 實(shí)驗(yàn)組:加入PAF,終濃度分別為50ng%qL、100ng/L和200ng%qL,并把終濃度100ng%qL的組作為模型對(duì)照組,分別作用2,4,8,12,24,48h。 ITF預(yù)防組:先加入ITF0.3g%qL,30min后加入PAF100ng%qL,共培養(yǎng)24h。 ITF治療組:先加入PAF100ng/L,30min后加入ITF0.3g%qL,共培養(yǎng)24h。 三、實(shí)驗(yàn)方法及檢測(cè)指標(biāo) 1、體外腸上皮細(xì)胞屏障模型的建立 應(yīng)用Caco-2細(xì)胞株在transwell上建立體外腸上皮細(xì)胞屏障模型,并應(yīng)用跨上皮細(xì)胞電阻(TEER)和熒光黃透過(guò)率兩種指標(biāo)檢測(cè)腸上皮細(xì)胞屏障的形成情況。 2、PAF對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響 (1)MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力,反映細(xì)胞增殖情況。 (2)用Annexin V-EGFP和Hoechst試劑盒,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)和免疫熒光染色技術(shù),通過(guò)細(xì)胞膜和細(xì)胞核染色聯(lián)合檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 3、PAF對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障通透性的影響和ITF的保護(hù)作用 (1)TEER的測(cè)定:應(yīng)用EVOM測(cè)定Caco-2單層上皮細(xì)胞的TEER。 (2)熒光黃透過(guò)量的檢測(cè):應(yīng)用熒光黃作為標(biāo)記物,檢測(cè)PAF或ITF對(duì)Caco-2細(xì)胞細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。用熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光黃吸光度(激發(fā)波長(zhǎng)427nm,發(fā)射波長(zhǎng)536 nm),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算熒光黃濃度。 4、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞間緊密連接的影響 透射電鏡下觀察加入PAF或/和ITF不同時(shí)間后,Caco-2細(xì)胞間緊密連接形態(tài)學(xué)的改變。 5、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞骨架蛋白F-actin的影響 應(yīng)用羅丹明-鬼筆環(huán)肽(TRITC-phalloidin)特異性熒光探針直接標(biāo)記F-actin,流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定F-actin的含量;直接免疫熒光技術(shù)觀察F-actin的定位和重排情況。 6、PAF對(duì)內(nèi)源性ITF表達(dá)的影響 給予不同濃度PAF作用不同時(shí)間后,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和免疫組化技術(shù)檢測(cè)PAF對(duì)ITFmRNA和蛋白定位的影響。 7、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1,ZO-1表達(dá)和定位的影響 應(yīng)用免疫熒光、蛋白印跡雜交(Western blot)和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1,ZO-1定位和蛋白、基因表達(dá)的變化情況。 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次以上,結(jié)果用Mean±SD表示,統(tǒng)計(jì)由SPSS13.0軟件完成。采用One-Way ANOVA法比較總體和組間差異,P＜0.05認(rèn)為有顯著差異。 結(jié)果 1、利用Caco-2細(xì)胞建立腸上皮細(xì)胞屏障 Caco-2細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),逐漸融合成片,成單層生長(zhǎng),光鏡下呈多角形、不規(guī)則多邊形或鵝卵石樣,相鄰細(xì)胞連接緊密,可見(jiàn)致密的反光帶;TEER值逐漸升高,至21天左右,細(xì)胞形成緊密單層,TEER值達(dá)到300～400Ω/cm~2,對(duì)熒光黃透過(guò)量很小。電鏡下發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈高分化,細(xì)胞間形成完整的緊密連接,絨毛整齊,極性形成,成單層排列。體外腸上皮細(xì)胞屏障建立。 