【摘要】：目的 妊娠期為了保證胚胎不受母體排斥,孕婦的免疫活性受到抑制,這使得母親與胎兒的雙向細胞交換成為微嵌合體形成的最主要機制。妊娠后母體內(nèi)的微嵌合體引起多種自身免疫病的證據(jù)已經(jīng)較為確鑿,同時有研究發(fā)現(xiàn)微嵌合體可引發(fā)免疫缺陷患兒的膽道閉鎖樣表現(xiàn),本研究探討了膽道閉鎖發(fā)病機制與母源性微嵌合體的相關(guān)性。 方法 選取石蠟包埋肝臟組織20例,每例連續(xù)4μm切片6張。在光學顯微鏡下觀察HE染色切片,選定靶區(qū)域。5張切片間隔0.5min梯度酶消化2-4mins。DAPI浸染充分后,在熒光顯微鏡下觀察每張切片靶區(qū)域的整體消化程度,按理想時間消化第6張切片并加探針變性雜交,洗滌后觀察熒光信號并計數(shù),初步建立石蠟包埋組織熒光原位雜交的理想消化時間及雜交信號的判讀方法。在12例膽道閉鎖和8例嬰兒肝炎綜合征、2例膽總管擴張癥的男性肝臟組織石蠟切片中,采用熒光原位雜交染色體計數(shù)探針,熒光標記細胞中的X、Y染色體,計數(shù)細胞核中2條X染色體的母體細胞。 結(jié)果 通過鏡下所見是判斷石蠟包埋組織FISH理想消化時間的有效方法:在熒光顯微鏡DAPI通道見藍色細胞核完整均一,離散良好,FITC通道見綠色細胞核邊線完整、輪廓清晰時達到FISH理想消化時間,雜交可獲滿意熒光信號;異質(zhì)性組織切片需依據(jù)靶區(qū)域整體消化程度判斷理想時間;選擇熒光信號清晰可辨、DAPI染色均一、邊緣清楚的獨立細胞進行分析。在12例膽道閉鎖肝臟組織切片中均可發(fā)現(xiàn)母體細胞,在10例對照組肝臟組織切片中也可發(fā)現(xiàn)母體細胞;在肝臟組織切片的30個可讀視野中,病例組和對照組母體細胞的數(shù)量分別是11±2.59和1.8±1.69(P0.01),差異有顯著統(tǒng)計學意義。 結(jié)論 膽道閉鎖肝臟組織中母源性微嵌合體的數(shù)量顯著高于其他新生兒肝病,母源性微嵌合體可能與膽道閉鎖的發(fā)病機制相關(guān)。
【圖文】：

圖 1A-B 觀察單個細胞：消化未過度時，完整的細胞核（圖 A 黃→）綠色邊緣線連續(xù)（圖 B 黃→）；開始出現(xiàn)消化過度，可見黑洞樣殘缺（圖 A 紅→）、綠色邊緣線不連續(xù)（圖 B 紅→）；隨著消化過度加重，黑洞樣殘缺加大（圖A 白→）、綠色邊緣線不連續(xù)加重（圖 B 白→）。

圖 3 消化過度的切片，前者（圖 ACE）過度程度較后者（圖 BDF）為輕。整體可見視野模糊，，細胞核輪廓不清，核間質(zhì)渣樣，過度較重整個視野呈現(xiàn)渣樣（圖 B），殘缺細胞核的比例增多（圖 C，D）。未過度的細胞核完整清晰（紅→）（圖 C，D）, 綠色邊線完整（紅→）（圖 E，F(xiàn)）；消化過度的細胞核出現(xiàn)不同程度的黑洞樣殘缺（綠→）
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R726.5

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