【摘要】： 新生兒缺氧缺血性腦病(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是導(dǎo)致新生兒傷殘的主要的疾病之一,它的診斷與規(guī)范治療問題仍是國內(nèi)外同道關(guān)注的熱點(diǎn)。目前對HIBD的防治研究主要集中在谷氨酸受體拮抗劑、NO合成抑制劑、鈣通道阻滯劑、氧自由基清除劑和抑制劑、神經(jīng)節(jié)苷脂、亞低溫、大劑量苯巴比妥,但僅用于實(shí)驗(yàn)性治療,其效果和安全性均存在爭議,因此尋找一種有效而可行的腦保護(hù)途徑十分有必要。 低體積分?jǐn)?shù)氧(低氧)預(yù)處理(Hypoxic preconditioning,HP)是指一次或多次短暫的輕度缺氧后,觸發(fā)機(jī)體內(nèi)在的防護(hù)機(jī)能,從而對隨后發(fā)生的嚴(yán)重缺血/缺氧產(chǎn)生防御和保護(hù)作用。HP目前已成為抗缺血/缺氧研究的熱點(diǎn)之一,已經(jīng)被證實(shí)對腦、心臟、視網(wǎng)膜、肝臟、腎臟以及其他多種器官具有保護(hù)作用,目前關(guān)于腦低氧預(yù)處理現(xiàn)象及其機(jī)制的研究頗多,研究發(fā)現(xiàn)低氧預(yù)處理與缺氧誘導(dǎo)因子、NO、腺苷、興奮性氨基酸、自由基及一些細(xì)胞因子等關(guān)系密切。 腦紅蛋白(Neuroglobin,Ngb)是類似血紅蛋白和肌紅蛋白的一種重要攜氧球蛋白,攜氧球蛋白是一類與呼吸功能密切相關(guān)的蛋白質(zhì),其共同特性是可以把O_2攜帶至有氧代謝的呼吸鏈。Ngb在人和哺乳動物的多種組織內(nèi)都有表達(dá),但主要存在于腦組織和視網(wǎng)膜中,它能夠可逆性地與氧結(jié)合,且與氧有很高的親和力,能夠特異性地釋放氧以供腦組織代謝需要,在神經(jīng)系統(tǒng)氧的攝取、運(yùn)輸和利用等生理過程中起著極其重要的作用。 本實(shí)驗(yàn)從腦缺血損傷發(fā)生的早期入手,研究低氧預(yù)處理對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時腦紅蛋白變化的影響,深入探討腦紅蛋白這一蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)的重要意義。 目的觀察低氧預(yù)處理對缺氧缺血性腦損傷(HIBD)新生大鼠腦紅蛋白(Ngb)變化的影響,探討低氧預(yù)處理與Ngb的關(guān)系。 方法隨機(jī)將出生7天Wistar大鼠120只分為三組假手術(shù)組(n=20)腦缺血組(HIBD組)(n=50)低氧預(yù)處理后HIBD組(HP后HIBD組)(n=50)。HIBD組和HP后HIBD組在模型建立后1,5,15,30和60分鐘各個時間點(diǎn)再分為五個亞組,采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎的方法建立HIBD模型,應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)PCR法(RT-PCR)和免疫組化的方法檢測在低氧預(yù)處理干預(yù)下腦缺氧缺血后Ngb mRNA及蛋白質(zhì)在不同時間的表達(dá)量。 結(jié)果RT-PCR半定量分析:HIBD組Ngb mRNA在1,5分鐘時相對表達(dá)量(A=目的基因表達(dá)量/內(nèi)參表達(dá)量:1.59±0.20,1.98±0.22)分別高于假手術(shù)組(A:1.52±0.25)(P均＜0.05):15,30,60分鐘時表達(dá)下降(A:1.55±0.28,1.52±0.25,1.51±0.24),與假手術(shù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。與HIBD組比較,HP后HIBD組1,5分鐘時Ngb mRNA相對表達(dá)量增加(A:1.60±0.26,1.99±0.30),15,30和60分鐘時下降(A:1.56±0.23,1.53±0.20,1.53±0.27),但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。免疫組化結(jié)果顯示HP后HIBD組Ngb在1,5,15,30,60分鐘平均光密度um(195.0±11.26,202.41±12.2,182.6±15.72,178.22±14.37,164.86±28.99)與HIBD組平均光密度um(195.59±11.59,201.4±13.61,178.09±18.92,173.75±14.3,163.45±18.66)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05),與PCR的結(jié)果是一致的。 結(jié)論低氧預(yù)處理對新生大鼠的腦保護(hù)作用與腦紅蛋白含量的變化無相關(guān)性。
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圖1:假手術(shù)組與日舊O組Ngb相對表達(dá)量比較2，Hp后HIBD組NgbmRNA在1，5，15，，3omin和6omin與HIBD組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(外0.05)，表2，圖2，圖31，圖32。表ZHIBD組與HP后HIBD組不同時間腦紅蛋白m朋A相對表達(dá)量(牙土，)的比較分組例數(shù)lminsmill15min30mill60mHIBD組25HP后HIBD組251.59士0.201.60士0.261.98士0.221.55士0.281.52士0.251.51士].99士0.301.56士0.231.53士0.201.53士0.580.070.960.720.5各組間不同時間點(diǎn)兩兩比較，P>0.052.5.....HIBD組組層層鑫攀叁奎刃HP后HIBD組組摹纂鬢纓摹鬃蒸黝鷺鄂

本文編號：2696707