2、PAF對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響 MTT染色發(fā)現(xiàn),即使大劑量的PAF也未影響到細(xì)胞的增殖和細(xì)胞活力,各加藥濃度與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 應(yīng)用Annexin V和Hoechst染色試劑盒,應(yīng)用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè),均未發(fā)現(xiàn)給予PAF后出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡增加(P＞0.05)。 3、PAF對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障通透性的影響和ITF的保護(hù)作用 與對(duì)照組相比,50ng%qLPAF即可引起TEER的下降和熒光黃透過(guò)量的增加,以PAF100ng/L組作用最明顯(P＜0.01);在作用時(shí)間上,PAF100ng/L作用4h后,TEER值開(kāi)始下降(P＜0.01),熒光黃透過(guò)量開(kāi)始升高(P＜0.01),24h這種作用達(dá)到最強(qiáng)(P＜0.01)。預(yù)防和治療性給予ITF后,與模型對(duì)照組相比,TEER有所恢復(fù),熒光黃透過(guò)量減少,預(yù)防組作用更明顯(P＜0.05)。 4、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞間緊密連接的影響 正常Caco-2細(xì)胞,緊密連接結(jié)構(gòu)完整,呈致密的帶狀結(jié)構(gòu)。加入PAF100ng/L作用24h后,電鏡下可見(jiàn)緊密連接結(jié)構(gòu)破壞、斷裂,細(xì)胞間隙增寬。加入ITF0.3 g/L共同作用24h,緊密連接及細(xì)胞極性均部分恢復(fù)。 5、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞骨架蛋白F-actin的影響 在正常Caco-2細(xì)胞,F-actin主要環(huán)繞于細(xì)胞周邊,細(xì)胞中央偶爾可見(jiàn)不規(guī)則纖維絲。細(xì)胞間F-actin排列緊密圓滑,輪廓完整連續(xù),無(wú)明顯間隙,細(xì)胞界限清晰。 PAF作用8-12h后,就可見(jiàn)細(xì)胞骨架F-actin出現(xiàn)重排,外周致密帶邊緣變的毛糙不規(guī)整,細(xì)胞中央有彌散actin及少量應(yīng)力纖維形成。作用24h,出現(xiàn)明顯橫跨細(xì)胞的應(yīng)力纖維結(jié)構(gòu),48h后周邊肌動(dòng)蛋白絲帶變細(xì),斷斷續(xù)續(xù),胞漿內(nèi)仍可見(jiàn)少量應(yīng)力纖維。給予不同濃度的PAF發(fā)現(xiàn),以PAF100ng%qL破壞最為明顯。 當(dāng)預(yù)防或治療性給予ITF并共同培養(yǎng)24h后,正常F-actin染色的細(xì)胞比例增加,周邊肌動(dòng)蛋白絲帶逐漸清晰,胞漿內(nèi)應(yīng)力纖維減少,但外周致密帶邊緣仍毛糙不規(guī)整,環(huán)點(diǎn)狀斷裂未完全修復(fù)。比較而言,預(yù)防性給藥恢復(fù)細(xì)胞骨架正常結(jié)構(gòu)的能力更強(qiáng)。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn):PAF作用8h后,F-actin含量開(kāi)始減少,峰左移;24h后明顯下降,峰左移明顯,48h與24h相比無(wú)明顯差異。PAF100ng%qL組下降最為明顯,與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.01)。給予ITF作用24h,F-actin的含量有所增加,與模型組相比差異顯著(P＜0.01),但仍低于對(duì)照組;峰右移,但未移回原位。 6、PAF對(duì)內(nèi)源性ITF表達(dá)的影響 給予50ng%qL PAF 8h后,ITFmRNA表達(dá)開(kāi)始下降,24h降到最低,48h有所恢復(fù),但與對(duì)照組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。PAF100ng%qL組作用4h ITFmRNA即開(kāi)始下降,24h降到低谷(P＜0.05),48h有所恢復(fù)。進(jìn)一步加大PAF濃度(200ng%qL),與100ng/L組無(wú)明顯差異。 免疫組化顯示在正常Caco-2細(xì)胞中,ITF陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒,位于胞漿內(nèi),胞膜也有少量表達(dá)。給予不同濃度PAF(50,100,200ng%qL)作用24h,ITF表達(dá)減少,染色變淡,以100ng/L組改變最明顯。 7、PAF和ITF對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1,ZO-1表達(dá)和定位的影響 (1)緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1,ZO-1在腸上皮細(xì)胞的定位改變 正常Caco-2細(xì)胞Occludin,Claudin-1,ZO-1主要分布在細(xì)胞內(nèi)近胞膜處,細(xì)胞間連接緊密。