【摘要】： 背景和目的: 原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome,PNS)是一組由多種原因引起的腎小球?yàn)V過膜通透性增加,導(dǎo)致血漿內(nèi)大量蛋白質(zhì)從尿中丟失的臨床綜合征。血脂代謝紊亂不僅是其典型的臨床表現(xiàn)和診斷依據(jù),而且還參與了進(jìn)行性腎臟損害等病理生理過程,對(duì)疾病預(yù)后影響重大。低蛋白血癥和低血漿膠體滲透壓促進(jìn)肝臟代償性合成脂蛋白增加,其中分子量較大的組分難以從腎臟排出而蓄積于體內(nèi),可能是導(dǎo)致PNS患兒高脂血癥(hyperlipidemia,HLP)的主要機(jī)制。此外,近年來很多研究還提示PNS發(fā)病具有一定的遺傳基礎(chǔ),在蛋白尿及HLP的嚴(yán)重程度等方面表現(xiàn)出明顯的個(gè)體差異。因此,了解PNS患兒血脂代謝紊亂的特點(diǎn)、探討HLP發(fā)生的遺傳機(jī)制,對(duì)于早期阻斷慢性腎臟疾病進(jìn)展、祛除心血管疾病(Cardiovascular Disease,CVD)高危因素、解釋疾病易患性、實(shí)施個(gè)體化治療、改善患兒預(yù)后具有重要的意義。 載脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)不僅有助于將外周膽固醇(cholesterol,CH)轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟經(jīng)代謝清除,而且還可以增加腎小球?yàn)V過膜硫酸肝素蛋白多糖的含量,抑制系膜細(xì)胞增殖。但apoE基因突變是否會(huì)加重PNS患兒腎小球?yàn)V過膜損傷,促進(jìn)尿蛋白排泄和血脂代謝紊亂,尚存在爭(zhēng)議。 載脂蛋白B(apolipoprotein B,apoB)除了在血脂轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝途徑中發(fā)揮重要作用以外,還具有較強(qiáng)的刺激巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇(cholesterol,CH)酯化,促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成等作用。然而,apoB基因的遺傳變異與PNS患兒血脂代謝紊亂的關(guān)系,至今卻未見報(bào)道。 本研究在了解PNS患兒血脂代謝紊亂特點(diǎn)及臨床意義的基礎(chǔ)上,運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chainreaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技術(shù)結(jié)合測(cè)序的方法分析apoE和apoB基因多態(tài)性,以探討其對(duì)PNS患兒血脂代謝的影響。 方法: 1.150例PNS患兒和100例健康兒童均空腹12h以上清晨采靜脈血,PNS患兒同時(shí)收集24h尿液,以甲苯防腐�？偰懝檀�(totalcholesterol,TC)、甘油三酯(triglyeride,TG)和脂蛋白a(lipoprotein a,LPa)用酶法測(cè)定,高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)用選擇沉淀法測(cè)定,非.高密度脂蛋白膽固醇(nonhigh density lipoprotein-cholesterol,nonHDL-C)等于TC減去HDL-C,LDL-C濃度采用液體雙試劑法測(cè)定,載脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apoA1)和apoB以免疫比濁法測(cè)定。血清總蛋白(total protein,TP)用雙縮脲法測(cè)定,白蛋白(albumin,A1B)和球蛋白(globulin,GLO)用溴甲酚綠法測(cè)定。24h尿蛋白定量(24 hours urine protein,24hUPr)以雙縮脲比色法測(cè)定。 2.PCR-RFLP技術(shù)結(jié)合測(cè)序的方法分析apoE和apoB基因多態(tài)性,并根據(jù)平衡法計(jì)算出各等位基因頻率。 結(jié)果: 1.腎病組血清TP、A1B、白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)和apoA1/B顯著低于對(duì)照組(P＜0.01);而LPa、TC、TG、HDL-C、nonHDL-C、LDL-C、LDL-C/HDL-C和apoB顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。 2.腎病組24hUPr分別與血清TP、A1B及GLO呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。 3.腎病組24hUPr分別與血清LPa、HDL-C及apoA1/B呈顯著正相關(guān)(P＜0.05);血清TP分別與TC、nonHDL-C、LDL-C、LDL-C/HDL-C及apoA1/B呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05);血清A1B分別與LPa、TC、nonHDL-C、LDL-C、LDL-C/HDL-C、apoB及apoA1/B呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05);血清GLO分別與TC、nonHDL-C及LDL-C呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05);A/G分別與LPa、TC、nonHDL-C、LDL-C、LDL-C/HDL-C、apoB及apoA1/B呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。 4.腎病組共檢出apoE 6種基因型,分別為純合子E2/2 4例(2.67%),E3/3 117例(78.00%),E4/4 5例(3.33%),雜合子E3/2 13例(8.67%),E4/2 5例(3.33%),E4/3 6例(4.00%);根據(jù)平衡法算出等位基因e2頻率為8.67%,e3頻率為84.33%,e4頻率為7.00%。對(duì)照組共檢出5種基因型,分別為純合子E3/3 73例(73.00%),E4/4 5例(5.00%),雜合子E3/2 15例(15.00%),E4/2 1例(1.00%),E4/3 6例(6.00%);根據(jù)平衡法算出等位基因e2頻率為8.00%,e3頻率83.50%,e4頻率為8.50%。腎病組和對(duì)照組apoE吾基因型及等位基因頻率分布未見顯著差異(P＞0.05)。 5.健康兒童和PNS患兒apoE不同基因型及等位基因間各項(xiàng)血脂指標(biāo)均未見明顯差異(P＞0.05)。 6.腎病組檢出apoB基因Xba I位點(diǎn)3種基因型,分別為X-/X-132例(88.00%),X+/X-17例(11.33%),X+/X+1例(0.67%);等位基因X-頻率為93.67%,X+頻率為6.33%。對(duì)照組檢出X-/X-95例(95.00%),X+/X-5例(5.00%),未發(fā)現(xiàn)X+/X+基因型;等位基因X-頻率為97.50%,X+頻率為2.50%。腎病組和對(duì)照組Xba I位點(diǎn)各基因型及等位基因頻率分布未見顯著差異(P＞0.05)。 7.腎病組檢出apoB基因EcoR I位點(diǎn)3種基因型,分別為E-/E-15例(10.00%),E+/E-17例(11.33%),E+/E+118例(78.67%);等位基因E-頻率為15.67%,E+頻率為84.33%。對(duì)照組檢出E-/E-8例(8.00%),E+/E-13例(13.00%),E+/E+79例(79.00%);等位基因E-頻率為14.50%,E+頻率為85.50%。腎病組和對(duì)照組EcoR I位點(diǎn)各基因型及等位基因頻率分布未見顯著差異(P＞0.05)。 8.腎病組檢出apoB基因Msp I位點(diǎn)3種基因型,分別為M-/M-1例(0.67%),M+/M-12例(8.00%),M+/M+137例(91.33%);等位基因M-頻率為4.67%,M+頻率為95.33%。對(duì)照組檢出M+/M-2例(2.00%),M+/M+98例(98.00%),未發(fā)現(xiàn)M-/M-基因型;等位基因M-頻率為1.00%,M+頻率為99.00%。腎病組和對(duì)照組Msp I位點(diǎn)各基因型及等位基因頻率分布未見顯著差異(P＞0.05)。 9.攜帶等位基因X+的健康兒童和PNS患兒血清LPa、TC、nonHDL-C、LDL-C、LDL-C/HDL-C及apoB濃度明顯高于X-者(P＜0.05),而apoA1/B則顯著降低(P＜0.01)。 10.E-/E-可顯著升高健康兒童血清LPa、TC、HDL-C及apoA1濃度(P＜0.05),攜帶等位基因E-的健康兒童血清LPa、TC及.HDL-C濃度顯著高于攜帶E+者(P＜0.05);攜帶等位基因E-的PNS患兒血清LPa濃度明顯高于E+者(P＜0.05)。 11.PNS患兒apoB基因Msp I位點(diǎn)不同等位基因間各項(xiàng)血脂指標(biāo)均未見明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論: 1.PNS患兒存在明顯的血脂代謝紊亂。大量蛋白尿可能是PNS患兒繼發(fā)血脂代謝紊亂的主要原因。 2.apoE和apoB基因Xba I、EcoR I和Msp I位點(diǎn)各基因型和等位基因在人群中分布存在一定程度的地域差異。 3.apoE各基因型及等位基因分布在健康兒童及PNS患兒間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且PNS患兒apoE不同基因型及等位基因間各項(xiàng)血脂指標(biāo)亦未見明顯差異。 4.apoB基因Xba I、EcoR I和Msp I位點(diǎn)各基因型及等位基因在腎病組和對(duì)照組兒童之間的分布無顯著性差異。apoB等位基因X+和E-可能會(huì)增加PNS患兒繼發(fā)HLP易患性。對(duì)于攜帶X+和E-的患兒應(yīng)注意監(jiān)測(cè)血脂狀況,盡早調(diào)整飲食,必要時(shí)加用降脂藥物。
【圖文】：

