【摘要】： 目的:通過(guò)經(jīng)腦室移植人神經(jīng)干細(xì)胞(human neural stemcells,hNSCs)配合高壓氧(hyperbaric oxygenation,HBO)治療,觀察HBO對(duì)植入的hNSCs存活、遷移、分化的影響。 方法:利用7日齡(d7)Wistar大鼠采用Rice法復(fù)制HIBD模型,并隨機(jī)分為HIBD組(n=20)、移植組(n=24)、HBO組(n=20)和移植+HBO組(n=24)。利用體外培養(yǎng)的方法制備hNSCs單細(xì)胞懸液,d10時(shí)采用側(cè)腦室微量注射法進(jìn)行hNSCs移植,于移植后15分鐘內(nèi)開(kāi)始HBO治療,每日1次,連續(xù)10d。于d11,d12,d13,d20時(shí)利用原位缺口末端染色法(TUNEL法)進(jìn)行皮質(zhì)和海馬區(qū)凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。d20行病理檢查,并應(yīng)用免疫熒光組化染色法檢測(cè)移植組和移植+HBO組植入細(xì)胞存活、遷移、分化情況。 結(jié)果: 1.胎兒腦組織體外培養(yǎng)12天可獲得hNSCs球,免疫熒光標(biāo)記顯示為Nestin陽(yáng)性細(xì)胞,經(jīng)誘導(dǎo)分化后NF、GFAP染色呈陽(yáng)性,提示其具有NSCs特性。 2.TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù):d11時(shí)各組大鼠腦組織皮層和海馬區(qū)均可檢測(cè)到凋亡細(xì)胞,與HIBD組比較,HBO組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的差異不具有顯著性,而移植組和移植+HBO組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞減少,差異具有顯著性(均P＜0.01);移植組和移植+HBO組兩組間比較差異也具有顯著性(P＜0.01)。d20時(shí),與HIBD組比較,HBO組、移植組和移植+HBO組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞減少,差異均具有顯著性(均P＜0.01),移植組和移植+HBO組兩組間比較差異也具有顯著性(P＜0.01)。 3.d20時(shí)免疫熒光染色結(jié)果顯示植入細(xì)胞從側(cè)腦室向周圍腦實(shí)質(zhì)廣泛遷移,分布在腦室旁、腦白質(zhì)通路、丘腦、皮層及海馬等處,在遷移方式與分布上,移植組和移植+HBO組無(wú)明顯差異,但移植+HBO組植入細(xì)胞的存活數(shù)量高于移植組,其差異具有顯著性(P＜0.01);兩組均可檢測(cè)到hNSCs分化形成的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞和未分化的hNSCs,細(xì)胞形態(tài)與宿主細(xì)胞相似。 結(jié)論: (1)來(lái)源于人的胎腦NSCs移植至HIBD新生鼠腦后,植入細(xì)胞能存活、遷移并可分化為神經(jīng)元及星型膠質(zhì)細(xì)胞。 (2)hNSCs移植對(duì)HIBD大鼠受損腦組織有保護(hù)和修復(fù)作用。 (3)HBO治療可通過(guò)促進(jìn)植入細(xì)胞的存活、遷移和分化而增強(qiáng)NSCs移植的上述保護(hù)作用。
【圖文】：

碩士學(xué)位論文第三部分附圖第三部分附圖圖3一1圖3一2汁粉陣一圖3一3圖3一4圖3一l圖3一2圖3一3圖3-4圖3一5圖3一6圖3一5圖3一620日齡HIBD組大鼠大腦TTC染色左側(cè)大腦半球姜縮明顯，右側(cè)大腦半球染色呈紅色，，左側(cè)半球損傷處，染色呈白色。20日齡移植組大鼠大腦TTC染色左側(cè)大腦半球輕度姜縮，可見(jiàn)軟化灶。20日齡 HBO組大鼠大腦TTC染色左側(cè)大腦半球輕度姜縮，可見(jiàn)軟化灶。20日齡移植+HBO組大鼠大腦TTC染色左右腦半球大致對(duì)稱，染色呈紅色，未見(jiàn)軟化灶及液化灶。20日齡HIBD組大鼠左側(cè)大腦海馬區(qū)HE染色(xlo倍)細(xì)胞排列散亂，神經(jīng)元丟失明顯。20日齡移植組大鼠左側(cè)大腦海馬區(qū)HE染色(xlo倍)細(xì)胞排列相對(duì)整齊，可見(jiàn)神經(jīng)元丟失。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R459.6;R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2696320