PAF50ng%qL作用24h后,Occludin邊緣粗糙呈鋸齒狀,熒光信號(hào)減弱,向膜下轉(zhuǎn)移。隨PAF濃度加大(100ng%qL)改變更加明顯,細(xì)胞間出現(xiàn)間隙,Occludin環(huán)斷裂,崩解,胞漿內(nèi)見(jiàn)陽(yáng)性染色。但PAF濃度繼續(xù)加大(200ng/L),改變并未繼續(xù)加重。Claudin-1,ZO-1表達(dá)位置和變化規(guī)律與Occludin基本一致。預(yù)防和治療性給予ITF后,可明顯減輕Occludin,Claudin-1,ZO-1的破壞,邊緣變得連續(xù),但沒(méi)有完全恢復(fù)。ITF預(yù)防組效果更明顯。 (2)Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表達(dá)的改變 利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品中的Occludin,Claudin-1,ZO-1基因和GAPDH基因進(jìn)行定量,發(fā)現(xiàn)不同濃度PAF組與正常對(duì)照組比較Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA的水平均有降低,以PAF 100ng/L組改變最明顯(P＜0.01),三者變化趨勢(shì)一致;基因水平從4h開(kāi)始降低,到24h降到低谷,48h有所恢復(fù)。以PAF 100ng/L組作為模型組,預(yù)防或治療性給予ITF0.3g%qL作用24h,預(yù)防和對(duì)照組Occludin,Claudin-1,ZO-1基因表達(dá)均較模型組增強(qiáng),但未恢復(fù)到對(duì)照組水平,預(yù)防組作用更明顯(P＜0.05),但兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 (3)Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白表達(dá)的改變 Occludin和Claudin-1發(fā)揮功能需要絲氨酸和蘇氨酸殘基磷酸化,磷酸化會(huì)使分子量上調(diào)。 應(yīng)用Western blot法對(duì)Occludin進(jìn)行蛋白雜交,發(fā)現(xiàn)兩條蛋白條帶,分別在65kDa和80kDa,灰度分析發(fā)現(xiàn)各組標(biāo)本65kDa的蛋白含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是對(duì)于80kDa的蛋白含量,PAF組較對(duì)照組明顯下降并呈劑量依賴性(P＜0.01); 對(duì)Claudin-1進(jìn)行蛋白雜交,發(fā)現(xiàn)25kDa和20kDa兩條蛋白條帶,20kDa的蛋白含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),但是25kDa的蛋白含量,PAF組較對(duì)照組明顯下降并呈劑量依賴性(P＜0.01); 對(duì)ZO-1進(jìn)行蛋白雜交,發(fā)現(xiàn)在220kDa處出現(xiàn)特異性蛋白條帶,其灰度隨PAF給藥濃度的增加而降低,以PAF 100ng%qL作用24h降到最低,與對(duì)照組相比P＜0.01。 預(yù)防或治療性給予ITF后,三者的蛋白表達(dá)較模型組增強(qiáng),但未恢復(fù)到對(duì)照組水平,與mRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)具有一致性。 結(jié)論 1、培養(yǎng)2-3w的Caco-2細(xì)胞可作為體外研究腸上皮細(xì)胞屏障的工具。 2、PAF可直接破壞腸上皮細(xì)胞屏障,其增加腸上皮細(xì)胞通透性的作用是凋亡非依賴性的,其作用位點(diǎn)在旁細(xì)胞途徑。 3、ITF可以通過(guò)恢復(fù)緊密連接的結(jié)構(gòu)降低腸通透性,從而發(fā)揮其保護(hù)作用。 4、PAF引起細(xì)胞骨架F-actin的重排和再分布以及蛋白含量的減少,是PAF引起腸上皮細(xì)胞屏障通透性增加的機(jī)制之一。 5、PAF使內(nèi)源性ITF基因和蛋白表達(dá)減少,抑制了腸道的自我保護(hù)和修復(fù)能力。 6、外源性重組ITF部分逆轉(zhuǎn)細(xì)胞骨架F-actin的重排和再分布,可以作為一個(gè)腸道保護(hù)因素。 7、PAF可以引起緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1和ZO-1的基因和蛋白水平的改變以及異常分布,具有劑量和時(shí)間依賴性,且三者的改變具有協(xié)同性,這可能是PAF引起腸上皮細(xì)胞屏障破壞的內(nèi)在機(jī)制。 8、ITF可以部分恢復(fù)緊密連接蛋白Occludin,Claudin-1和ZO-1的基因和蛋白水平改變以及異常分布,恢復(fù)緊密連接的正常結(jié)構(gòu),可能是其保護(hù)腸黏膜屏障的一個(gè)重要機(jī)制。
【圖文】：