250bp240bP100b圖2一 1ap0E基因PCR產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳FigureZ一 12%agarosegelelectroPhorogramofaPoEPCRProduct~哈矚湯簇巧ob!兔喇味咖鄉(xiāng)，碑、.、‘泊眺，，圖2· 2ap0E基因醉切產(chǎn)物20%聚丙烯酸胺凝膠電泳注:M為DNAMarker;6為EZ/2;l，3，8，9，11，13

190200210220 CCGATGACCTGC盛GAAGCGCCTGGCAGTGTACC圖2一 3ap0E各基因型PCR產(chǎn)物側(cè)序結(jié)果注:圖中下劃線位置為apoE各基因多態(tài)性位置，A一l和A一2為EZ/2;B一l和B一2為E3/3;C一1和C一2為E4/4;D一1和D一2為E3/2;E一1和E一2為E4/2;F一1和F一2為E4/3FigureZ一 3DNAsequencingof6aPoEPCRProductsSitesofunderiinewereH五 a1Polylnorphielocus，A一 1andA一2:EZ/2;B一 1andB一2:E3/3;C一 1andC一2:E4/4;D一 1andD一2:E3/2;E一 1andE一2:E4/2;F一 1andF一2:E4/3二、ap0E各基因型及等位基因在不同地區(qū)健康人群間的分布情況1、對(duì)照組共檢出5種基因型，分別為純合子E3/373例(73.00%)，E4/45例(5.00%)，雜合子 E3/215例(15.00%)，E4/2l例(1.00%)，E4/36例 (6.00%);根據(jù)平衡法算出等位基因e2頻率為8.00%
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R726.9

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本文編號(hào)：2698349