8400.7707士.017320夕999200.7573士.012170.81210100.8063士.002730.7103、PAF對(duì)細(xì)胞凋亡的影響在正常細(xì)胞中，PS(磷脂酞絲氨酸)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。AnnexinV是一種分子量35一36KD的C擴(kuò)+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，與凋亡早期細(xì)胞的膜結(jié)合，因此，AnnexinV被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。另外，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮。用Hoechst染色時(shí)，細(xì)胞核會(huì)呈致濃染，或呈碎塊狀致密濃染。是一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用AlinexinV和Hoechst染色試劑盒，應(yīng)用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀測(cè)，均未發(fā)現(xiàn)給予PAF后出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡增加(圖1.1，圖片1.3下，1.3上)

TEER值即有所下降，但與加入隊(duì)F前比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;4h開(kāi)始TE值明顯下降，，24h達(dá)到最低，與加入PAF前比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0提示PAF降低Caco一2細(xì)胞的TEER還具有時(shí)間依賴性。預(yù)防和治療性給予IT后，TEER有所恢復(fù)，預(yù)防組作用更明顯(P<0.05)(表1.2，圖1.2)。表1.2，不同濃度隊(duì)F和rrF致Caco一2單層上皮細(xì)胞TEER的下降ControlPAF(50ng/L)PAF(100n留L)PAF(200n歲L)ITFPreITFtreZh4575士19.7480.75士12.36123.5肚2409△110.75土24.08么52.00士24.78*81.5肚15.584h52.75士9.7180.0肚18.57*137.25士23.17△△11700士21.11△4275士24.16*85.5肚9.31sh69.75士18.0798.75士7.85*158.25士2631必12725土25.56△53.25士22.87*9575士12.47*12h61.00士14.0878.5肚19名l*136.25士29.74△125.25士2735△54.50士26名4*92.75士11.5224h52.75士157491.50士11.78*146.75士26.69砧143.75士2509必53.75士18.28**99.0肚13.1648h45.25士18.8998.25士1.84133.0肚24.36砧118.75士2542必52.25士13.85**98.0肚12.23△與control相比p<0.05△△p<0.01*與PAF(100。g/L)相t匕p<0.05**p<0.01
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R725.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 李軍;許玲芬;孫梅;李強(qiáng);高紅;姜衛(wèi)國(guó);;腸三葉因子在內(nèi)毒素致幼鼠腸損傷中的作用及意義[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2006年05期

2 仝巧云,羅和生,朱宗耀,周納新,盛崇明;慢性應(yīng)激對(duì)大鼠結(jié)腸粘蛋白muc2表達(dá)的影響[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2005年05期

3 王麗杰;劉春英;許玲芬;高紅;姜衛(wèi)國(guó);孫梅;;血小板活化因子受體拮抗劑對(duì)幼年大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的影響[J];世界華人消化雜志;2006年04期

4 崔巍;馬力;聞穎;劉沛;;暴發(fā)性肝衰竭時(shí)腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)下降[J];世界華人消化雜志;2006年31期

5 崔巍;劉冬妍;馬力;劉沛;;TNF-α對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)的作用[J];世界華人消化雜志;2007年16期

6 陳麗萍,張丙宏,李艷,麥根榮,劉仲熊;腸三葉因子對(duì)新生鼠缺氧腸損傷模型白細(xì)胞介素8、丙二醛的影響及意義[J];中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

7 于秀文,馮美燕,王靜芬;粘蛋白MUC1、MUC2在大腸腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];腫瘤防治研究;2004年04期

本文編號(hào)：2698948